【導(dǎo)讀】終產(chǎn)物應(yīng)是預(yù)期的產(chǎn)品，并且有經(jīng)濟(jì)上的合理性和巨大的生產(chǎn)能力。原料的價(jià)格盡可能的低，利用效率盡可能的高。也應(yīng)不斷地予以研究和調(diào)整；所使用的微生物菌株的生產(chǎn)能力是最高的；盡可能少地使用勞動(dòng)力，在適當(dāng)?shù)牟襟E中采用自動(dòng)化；為達(dá)到這個(gè)目的，力爭(zhēng)采用分批補(bǔ)料發(fā)酵；廢棄物的排放量應(yīng)是最少的；熱和動(dòng)力的利用是時(shí)分充分的；廠房的占地面積最少，但仍留有可發(fā)展的余地。一個(gè)工藝過(guò)程的關(guān)鍵是成本分析，從而得到最大的節(jié)約潛力?？疾槟硞€(gè)發(fā)酵過(guò)程時(shí)，必需注意到投資成本和操作成本。中失去競(jìng)爭(zhēng)力時(shí)，美國(guó)農(nóng)業(yè)資助規(guī)劃將谷物和馬鈴薯等以低價(jià)供應(yīng)給發(fā)酵工業(yè)，使它得以繼續(xù)維持生產(chǎn)。產(chǎn)糖國(guó)所供應(yīng)的糖蜜和甘蔗汁的價(jià)格一半。其是篩選新抗生素。篩選計(jì)劃，轉(zhuǎn)而依賴日本的實(shí)驗(yàn)室的合同。素目錄后，發(fā)現(xiàn)其中有40%是日本學(xué)者發(fā)現(xiàn)的。含有高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的蛋白質(zhì)，不含毒素和致病物質(zhì)。場(chǎng)的潛力作出估計(jì)。的生產(chǎn)是屬于低產(chǎn)值-大體積，如溶劑、有機(jī)酸和單細(xì)胞蛋白質(zhì)。

　　

【正文】 考書 （ 1）天津輕工業(yè)學(xué)院等，《工業(yè)發(fā)酵分析》，輕工業(yè)出版社， 1980 年 附表 21 斐林試劑糖量表 消耗糖液 體 積 (毫升 ) 相當(dāng)葡萄 糖 量 (毫克 ) 100毫升糖液中所含葡萄糖的量 (毫克 ) 消耗糖液 體 積 (毫升 ) 相當(dāng)葡萄 糖 量 (毫克 ) 100 毫升糖液中所含葡萄糖的量 (毫克 ) 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 327 307 289 274 260 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 實(shí)驗(yàn)三 還原糖的測(cè)定 1 原理 原糖的測(cè)定采用快速法。其反應(yīng)與粗淀粉測(cè)定相似，不同點(diǎn)為斐林試劑甲液中硫酸銅量較小，適用于含糖 量較少的試樣。另外，斐林試劑中加入亞鐵氰化鉀 (黃血鹽 )，使紅色氧化亞銅沉淀生成可溶性的復(fù)鹽，反應(yīng)終點(diǎn)更為明顯。 Cu2O+K4Fe(CN)6+H2O=K2Cu2Fe(CN)6+2KOH (淡黃色 ) 2 試劑 斐林試劑 甲液：稱取 35g 硫酸銅， 次甲基藍(lán)，用水溶解并定容至 1000ml。 乙液：稱取 117g 酒石酸鉀鈉， 氫氧化鈉， 亞鐵氰化鉀，用水溶解并定容至 1000ml。 %標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液 精密稱取 經(jīng) 95~105℃烘干的無(wú)水葡萄糖，用少量水溶解，加入 5ml 鹽酸，用蒸餾水定容至 1000ml，搖勻。 3 儀器與設(shè)備 （ 1）三角瓶 （ 2）容量瓶 （ 3）分析天平 （ 4）干燥器 （ 5）電熱恒溫干燥箱 （ 6）滴定管 （ 7）稱量瓶 （ 8）移液管 （ 9）電爐 4 測(cè)定步驟 斐林試劑的標(biāo)定 吸取斐林試劑甲、乙液各 5 毫升，置入 250 毫升三角瓶中，加 10 毫升水，并從滴定管中預(yù)先加入約 20 毫升 %標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液 (其量控制在后滴定時(shí)消耗%標(biāo)準(zhǔn)葡萄搪溶液 1 毫升以內(nèi) )，搖勻，于電爐上加熱至沸，立即以 4~5 秒鐘1 滴的速 度繼續(xù)用 %標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液滴定至藍(lán)色消失，此滴定操作需在 1 分鐘內(nèi)完成，總耗糖量為 V0 毫升。 定糖 預(yù)備試驗(yàn)：吸取斐林試劑甲、乙液各 5 毫升，置入 250 毫升三角瓶中，加入 V1毫升試樣稀釋液 (含葡萄糖量約為 5~15 毫克 )及適量的 %標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，搖勻，以下同標(biāo)定時(shí)操作，總耗糖量為 V2 毫升。 正式試驗(yàn)：吸取斐林試劑甲、乙液各 5 毫升，置入 250 毫升三角瓶中，加 V1 毫升試樣稀釋液和 (V21)毫升 %標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，補(bǔ)加 [(V0+10)(V1+V2)]毫升水，搖勻，以下同標(biāo)定時(shí)操作，總耗糖量為 V毫升。 重復(fù)測(cè)定兩次，取總消耗標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液體積的平均值 V ml。 5 計(jì)算 %1001% 10 ?????? VnCVV ）（）還原糖（以葡萄糖計(jì) 式中 V0：斐林試劑標(biāo)定值 (毫升 ) V：斐林試劑測(cè)定值 (毫升 ) C：標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液濃度 (克 /毫升 ) n：試樣稀釋倍數(shù) v1：所取試樣稀釋液體積 (毫升 ) 6 說(shuō)明 (1)滴定速度、三角瓶壁厚度和熱源的穩(wěn)定程度等，對(duì)測(cè)定精密度影響很大。平行測(cè)定的滴定毫升數(shù)相差不應(yīng)超過(guò) ，故在標(biāo)定、預(yù)備、正式測(cè)定過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)力求一致。 (2)滴定過(guò)程應(yīng)該始終保持在微沸狀態(tài)下進(jìn)行。沸騰 后繼續(xù)滴定至終點(diǎn)的毫升數(shù)應(yīng)控制在 ~lml 內(nèi)，否則應(yīng)重新測(cè)定。 (3)樣品液中還原糖濃度不宜過(guò)高或過(guò)低，根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)將樣品液稀釋至還原糖的含量在 1%左右為宜。 (4)滴定至終點(diǎn)藍(lán)色褪去之后，就不應(yīng)再滴定，因四甲基藍(lán)指示劑被還原褪色后，當(dāng)接觸空氣時(shí)，又會(huì)被氧化重現(xiàn)籃色。 (5)斐林溶液與還原糖之間的反應(yīng)因受溶液堿性、加熱濕度和時(shí)間以及副反應(yīng)等影響，而沒(méi)有嚴(yán)格的定量關(guān)系，不能由當(dāng)量定律來(lái)求出試樣中還原糖的含量，只熊根據(jù)在相同實(shí)驗(yàn)條件下消耗相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)還原糖量或由嚴(yán)格相同的實(shí)驗(yàn)條件下得出的還原糖檢索表上 查得相應(yīng)的還原糖量來(lái)進(jìn)行計(jì)算。所以用廉 愛(ài)農(nóng)法定糖時(shí)，必須先用相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)還原糖標(biāo)定斐林溶液。 7 參考書 （ 1）天津輕工業(yè)學(xué)院等，《工業(yè)發(fā)酵分析》，輕工業(yè)出版社， 1980 年 實(shí)驗(yàn)四 蛋白酶活力的測(cè)定方法 1 原理 根據(jù)福林試劑 (磷鉬酸與磷鎢酸混合物 )，在堿性情況下極不穩(wěn)定，可被酞類化合物還原而呈藍(lán)色反應(yīng) (鉬藍(lán)和鎢藍(lán)的混合物 )，由于蛋白質(zhì)分子中含有酚基的氨基酸 (如酪氨酸、色氨酸及苯丙氦酸等 )，它使蛋白質(zhì)或其水解產(chǎn)物也呈這個(gè)反應(yīng)，于是就可利用這個(gè)原理來(lái)測(cè)定蛋白酶活力的強(qiáng)弱， 即以酪蛋白為作用底物，在一定 pH 與溫度下，同酶液反應(yīng)，經(jīng)一定時(shí)間后，加入三氯醋酸，以終止酶反應(yīng)，并使殘余的酪蛋白質(zhì)沉淀，同水解產(chǎn)物分開(kāi)，經(jīng)過(guò)濾后取濾液 (即含蛋白水解產(chǎn)物的三氯醋酸液 )。用碳酸鈉堿化，再加入福林試劑使之發(fā)色，用分光光度計(jì)或光電比色計(jì)測(cè)定。藍(lán)色反應(yīng)的強(qiáng)弱，同三氯醋酸中蛋白水解產(chǎn)物的多少成正比而水解產(chǎn)物的量又是同酶活力成正比例關(guān)系。因此，根據(jù)藍(lán)色反應(yīng)的強(qiáng)弱就可推測(cè)蛋白酶的活力。 2 試劑 福林試劑 于 2020ml 磨口回流裝置內(nèi)加入鎢酸鈉 (Na2WO4 178。 2H2O)100g，鎢酸鈉(NaMoO4178。 2H2O)25g，水 700ml， 85%磷酸 50m1，濃鹽酸 1000ml，文火回流10h．加入硫酸鋰 (Li2SO4)150g，蒸溜水 50m1，混勻取去冷凝器，加入幾滴液體溴，再煮沸 l5min，以驅(qū)逐殘溴及除去顏色，溶液應(yīng)呈黃色而非綠色。若溶液仍有綠色，需再滴加溴液。再煮沸除去之。冷卻后，定溶至 1000ml。細(xì)菌漏斗 4~5號(hào)過(guò)濾，置于棕色瓶中保存。此溶液使用時(shí)加 2 倍蒸餾水稀釋，即成稀釋的福林試劑。 (TCA)溶液 稱取三氯醋酸 ，定容至 1000ml。 稱取無(wú)水碳酸鈉 (Na2CO3)，定容至 1000m1。 A 液：稱取 %乳酸加蒸餾水定容至 1000ml。 B 液：稱取 16 克 70%乳酸鈉加蒸餾水定容至 1000ml。 取 A 液 16ml 與 B 液 1ml 稀釋 1 倍即成 。 2%酪蛋白溶液 稱取干酪素 2g 加入 (必要時(shí)用小火加熱煮沸 )，然后用 乳酸 乳酸鈉緩沖 液定容至 1000mI 即成。配制后應(yīng)及時(shí)使用或放入冰箱內(nèi)保存。否則極易繁殖細(xì)菌，引起變質(zhì)。 配制酪蛋白溶液定容時(shí)，若泡沫過(guò)多，則可加 1~2 滴酒精消泡。 3350 酸性蛋白酶酪蛋白溶液的配制，應(yīng)加弄乳酸 2~3 滴濕潤(rùn)。 100μ g/m1 酪氨酸溶液 精確稱取在 l05℃烘箱中烘至恒重的酪氨酸 ，逐步加入 (HCl)使溶解，加蒸溜水定容至 100m1，其濃度為 1000μ g/m1。再吸取此液 10ml 以蒸餾水定容至 100ml 即配成 100μ g/m1 酪氨酸镕液．此溶液配成后也應(yīng)及時(shí)使用或放入冰箱內(nèi)保存 ，以免繁殖細(xì)菌而變質(zhì)。 3 操作步驟 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 （ 1）按表配制各種不同濃度的酪氨酸溶液 試劑（ ml） 管 號(hào) 1 2 3 4 5 6 蒸餾水 10 8 6 4 2 0 100μ g/m1 酪氨酸 0 2 4 6 8 10 酪氨酸最終濃度（μ g/m1） 0 20 40 60 80 100 (2)測(cè)定步驟 另取 6 支試管按上表編號(hào)分別吸取不同濃度的酪氨酸 1ml，各加入 酸鈉 5m1，再加入已稀釋的福林試劑 1m1。搖勻置于水浴鍋中， 40℃保溫發(fā)色20min，在于波長(zhǎng) 660nm處測(cè)定吸光度。一般測(cè) 3 次，取平均值． 以吸光度為縱座標(biāo)。酪氨酸的濃度為橫座標(biāo)，繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。 酶液的制備 準(zhǔn)確稱取蛋白酶固態(tài)發(fā)酵的濕曲 2g，用 10~20ml 蒸餾水， 30℃浸提半小時(shí)，用濾紙過(guò)濾。將濾液稀釋一定倍數(shù) (使其測(cè)定光密度在 ~ 范圍內(nèi)為宜 )。 測(cè)定 取四支試管，分別加入 1ml 稀釋酶液，其中一支為空白管，三支為平行試驗(yàn)管。置入 40℃水浴中預(yù)熱 3~5min，在三支平行試驗(yàn)管中分別加入 1ml2%酪蛋白溶液，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)保溫 10min。立即加入 2ml 三氯 乙酸溶液， l5min 后用濾紙過(guò)濾。分別吸取 1ml 清液，加 碳酸鈉溶液，最后加入 1ml 福林 酚試劑，搖勻，于 40℃水浴中顯色 20min。 空白管中先加入 三氯乙酸溶液，再加 lml2%酪蛋白溶液， 15min 后用濾紙過(guò)濾。以下操作與平行試驗(yàn)管相同。 見(jiàn)空白管為對(duì)照，在 680 納米波長(zhǎng)下測(cè)光密度，取其平均值。 4 計(jì)算 蛋白酶活力單位定義：在 40℃， 下，每分鐘水解酪蛋白釋放 1 微克酪氨酸的酶量定義為 1 個(gè)蛋白酶單位。 WNDOK 1104 ??????蛋白酶活力 式中 K：標(biāo)準(zhǔn)曲線中 O178。 D 值為 1 所相當(dāng)?shù)睦野彼岬奈⒖藬?shù) O178。 D：平行試驗(yàn)管的平均光密度 4：試管中反應(yīng)液總體積 (毫升 ) 10：反應(yīng) 10 分鐘 N：稀釋倍數(shù) W：曲的稱取量 (克 ) 5 說(shuō)明 （ 1）對(duì)于同一臺(tái)分光光度計(jì)與同一批福林 酚試劑，其工作曲線 K 值可以沿用，當(dāng)另配福林 酚試劑時(shí)，工作曲線應(yīng)重作。 （ 2）當(dāng)用不同產(chǎn)品的酪蛋白對(duì)同一蛋白酶測(cè)定時(shí)，其結(jié)果會(huì)有差異，故蛋白酶活力表示時(shí)應(yīng)注明所用酪蛋白的生產(chǎn)廠。 6 參考書 （ 1）鄔顯章，《酶的工業(yè)生產(chǎn)技術(shù)》，吉林科學(xué)技術(shù)出版社， 1988 年 實(shí)驗(yàn) 五 糖化酶的測(cè)定方法 1 原理 糖化型淀粉酶（即淀粉α 1， 4葡萄糖苷酶）有催化淀粉水解的作用，從淀粉分子非還原性末端開(kāi)始，分解α 1， 4糖苷鍵生成葡萄糖，反應(yīng)生成的葡萄糖用次碘酸鉀法定量測(cè)定，以表示糖化性淀粉酶的活力。 2 試劑 稱取醋酸鈉 (CH3COONa178。 3H2O) 和冰醋酸 (CH3COOH)，用蒸餾水溶解，定容至 1000m1。上述緩沖液應(yīng)以酸度計(jì)或精密試紙校正 pH。 (1)配制：稱取硫 代硫酸鈉 (Na2S2O3178。 5H2O) 和硫酸鈉 溶于煮沸后冷卻的蒸餾水中，定容至 1000ml，即得 mol/L 硫代硫酸鈉溶液。貯于棕色瓶中密封保存，配制后應(yīng)放置一星期標(biāo)定使用。 。 (2)標(biāo)定：取在 120℃下干燥至恒重的標(biāo)準(zhǔn)重鉻酸鉀 ．精密稱量。置碘量瓶中，加水 50m1 使溶解，加碘化鉀 2g。輕輕振搖使溶解，加 1mol/L 硫酸溶液 40m1搖勻，密塞。在暗處放置 10min 后用蒸餾水 250ml 稀釋，用此液滴定至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液 3ml，繼續(xù)滴 定至藍(lán)色消失而顯亮綠色。并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每 1ml 的 。根據(jù)本液的消耗量與重鉻酸鉀的用量，計(jì)算硫代硫酸鈉的當(dāng)量濃度。本溶液需每月標(biāo)定一次。 稱取碘化鉀 (K1)36g，溶解在 100m1 蒸餾水中，再加入碘 (I2) 溶解，定容至 1000ml 貯存于棕色瓶中。 用標(biāo)準(zhǔn)的 。 吸取 10ml 待標(biāo)定的碘液放入 250m1 碘量瓶中，以 黃色時(shí)，加入 1%淀粉 指示劑 l2 滴，繼續(xù)滴定至無(wú)色為終點(diǎn)。 VVNN 2 11 ??碘的摩爾濃度 式中 N1：硫代硫酸鈉的濃度 (mol/L) V1：消耗硫代硫酸鈉的毫升數(shù) V：碘液毫升數(shù) 稱取 4g 氫氧化鈉 (NaOH)加蒸餾水溶解，定容至 1000ml。 1mol/L 硫酸溶液 量取濃硫酸 ，慢慢加入于 80 m1 蒸餾水中，冷卻后定容至 l00ml，搖勻。 20%氫氧化鈉溶液 稱取 20g 氫氧化鈉，溶解定容至 100ml。 2%可溶性淀粉 稱取可溶性淀粉 2g，然后用少量蒸餾水調(diào)勻，徐徐傾入巳沸的蒸餾水中，煮沸至透明，冷卻定容至 l00ml，此溶液需當(dāng)天配制。 3 操作方法 待測(cè)酶液的制備 取發(fā)酵液的濾液用 醋酸鈉緩沖液適當(dāng)稀釋，供測(cè)定用。 測(cè)定 于甲、乙兩支比色管中 (50ml)，分別加入 20%可溶性淀粉溶液 25m1 及 的醋酸 醋酸鈉緩沖液 5ml，搖勻， 40℃的恒溫水浴中預(yù)熱 (510min)。在甲