【導讀】通過課題的實施，培養(yǎng)一批優(yōu)秀人才，全面提升我國相關傳染病。診防治的整體水平。包括系統(tǒng)分析志賀氏菌的進化。包括揭示EV71侵入中樞神。包括掌握我國主要腦膜炎。的粘附和侵襲毒力基因和蛋白的相互關系。的假說，為發(fā)展志賀氏菌疫苗和控制志賀氏菌感染提供新的思路和策略。供基礎性參考數(shù)據(jù)。技術等擴增并測定病毒全基因組序列。闡明中國大陸流行的EV71病毒的基因變異規(guī)律及病毒基。力等，確定EV71變異與毒力的關系，并在動物模型上進一步驗證。建立，完成結構解析。以EV71蛋白和非編碼區(qū)RN1為釣餌，利用親和層析、合酶結合的宿主因子，并研究其相互作用機制及其對病毒復制的影響。性比較研究、篩選和鑒定參與不同EV71入侵中樞神經(jīng)系統(tǒng)路線的相關作用因子，

　　

【正文】 疏泄為核心的肝臟象理論研究 本項目應用歷史分析的方法進行中醫(yī)理 論研究。即采用知識考古學等思想史研究思路與中醫(yī)傳統(tǒng)文獻方法結合，系統(tǒng)梳理從先秦時期到新中國成立前歷代中醫(yī)及相關文獻，以肝主疏泄為切入點，分析肝主疏泄及相關專題的對象形成、陳述方式、概念的擴散、主題策略的選擇等內(nèi)容，對文獻中肝藏血主疏泄應含義及其診治體系生成變化進行具體分析，以發(fā)現(xiàn)構成某一時期醫(yī)學思想整體的深層結構 —— “知識型”或“基本信碼”，也就是話語，根據(jù)話語的轉變來分析肝藏血主疏泄應含義及其診治體系的演變及背后的原因，以分析其形成和轉變的歷史；在肝藏血主疏泄及其相關理論學術發(fā)展史的基礎上，確立其理論內(nèi)涵 、應用范圍與原則，論證其在臟象學說、臟腑辨證以及臨床各科疾病診治中的地位與作用，解決學術分歧與爭議。 肝藏血主疏泄及其相關理論的知識考古學研究 ⑴話語構成分析：應用知識考古學，對文獻中肝藏血主疏泄及其相關研究單元進行話語構成分析，分別對肝藏血主疏泄及其相關研究單元在辨證論治體系中進行對象形成、陳述方式、概念擴散、主題從屬等話語構成的四要素分析。即：歷代醫(yī)學文獻中肝藏血主疏泄對象的形成，也就是在診治過程中應用肝藏血主疏泄疾病范圍的確定、肝藏血主疏泄病癥之間的劃分方法；肝藏血主疏泄在診治體系中陳述方式， 即肝藏血主疏泄以什么方式、與哪些概念、以什么次序關系出現(xiàn)在診治體系中；肝藏血主疏泄的界定，即在診治體系中，在肝藏血主疏泄與肝藏血主疏泄等其它概念、學說的相互關系中，肝藏血主疏泄是怎樣被界定的；肝藏血主疏泄的從屬的主題，即肝藏血主疏泄是在論述什么問題時才出現(xiàn)。 ⑵話語轉型分析：分析肝藏血主疏泄及其相關研究單元知識型的斷裂點，確定其話語形成系統(tǒng)的成分轉換、話語形成體系特征性的關系轉換、各種不同話語形成規(guī)則之間的轉換、各種實證性之間的關系的轉換。 肝藏血主疏泄及其相關理論學術發(fā)展史的確立 在肝藏血主疏泄 及其相關理論等的關系中確定肝藏血主疏泄的含義與應用范圍、應用原則，并在肝藏血主疏泄臨床適用范圍改變的基礎上確立其學術的演變史；闡明其所在診治體系的構成要素、診斷和治療原則、處方原則及其從一個時期到另一個是其轉換的歷史。 肝藏血主疏泄理論內(nèi)涵的確定 在肝藏血主疏泄及其相關理論學術發(fā)展史的基礎上，確立其理論內(nèi)涵、應用范圍與原則，論證其在臟象學說、臟腑辨證以及臨床各科疾病診治中的地位與作用，解決學術分歧與爭議。 生理狀態(tài)下肝藏血主疏泄功能的調(diào)控機制研究 依據(jù)現(xiàn)代文獻提取的信息，編制半開放式健康 人群調(diào)查他評量表。遵循臨床流行病學抽樣調(diào)查的相關各項要求，依據(jù) 2021 年全國 1%人口抽樣調(diào)查資料數(shù)據(jù)，在全國多家醫(yī)院的體檢中心、學校及社區(qū)，開展體檢無器質(zhì)性病變中青年人群 300 例（男：女 =1： 1）動態(tài)追蹤調(diào)查，分別在一年四時八節(jié)（立冬、冬至、立春、春分、立夏、夏至、立秋、秋分），分時間段從軀體癥狀、情緒、生活質(zhì)量、生活事件、相關指標（生命特征、體質(zhì)體能、血常規(guī)、一滴血、虹膜儀、脈象儀、舌象儀、面色分析儀、神經(jīng)遞質(zhì)、退黑素等）及一般情況等信息，建立數(shù)據(jù)庫。 采用方差分析、秩和檢驗等統(tǒng)計方法，分析宏觀表 現(xiàn)及微觀指標的關聯(lián)性；在不同季節(jié)的差異性；以及隨季節(jié)變化的動態(tài)規(guī)律。 應用隱結構模型對調(diào)查數(shù)據(jù)庫進行多維樣本聚類分析，由計算機自動搜索對調(diào)查人群進行分類，分析其中與肝藏血主疏泄狀態(tài)相關的人群，而后提取該人群的特征性癥狀與指標，建立肝藏血主疏泄功能狀態(tài)的判別模型。 動物四時八節(jié)的動態(tài)觀測 選取 W 大鼠 100 只，樹鼩 20 只，根據(jù)北京市氣象局氣象科學研究所提供。2021 年 1 月 2021 年 1 月 5 年的四時八節(jié)的氣候參數(shù)：包括日照百分數(shù)、平均溫度、日溫差、平均氣壓、日降水量、平均風力、平均相對濕度、平均 濕度 /平均溫度共 8 項。分別選取四時八節(jié)（立冬、冬至、立春、春分、立夏、夏至、立秋、秋分）八個時間點，動態(tài)觀察動物的表征，進行褪黑素、神經(jīng)遞質(zhì)等多項指標的檢測，建立數(shù)據(jù)庫，描述動物四時八節(jié)各項指標的動態(tài)變化曲線，提取動物狀態(tài)的核心指標，建立動態(tài)變化判別模式，分析肝藏血主疏泄功能與時間節(jié)律的相關性。 健康志愿者應激狀態(tài)下肝藏血主疏泄功能的調(diào)控機制研究 婦女月經(jīng)周期應激研究：選取月經(jīng)規(guī)律的健康志愿者 100 人，連續(xù)觀測其三個月經(jīng)周期的情緒、軀體癥狀以及一般性指標的變化，并與月經(jīng)期、黃體期、月經(jīng)后期分別進行 應激狀態(tài)測試，主要進行心理認知測試，檢測多導腦電等指標，建立數(shù)據(jù)庫進行分析，探索月經(jīng)周期中肝藏血狀態(tài)變化與疏泄功能的相關性，并總結肝藏血主疏泄異常狀態(tài)下應激變化規(guī)律，探討肝藏血主疏泄的內(nèi)在機制。 健康志愿者應激刺激前后不同狀態(tài)與肝藏血主疏泄關系的研究：選取120 例（男：女 =1： 1）健康志愿者，采用情緒圖片、面孔、音樂、聲音、文字和影片等刺激材料，根據(jù)研究需要控制其情緒類型以及愉悅度和喚醒度水平。通過自我回憶、材料刺激、社會交互作用等誘發(fā)手段使被試處于一定情緒狀態(tài)。在情緒表達抑制、認知重評、向上和向下情 緒調(diào)節(jié)、情緒分類、內(nèi)隱情緒任務、快速呈現(xiàn)、視覺掩蔽、線索－靶范式、情感啟動范式、延遲反應任務、 nback 等經(jīng)典的實驗范式中，綜合運用行為學測試、生理多導儀記錄、事件相關電位（ ERP）和功能磁共振成像（ fMRI）等技術手段，從反應時、正確率、 ERP 成分的波幅和潛伏期、腦區(qū)激活以及腦功能聯(lián)結等多個方面分析肝臟在情緒產(chǎn)生、調(diào)節(jié)和情緒與認知相互作用中的地位及相應心理、生理機制。 給予志愿者進行較大強度的運動任務負荷，通過主觀報告、問卷調(diào)查和客觀評分確定和劃分研究對象的情緒狀態(tài)。進行運動前后心理量表評測、視力系統(tǒng)測 定、腦電圖、腦血流圖、肝血流圖的檢測，以及微循環(huán)系統(tǒng)指標的檢測，探討運動前后肝藏血功能的調(diào)節(jié)機制。并分析藏血與疏泄之間的相關性。 信息學管理系統(tǒng)及分析方法研究 編寫數(shù)據(jù)庫程序，應用現(xiàn)代信息管理學方法，根據(jù)研究中文獻、臨床、實驗各項研究數(shù)據(jù)的特點，編制關聯(lián)數(shù)據(jù)庫，對相關信息進行統(tǒng)一規(guī)范、標示及編碼，從而形成統(tǒng)一的數(shù)據(jù)庫錄入平臺。 針對研究目標及相關研究數(shù)據(jù)的特點，進行算法研究，完善基于熵理論的數(shù)據(jù)分析方法及隱結構模型的分析方法，并編寫為軟件開展網(wǎng)絡化運行，為整體項目搭建數(shù)據(jù)分析平臺。 應用兩種數(shù)據(jù)分析方法，對四種疾病的臨床宏觀表現(xiàn)及微觀指標進行綜合分析，提取與肝藏血主疏泄相關的病證結合下宏觀表現(xiàn)與微觀表現(xiàn)的共性特點和個性特征。 應用兩種數(shù)據(jù)分析方法，對四種疾病提取肝藏血主疏泄相關的病證結合下動物模型的宏觀表征與微觀指標進行分析，提取其共性特點和個性特征，建立動物模型的判別模式。 對項目組臟象研究的各項數(shù)據(jù)進行綜合分析，提煉肝藏血主疏泄的共性生物學基礎。 應用信息平臺對各項研究進行實時錄入、盲法核對及質(zhì)量監(jiān)控。 抑郁癥、經(jīng)前期綜合征從肝論治的研究 流行病學 調(diào)查 編制調(diào)查表。由專家組根據(jù)研究目的，通過參考大量文獻，充分考慮可行性及有效性，設計抑郁癥（輕中度）、經(jīng)前期綜合征（重度， PMDD）流行病學調(diào)查內(nèi)容，并進行預調(diào)查，在此基礎上，修改制定研究用調(diào)查表。 開展流行病學調(diào)查。應用編制的調(diào)查表，對符合上述疾病診斷和納入標準的患者開展流行病學橫斷面調(diào)查，采集患者的一般個人信息、軀體癥狀、情緒精神癥狀、舌象、脈象，并對部分患者進行相關微觀指標檢測。 資料整理與分析。建立流行病學研究數(shù)據(jù)庫，對資料進行邏輯檢查和處理；運用方差分析、 Logist 回歸分析等方法，確立肝主疏泄調(diào)暢情志功能異常的主要宏觀表現(xiàn)及微觀指標，建立宏觀與微觀相結合的肝主疏泄調(diào)暢情志功能異常狀態(tài)的判別模式。 臨床療效研究 從肝論治抑郁癥（輕中度）臨床療效。①病例選擇 符合中國精神疾病分類方案與診斷標準第 3 版（ CCMDⅢ）的抑郁癥發(fā)作診斷標準且中醫(yī)辨證為肝氣郁證、符合納入標準的患者。②分組方法 采用隨機數(shù)字表將受試者隨機分配至方藥對證組（自擬方舒郁）、方藥次對證組（自擬方舒郁加減）。③療程及隨訪 療程 8周，對治療后臨床痊愈、顯效及有效的患者，治療后長期隨 訪，觀察是否復發(fā)。④臨床療效評定方法 于治療前、治療 1w、 2w、 4w、 6w、 8w 末，采用漢密爾頓抑郁量表、臨床療效總評量表、疾病嚴重程度量表、中醫(yī)證候積分表、副反應量表進行療效及副反應評定。 從肝論治經(jīng)前期綜合征（重度， PMDD）臨床療效。①病例選擇 符合西醫(yī)經(jīng)前期綜合征（重度， PMDD）診斷標準且中醫(yī)辨證為肝氣逆證、符合納入標準的患者。②分組方法 采用隨機數(shù)字表將受試者隨機分配至方藥對證組（自擬方白香丹）、方藥次對證組（自擬方白香丹加減）。③療程及隨訪 療程 2個月經(jīng)周期，對治療后臨床痊愈 、顯效及有效的患者，治療后進行遠期隨訪，觀察是否復發(fā)。④臨床療效評定方法 采用《癥狀嚴重程度每日報告》、《經(jīng)前期綜合征（重度， PMDD）肝氣逆證癥狀嚴重程度醫(yī)生記錄表》、副反應量表進行療效和副反應評定。 臨床療效的作用機制 臨床研究①腦功能區(qū)定位研究 小樣本選取健康志愿者，抑郁癥（輕中度）肝氣郁證患、經(jīng)前期綜合征（重度， PMDD）肝氣逆證患者，采用 BLODfMRI技術，觀察上述研究對象治療前后相關腦區(qū)（激活、抑制）的位點及其數(shù)目、強度，并與對照組比較，探討其腦功能活動區(qū)的異同點。②定位 下的腦功能區(qū)血流灌注及相關指標信號檢測 利用利用單光子 /正電子發(fā)射計算機斷層顯像（ SPECT/PET）及磁共振波譜成像（ MRS）技術，在研究內(nèi)容①基礎上，探查其局部腦血流狀態(tài)及葡萄糖物質(zhì)代謝變化，評估其腦功能，揭示抑郁癥（輕中度）肝氣郁證患、經(jīng)前期綜合征（重度， PMDD）肝氣逆證相關腦區(qū)功能改變。③外周聯(lián)系途徑相關指標變化 檢測各組受試對象血漿中相關微觀指標，并通過組間及治療前后對照，比較各組療效差異，探討抑郁癥（輕中度）、經(jīng)前期綜合征（重度，PMDD）不同病證的神經(jīng)體液機制。 模型動物及離體 細胞實驗。①動物模型造模及評價 經(jīng)前期綜合征（重度， PMDD）肝氣逆證大鼠模型：應用情志刺激為主多因素造模法制備經(jīng)前期綜合征（重度， PMDD）肝氣逆證大鼠模型。動物模型評價：采集模型動物證候表征進行證候歸屬評價，檢測模型動物生物指標進行疾病歸屬評價。② 動物模型相關腦區(qū)定位及定位下的神經(jīng)機制 進行相應腦區(qū)定位并應用腦微透析灌流技術，實時檢測去甲腎上腺素（ NE）、 5羥色胺（ 5HT）等關鍵指標水平變化。③動物模型外周血及不同腦區(qū)關鍵指標變化特點與關鍵基因功能驗證 檢測模型動物相關腦區(qū)、外周血中關鍵生物 指標含量，篩選出與經(jīng)前期綜合征（重度， PMDD）肝氣逆證密切相關的神經(jīng)遞質(zhì)和激素。進行模型動物的基因表達譜分析及關鍵基因的分布、定位及功能驗證，篩選其發(fā)病及藥物干預密切相關靶基因。④相關指標的分子機制及其信號轉導 取正常大鼠相應部位神經(jīng)元進行體外培養(yǎng)，用上述病證的人或動物血清、腦脊液處理細胞，免疫熒光和 Western Blot 尋找病證相關神經(jīng)遞質(zhì)或激素的受體及其介導的細胞內(nèi)信號轉導。 腸易激、高血壓、肝硬化三種疾病病證臨床流行病學橫斷面調(diào)查 通過對三種疾病現(xiàn)代文獻分析，提取與肝藏血主疏泄相關的 癥狀、證候要素、證候；依據(jù)此信息建立臨床信息采集量表，通過預調(diào)查進行量表的聯(lián)合信度檢測。 應用臨床信息采集表，在全國多中心同步開展大樣本約 800 例 /病的臨床流行病學橫斷面普查。分別對符合現(xiàn)代疾病診斷和各項納入標準的患者進行臨床軀體癥狀、情緒精神癥狀的調(diào)查，并采用統(tǒng)一的檢測標準，檢測相關實驗室指標。其中主要指標包括：三種疾病同性指標 —— 血液流變學指標、血脂、血糖、血清促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（ CRH）；血清皮質(zhì)醇，血漿去甲腎上腺素（ NE）、5羥色胺（ 5HT）等；各種疾病特有指標。 建立臨 床信息數(shù)據(jù)庫，進行多種統(tǒng)計分析，主要包括：頻數(shù)分析描述調(diào)查人群特征；方差分析方法統(tǒng)計不同疾病不同分期的差異性；相關分析方法統(tǒng)計宏觀癥狀與微觀指標的相關性； Logist 回歸分析、判別分析提取特征癥狀、指標；并結合無監(jiān)督數(shù)據(jù)分析方法（如基于熵的分析、隱結構模型）確立肝藏血主疏泄功能異常的主要宏觀表現(xiàn)及微觀指標，及其在三種疾病中的共性表現(xiàn)特點和個性特征；建立宏觀與微觀相結合的肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的判別模式。 應用養(yǎng)血調(diào)肝系列方劑對三種疾病患者進行藥物干預 按照三種疾病現(xiàn)代醫(yī)學的疾病診斷標準，及較為公 認的中醫(yī)證候診斷標準，選擇腸易激綜合征肝郁脾虛證 300 例、脾胃虛寒證 100例；高血壓病肝陽上亢證 300 例、肝火熾盛證 100 例；肝硬化脾腎陽虛、肝氣滯血瘀證 100 例、肝腎陰虛、氣滯血瘀證 200 例。按照臨床為理論創(chuàng)新服務，為實驗研究奠定基礎的原則，按照 1： 1： 1： 1 的比例，分別設立安慰劑對照組、方證對應組、方證次對應組、非干預證候?qū)φ战M，參照新藥創(chuàng)制的研究方法，應用養(yǎng)血調(diào)肝方劑的免煎顆粒，進行臨床干預研究。 依據(jù)建立的肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的判別模型編制臨床觀測量表，對納入研究的患者分別在治療前、治療 后及隨訪期，采集其宏觀臨床癥狀、體征及微觀指標，建立數(shù)據(jù)庫。 應用方差分析、秩和檢驗、判別分析、因子分析、多維尺度分析等多種統(tǒng)計方法，分析各項癥狀、指標在治療前后的差異性；不同證候類型間的差異性；不同疾病間的異同性等。并綜合分析結果分析從肝論證的干預機制及證治規(guī)律。 肝藏血主疏泄現(xiàn)代科學內(nèi)涵的