工業(yè)微生物菌種保藏技術(shù)(ppt52)-工藝技術(shù)-資料下載頁
2025-08-07 21:15本頁面
【導(dǎo)讀】經(jīng)長期保藏后菌種存活健在；菌種保藏的基本措施是低溫、干燥、真空。用特點(diǎn)及現(xiàn)有條件等進(jìn)行綜合考慮。法的失敗而導(dǎo)致菌種的喪失。土壤或陶瓷珠等載體于燥保藏。通過冷凍，使微生物代謝活動(dòng)停止。冷凍溫度愈低，效果愈好。為了獲得滿意的冷。冷凍保藏時(shí)溫度要求在-20℃以下，同。時(shí)應(yīng)認(rèn)真掌握好冷凍速度和解凍速變。冷凍深藏的缺點(diǎn)之一是培養(yǎng)物運(yùn)輸較困難。到試管或指管肉，然后貯藏于一冰箱的冷藏室中，上置于冰箱中保存。用此方法可以維持若干微生物的活力1—2年。1．離心收獲對數(shù)生長中期至后期的微生物細(xì)胞；3．加入等體積的20％甘油或10％二甲亞砜；甘油的新配制液體培養(yǎng)基洗滌收獲。箱的冷凍速度一般控制在1-2℃／min。10％、二甲亞砜5％。壓蒸汽滅菌，而二甲亞砜最好為過濾滅菌。液氮冷藏專用塑料瓶。在浸沒培養(yǎng)液中加入等體積20%無菌甘油；需先用玻璃珠打散；氮冷藏專用塑料瓶，玻璃安瓿用酒精噴燈封口；胞和懸浮培養(yǎng)基之間達(dá)到平衡。一較大的金屬容器中；
【正文】 。 加速保藏試驗(yàn)可用于預(yù)測保藏過程中保藏培養(yǎng)物的穩(wěn)定性 。 在一給定溫度下通過對高溫下短期活力喪失程度檢測 ， 可以用來預(yù)測嗜酸乳桿菌的穩(wěn)定性 。 成功的菌種長期保藏方法之有價(jià)值的指標(biāo)包括在保藏 6個(gè)月 、 1年或更長時(shí)間后存活百分率(或存活單位 )。 細(xì)胞群體的形態(tài)學(xué)特征或一些特別的生化特征應(yīng)在菌種保藏前后保持同一性 ，以及實(shí)驗(yàn)室中 、 中試車間中和生產(chǎn)發(fā)酵中產(chǎn)品滴度的穩(wěn)定性 ， 后者極為重要 。 第十節(jié) 菌種的衰退與復(fù)壯 在生物進(jìn)化的歷史長河中，遺傳性的變異是絕對的，而它的穩(wěn)定性反而是相對的；退化性的變異是大量的，而進(jìn)化性的變異卻是個(gè)別的。 在自然情況下，個(gè)別的適應(yīng)性變異通過自然選擇就可保存和發(fā)展，最后成為進(jìn)化的方向；在人為條件下，人們也可以通過人工選擇法去有意識地篩選出個(gè)別的正變體用于生產(chǎn)實(shí)踐中。 相反，如不自覺、認(rèn)真地去進(jìn)行人工選擇，大量的自發(fā)突變菌株就會(huì)趁機(jī)泛濫，最后導(dǎo)致菌種的衰退（ degeneration）。 在長期接觸菌種的實(shí)際工作人員中，都有這樣的體會(huì)，即如果對菌種工作長期放任自流，不搞純化、復(fù)壯（ rejuvenation）和育種，則菌種就會(huì)對你進(jìn)行“ 懲罰 ” ，反映到生產(chǎn)上就會(huì)出現(xiàn)持續(xù)的低產(chǎn)、不穩(wěn)產(chǎn)。這說明菌種的生產(chǎn)性狀也是不進(jìn)則退的。 菌種衰退的表現(xiàn) 對產(chǎn)量性狀來說，菌種的負(fù)變就是衰退。 其他原有的典型性狀變得不典型時(shí)，也是衰退。最易覺察到的是菌落和細(xì)胞形態(tài)的改變。 生長速度緩慢，產(chǎn)孢子越來越少。 代謝產(chǎn)物生產(chǎn)能力或其對宿主寄生能力的下降。 衰退還表現(xiàn)在抗不良環(huán)境條件（抗噬菌體、抗低溫等）能力的減弱等。 菌種衰退的實(shí)質(zhì) 菌種的衰退是發(fā)生在細(xì)胞群體中的一個(gè)由量變到質(zhì)變的逐步演變過程。 開始時(shí)，在一個(gè)大群體中僅個(gè)別細(xì)胞發(fā)生負(fù)變，這時(shí)如不及時(shí)發(fā)現(xiàn)并采取有效措施，而一味移種傳代，則群體中這種負(fù)變個(gè)體的比例逐步增大，最后讓它們占了優(yōu)勢，從而使整個(gè)群體表現(xiàn)出嚴(yán)重的衰退。 所以，在開始時(shí)所謂 “ 純 ” 的菌株，實(shí)際上其中已包含著一定程度的不純因素；同樣，到了后來，整個(gè)菌種雖已 “ 衰退 ” 了，但也是不純的，即其中還有少數(shù)尚未衰退的個(gè)體存在著。 復(fù)壯的概念 狹義的復(fù)壯僅是一種消極的措施，它指的是在菌種已發(fā)生衰退的情況下，通過純種分離和測定生產(chǎn)性能等方法，從衰退的群體中找出少數(shù)尚未衰退的個(gè)體，以達(dá)到恢復(fù)該菌原有典型性狀的一種措施； 而廣義的復(fù)壯則應(yīng)是一項(xiàng)積極的措施，即在菌種的生產(chǎn)性能尚未衰退前就經(jīng)常有意識地進(jìn)行純種分離和生產(chǎn)性能的測定工作，以期菌種的生產(chǎn)性能逐步有所提高。所以，這實(shí)際上是一種利用自發(fā)突變（正變）不斷從生產(chǎn)中進(jìn)行選種的工作。 二、菌種的衰退與復(fù)壯 1） 從衰退的菌種群體中把少數(shù)個(gè)體再找出來，重新獲得具有原有典型性狀的菌種。 2）有意識地利用微生物會(huì)發(fā)生自發(fā)突變的特性，在日常的菌種 維護(hù)工作中不斷篩選“正變”個(gè)體。 大量群體中的自發(fā)突變 菌種的復(fù)壯： a） 純種分離； b）通過寄主體進(jìn)行復(fù)壯； 菌種衰退的特點(diǎn)： 實(shí)踐中關(guān)于防止菌種衰退和進(jìn)行復(fù)壯的經(jīng)驗(yàn) （一）衰退的防止 1．控制傳代次數(shù) 2．創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件 在實(shí)踐中，有人發(fā)現(xiàn)如創(chuàng)造一個(gè)適合原種的生長條件，就可在一定程度上防止菌種衰退。 如改變培養(yǎng)基成分、改變培養(yǎng)溫度等。 3．利用不同類型的細(xì)胞進(jìn)行接種傳代 。 用滅過菌的棉團(tuán) 進(jìn)行孢子接種，不同孢子的接種嘗試。 4．采用有效的菌種保藏方法 ， 有必要研究和采用更有效的保藏方法以防止菌種生產(chǎn)性狀的衰退 （二）菌種的復(fù)壯 1．純種分離 。 通過純種分離，可把退化菌種的細(xì)胞群體中一部分仍保持原有典型性狀的單細(xì)胞分離出來，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)，就可恢復(fù)原菌株的典型性狀。 方法 2．通過宿主體內(nèi)生長進(jìn)行復(fù)壯 。 對于寄生性微生物的退化菌株，可通過接種至相應(yīng)的昆蟲或動(dòng)、植物宿主體內(nèi)的措施來提高它們的致病性。 3．淘汰已衰退的個(gè)體 ，如低溫抗性篩選。
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