胡蘿卜愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)(實驗報告)-資料下載頁
2025-02-04 16:11本頁面
【導(dǎo)讀】劑，鞏固相關(guān)理論基礎(chǔ)知識；2）、通過本次實驗，使學(xué)生進一步熟悉配制培養(yǎng)基的流程及操作中應(yīng)注意的事項，學(xué)會設(shè)計和篩選胡蘿卜愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方；3）、通過本次實驗，使同學(xué)能夠熟練掌握外植體的表面消毒技術(shù)和無菌操作技術(shù)；養(yǎng)基，以便能培養(yǎng)出下次細胞培養(yǎng)的材料；悉、規(guī)范無菌操作技術(shù)。1）、培養(yǎng)基是植物離體培養(yǎng)組織和細胞賴以生存的營養(yǎng)基質(zhì)[1]。的培養(yǎng)基母液，待使用時稀釋到要求的濃度。20倍、50倍、100倍等或更高。度，再加入瓊脂、蔗糖、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)等，制備成符合要求的培養(yǎng)基。3）、接種胡蘿卜肉質(zhì)根誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生；5）、接種胡蘿卜愈傷組織進行增殖；6）、實驗結(jié)果觀察記錄。藥勺、稱量紙、標(biāo)簽紙、封口膜、橡皮筋/棉線、電爐、高壓蒸汽滅菌鍋、電磁爐等。糖、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、蒸餾水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH、織繼代培養(yǎng)基、蒸餾水等。7H2O、KH2PO4幾種無機鹽來供應(yīng)[3]，它們可配在同一母。用時每配lL培養(yǎng)基取該溶液5ml。
【正文】 中，一定要注意無菌操作，否則，任何一個環(huán)節(jié)染菌都會導(dǎo)致外植體被污染，實驗失敗。 2）已接種好的材料，愈傷組織發(fā)生不好的或是沒有發(fā)生的?？赡苁怯捎冢孩僭谂渲婆囵B(yǎng)基時，缺乏 某種物質(zhì)或沒有將培養(yǎng)基混合均勻；②在分裝培養(yǎng)基時，沒有進行均勻傾倒；③所使用材料沒有將其表面切除，因其結(jié)構(gòu)被 HgCl2破壞而無法使組織材料愈傷組織化。 外植體的選擇很重要，由于實驗中選了比較小的胡蘿卜，與其他組相比愈傷組織的量或是色澤方面都較差，也許是因為不一樣大小的胡蘿卜，但消毒時間（ 30min）是一樣的，可能使得胡蘿卜組織受傷較重。外植體經(jīng)過消毒等處理，可在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，誘導(dǎo)脫分化形成愈傷組織，愈傷組織再在繼代培養(yǎng)基上可以增殖得到更多更好的愈傷組織。 （ 2） .愈傷組織繼代培養(yǎng) 愈傷組織繼代 培養(yǎng)中 ，培養(yǎng)基全部被污染了，可能的原因如下： ① 接種前，胡蘿卜切塊太小，只留下分化程度較高的木質(zhì)部和髓部，嚴(yán)重影響了脫分化和再分化的速率； ② 胡蘿卜愈傷組織繼代培養(yǎng)時接種的胡蘿卜愈傷組織不純； ③ 接種取的愈傷組織較硬，切塊均較大，不是Ⅱ型愈傷組織； ④ 在操作過程中， 可能是因為接種時用力將切塊壓入培養(yǎng)基，破壞了培養(yǎng)基，同時滋生了一系列的好氧細菌的繁殖； ⑤ 外植體滅菌不徹底，帶入細菌； ⑥ 消毒液消毒的時間不夠?qū)е聹缇粡氐?,或時間過長影響到外植體的生長活性； ⑦ 未嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作技術(shù)導(dǎo)致滅菌不徹底，器械上帶菌； 或是操作過程中 手不小心碰到了培養(yǎng)皿或瓶口，帶入了手上的細菌。 愈傷組織繼代培養(yǎng)中， 注意看會有一些小黑點，原因是愈傷組織開始老化，部分開始分化 愈傷組織生長需要大量的營養(yǎng)，由于培養(yǎng)時間過長，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分及水分不能滿足愈傷組織的繼續(xù)生長和生活，故出現(xiàn)死亡。 實驗討論 1） .調(diào)節(jié)培養(yǎng)基 PH 時，理論上應(yīng)調(diào)至 為宜，但因其培養(yǎng)基經(jīng)高溫高壓滅菌后，蔗糖會分解， PH 值會有所下降，因此 PH 值調(diào)至 可減小誤差。 2） .植物組織培養(yǎng)實驗中，必須的前提是：無菌操作，胡蘿卜肉質(zhì)根（外植體）經(jīng)HgCl2 和酒精消毒后，即認為是消 毒干凈，在此后的操作中，要注意對其用具徹底消毒，操作過程中動作要規(guī)范實施。 3） .廢液進行回收處理，酒精、 HgCl2浸泡完材料后，應(yīng)統(tǒng)一倒入指定容器。 4） .切胡蘿卜時，下方要墊上無菌濾紙。 5） .接種時，動作要輕，力度要適中，不要把接種的材料切塊壓入到培養(yǎng)基里面，以致破壞培養(yǎng)基；切塊大小要適中，不宜太大，也不宜太小。 6） .MS 培養(yǎng)基的特點：①無機鹽濃度高；②高含量的氮、鉀，尤其是硝酸鹽；③有一定數(shù)量的銨鹽，營養(yǎng)豐富；④不需要添加更多的有機附加物。 7).植物組織培養(yǎng)所需的環(huán)境條件： 與自然條件一樣 ，組織培養(yǎng)中的材料的生長要受到溫度、光照、濕度等各種物理條件，不同氣體、培養(yǎng)基的組成、 PH 值和滲透壓等各種化學(xué)條件，以及外植體部位、大小、細胞密度等各種生物條件等環(huán)境條件的影響。實驗中要注意考慮這些條件的影響，并采取適當(dāng)?shù)拇胧┛刂坪门囵B(yǎng)條件。 8).植物組織培養(yǎng)所需的營養(yǎng)成分： 植物體內(nèi)至少含有幾十種化學(xué)元素，其中大部分元素在植物體的內(nèi)部起到了一定的生理作用：①組成各種化合物，參與集體的建設(shè)，成為結(jié)構(gòu)物質(zhì)；②構(gòu)成一些特殊的生理活性物質(zhì)，參與活躍的新陳代謝；③元素之間相互協(xié)調(diào)，以維持離子濃度平衡、膠體穩(wěn)定、電 荷平衡等電化學(xué)方面的作用；④發(fā)育方面：特定的元素影響植物的形態(tài)發(fā)生和組織、器官建成。 實驗總結(jié) 1）、植物組織培養(yǎng)實驗過程需要嚴(yán)格的無菌操作，而且一般歷時較長，要將實驗過程中的每一部分的操作內(nèi)容記錄下來，若出現(xiàn)問題方便排查問題所在。 2）、實驗中使用的培養(yǎng)基配方都是沿用前人所研究的最適合的配方，實驗只是掌握了植物組織培養(yǎng)技術(shù)的一般操作步驟和方法。 3）、植物組織培養(yǎng)實驗中無菌操作是一個精細的活，是實驗成敗的關(guān)鍵。我們在實驗中一定要慎之又慎，確保每一步操作都盡量無菌，盡量排除人為因素對實驗的影響，體現(xiàn)嚴(yán) 謹?shù)目茖W(xué)態(tài)度。 4） 、在配培養(yǎng)基時，也要注意加入藥品的先后順序及藥品濃度和量，嚴(yán)格計算和稱取加量，并注意調(diào)培養(yǎng)基的 PH。盡量不要讓已知培養(yǎng)基成分的培養(yǎng)基增加許多不確定因素。 5）、 親身體 會了植物組織培養(yǎng)的基本實驗流程，加深了認識，增強了學(xué)習(xí)生物知識的 興趣，同時通過對實驗結(jié)果以及實驗過程中所出現(xiàn)的問題的分析和討論，加深了對激素的生長調(diào)節(jié)作用知識的理解和再認識 。 6）、總的說來，本次實驗還是較為成功的，雖然在實驗中有幾瓶被污染了，這屬于正常現(xiàn)象。植物組培實驗最重要的是培養(yǎng)科學(xué)的嚴(yán)謹性，通過這次實驗，收獲匪淺。但是，也有很多需要改進的地方。 教師評語及評分： 簽名： 年 月 日
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