【文章內(nèi)容簡介】 例配制成的 濃縮液 （培養(yǎng)基母液）。 使用時根據(jù)母液的濃縮倍數(shù)，計算用量，并加蒸餾水稀釋。 配制培養(yǎng)基：應加入的物質有瓊脂、蔗糖、大量元素、微量元 素、有機物和植物激素的母液，并用蒸餾水定容到 1000毫升。 在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加植物激素 原因是菊花莖段組織培養(yǎng)比較容易。滅菌：采取的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。 MS培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質的作用是什么？與肉湯培養(yǎng)基相比， MS培養(yǎng)基有哪些特點？ 大量元素和微量元素提供植物細胞所必需的無機鹽；蔗糖提供碳源，維持細胞滲透壓；甘氨酸、維生素等物質主要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。 微生物培養(yǎng)基以 有機營養(yǎng) 為主， MS培養(yǎng)基則需提供大量 無機營養(yǎng) 。 外植體的消毒 外植體： 用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。選取菊花莖段時，要取生長旺盛的嫩枝。菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗 20min左右。用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數(shù)為 70%的酒精中搖動 2~3次，持續(xù) 6~7s，使用順序 實驗結果 先生長素， 后細胞分裂素 有利于分裂但不分化 先細胞分裂素， 后生長素 細胞既分裂也分化 同時使用 分化頻率提高 生長素／ 細胞分裂素比值與結果 比值高時 促根分化， 抑芽形成 比值低時 促芽分化， 抑根形成 比值適中 促進愈傷組織生長 組織類型 細胞來源 細胞形態(tài) 細胞結構 細胞排列 細胞去向 根尖 分生組織 受精卵 正方形 無液泡 緊密 分化成多種 細胞組織 愈傷組織 高度分化細胞 無定形 高度液泡化 疏松 再分化成新個體 相同點 都通過有絲分 裂進行細胞增殖 立即將外植體取出，在無菌水中清洗。取出后仍用無菌吸水紙吸干外植體表面水分，放入質量分數(shù)為 %的氯化汞溶液中 1~2min。取出后，在無菌水中至少清洗 3次，漂洗消毒液。 注意：對外植體進行表面消毒時，就要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮植物的耐受能力。 接種： 接種過程中 插入外植體時形態(tài)學上端朝上，每個錐形瓶接種 7～ 8個外植體。外植體接種與細菌接種相似，操作步驟相同，而且都要求無菌操作。 培養(yǎng)： 應該放在無菌箱中進行，并定期進行消毒，保持適宜的溫度（ 18~22℃）和光照（ 12h） 移栽： 栽前應先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓其在培養(yǎng)間生長幾日，然后用流水清洗根部培養(yǎng)基。然后將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時間，進行壯苗。最后進行露天栽培。 栽培 外植體在培養(yǎng)過程中可能會被污染，原因有外植體消毒不徹底；培養(yǎng)基滅菌不徹底；接種中被雜菌污染；錐形瓶密封性差等。 專題二 月 季的花藥培養(yǎng) 被子植物的花粉發(fā)育被子植物的雄蕊通常包含 花絲 、 花藥 兩部分?；ㄋ帪?囊狀結構 ，內(nèi)部含有許多花粉。花粉是由 花粉母細胞 經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是 單倍體的生殖細胞 。被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷 小孢子四分體時期 、 單核期 和 雙核期 等階段。在小孢子四分體時期， 4 個單倍體細胞連在一起，進入單核期時，四分體的 4 個單倍體細胞彼此分離，形成 4 個具有單細胞核的花粉粒。這時的細胞含濃厚的原生質，核位于細胞的中央（ 單核居中期 ）。隨著細胞不斷長大，細胞核由中央移向細胞一側（ 單核靠邊期 ），并分裂成 1個生殖細胞核和 1 個花粉管細 胞核，進而形成兩個細胞，一個是生殖細胞，一個是營養(yǎng)細胞。生殖細胞將在分裂一次，形成兩個精子。 注意： ①成熟的花粉粒有兩類，一類是二核花粉粒，其花粉粒中只含花粉管細胞核和生殖細胞核，二核花粉粒的精子是在花粉管中形成的；另一類是三核花粉粒，花粉在成熟前，生殖細胞就進行一次有絲分裂，形成兩個精子，此花粉粒中含有兩個精子核和一個花粉管核（營養(yǎng)核）②花粉發(fā)育過程中的四分體和動物細胞減數(shù)分裂的四分體不同。花粉發(fā)育過程中的四分體是花粉母細胞經(jīng)減數(shù)分裂形成的 4 個連在一起的單倍體細胞；而動物細胞減數(shù)分裂過程中的四分體是聯(lián)會配 對后的一對同源染色體，由于含有四條染色單體而稱為四分體。③同一生殖細胞形成的兩個精子，其基因組成完全相同。 產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株（即單倍體植株）一般有 兩種途徑 ， 一種是花粉通過胚狀體階段發(fā)育為植物，另一種是花粉在誘導培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再將其誘導分化成植株 。這兩種途徑之間并沒有絕對的界限，主要取決于培養(yǎng)基中 激素的種類 及其 濃度配比 。 注意： ①無論哪種產(chǎn)生方式，都要 先誘導生芽，再誘導生根 ② 胚狀體： 植物體細胞組織培養(yǎng)過程中，誘導產(chǎn)生的形態(tài)與受精卵發(fā)育成的胚非常類似的結構，其發(fā)育也與受精 卵發(fā)育成的胚類似，有胚芽、胚根、胚軸等完整結構，就像一粒種子，又稱為細胞胚。 影響花藥培養(yǎng)的因素誘導花粉能否成功及誘導成功率的高低，受多種因素影響，其中 材料的選擇 與培養(yǎng)基的組成 是主要的影響因素 親本的生理狀況：花粉早期是的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株，選擇 月季的初花期 。 合適的花粉發(fā)育時期：一般來說，在 單核期 ，細胞核由中央移向細胞一側的時期，花藥培養(yǎng)成功率最高 花蕾：選擇 完全未開放 的花蕾 親本植株的生長條件 、 材料的低溫預處理 以及 接種密度 等對誘導成功率都有一定影響 材料的選?。哼x擇花藥時，一般要通 過 鏡檢 來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。確定花粉發(fā)育時期的最常用的方法是 醋酸洋紅法 。但是，某些植物的花粉細胞核不易著色，需采用 焙花青 鉻礬法 ，這種方法能將 花粉細胞核 染成 藍黑色 材料的消毒 接種和培養(yǎng)：滅菌后的花蕾，要在無菌條件下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。在剝離花藥時，要 盡量不損傷花藥 （否則接種后容易從受傷部位長生愈傷組織），同時還要 徹底去除花絲 ，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成，通常每瓶接種花藥 7～ 10 個 ,培養(yǎng)溫度控制在 25℃ 左右 ,不需要光照 .幼小植株形成后才需要 光照 .一般經(jīng)過 20～ 30 天培養(yǎng)后 ,會發(fā)現(xiàn) 花藥開裂 ,長出愈傷組織或形成胚狀體。將愈傷組織及時轉移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株。如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。還需要對培養(yǎng)出來的植株做進一步的鑒定和篩選。 植物組織培養(yǎng)技術與花藥培養(yǎng)技術的相同之處是：培養(yǎng)基配制方法、無菌技術及接種操作等基本相同。兩者的不同之處在于：花藥培養(yǎng)的選材非常重要，需事先摸索時期適宜的花蕾；花藥裂開后釋放出的愈傷組織 或胚狀體也要及時更換培養(yǎng)基；花藥培養(yǎng)對培養(yǎng)基配方的要求更為嚴格。這些都使花藥培養(yǎng)的難度大為增加。 專題五 ＤＮＡ和蛋白質技術 課題一 ＤＮＡ的粗提取與鑒定 提取 DNA的溶解性原理包括哪些方面？ DNA在不同濃度 NaCl溶液中溶解度不同； DNA不溶于酒精。 DNA在不同濃度 NaCl溶液中溶解度有何特點？要使 DNA溶解，需要使用什么濃度？要使 DNA析出，又需要使用什么濃度？ 在 ；較高濃度可使 DNA溶解； DNA析出。 在溶解細胞中的 DNA時，人們通常選用 2mol/LNaCl溶液；將 DNA分子析出的方法是向溶有 DNA的 NaCl溶液中緩慢注入蒸餾水，以稀釋 NaCl溶液。酒精是一種常用有機溶劑，但 DNA卻不能溶于酒精（特別是 95％冷卻酒精），但細胞中蛋白質可溶于酒精。 從理論上分析，預冷的乙醇溶液具有以下優(yōu)點。一是抑制核酸水解酶活性，防止 DNA降解；二是降低分子運動，易于形成沉淀析出；三是低溫有利于增加 DNA分子柔韌性，減少斷裂。 采用 DNA不溶于酒精的原理，可以達到什么目的？ 將 DNA和蛋白質進一步分離。 提取 DNA還可以利用 DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受 性原理。利用該原理時，應選用怎樣的酶和怎樣的溫度值？ 蛋白酶，因為酶具有專一性，蛋白酶只水解蛋白質而不會對 DNA產(chǎn)生影響。溫度值為 60～80℃，因為該溫度值蛋白質變性沉淀，而 DNA不會變性。 補充： DNA的變性是指 DNA分子在高溫下解螺旋，其溫度在 80℃以上，如在 PCR技術中 DNA變性溫度在 95℃。 洗滌劑在提取 DNA中有何作用？ 洗滌劑將細胞膜上的蛋白質，從而瓦解細胞膜。 當鑒定提取出的物質是否是 DNA時，需要使用什么指示劑進行鑒定？ 在沸水浴條件下， DNA遇二苯胺呈現(xiàn)藍色。 原理總結：通過利用不同濃 度 NaCl溶液溶解或析出 DNA，可以從細胞中提取和提純 DNA；再利用酒精進一步將 DNA與蛋白質分離開來，達到提純的目的；最后利用二苯胺試劑鑒定提取的物質是否是 DNA。 實驗材料的選取 不同生物的組織中 DNA含量不同。在選取材料時，應本著 DNA含量高、材料易得、便于提取的原則。 本實驗用雞血細胞做實驗材料有兩個原因。一是因為雞血細胞核的 DNA含量豐富，材料易得；二是雞血細胞極易吸水脹破，而用動物肝臟細胞作實驗材料常常需要勻漿和離心，對設備要求較高，操作繁瑣，歷時較長。 雞血細胞破碎以后釋放出的 DNA，容易被玻 璃容器吸附，所以在提取過程中為了減少 DNA的損失，最好使用塑料的燒杯和試管盛放雞血細胞液。 破碎細胞，獲取含 DNA的濾液 若選用雞血和洋蔥作實驗材料，則怎樣獲取含 DNA的濾液？ 在雞血細胞液中加入一定量蒸餾水并用玻棒攪拌，過濾后收集濾液；切碎洋蔥，加入一定量洗滌劑和食鹽，攪拌研磨，過濾后收集濾液。 為什么加入蒸餾水能使雞血細胞破裂？ 答：蒸餾水對于雞血細胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進入血細胞內(nèi)，使血細胞脹裂，再加上攪拌的機械作用，就加速了雞血細胞的破裂 (細胞膜和核膜的破裂 )，從而釋放出 DNA。 在以上實驗中，加入蒸餾水、洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？過濾時應當選用（濾紙、尼龍布）。血細胞在蒸餾水中大量吸水而張裂；洗滌劑瓦解細胞膜；食鹽溶解 DNA物質；選用尼龍布進行過濾。 在處理植物組織時需要進行研磨，其目的是什么？研磨不充分產(chǎn)生什么結果？ 破碎細胞壁，使核物質容易溶解在 NaCl 溶液中；研磨不充分會使 DNA 的提取量減少， 影響實驗結果，導致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍色等。 。具體做法。 10mL雞血＋ 20mL蒸餾水→同方向攪拌→ 3層尼龍布過濾→濾液 去除濾液中的雜質 為什么反復地溶解與析出 DNA，能夠去除雜質？ 用高鹽濃度的溶液溶解 DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質；用低鹽濃度使 DNA 析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質。因此，通過反復溶解與析出 DNA，就能夠除去與 DNA 溶解度不同的多種雜質。 最初獲得的 DNA濾液含有蛋白質、脂質等雜質，需要進一步提純 DNA。 方案一的原理是 DNA在不同濃度 NaCl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白質，不分解 DNA；方案三的原理是蛋白質和 DNA的變性溫度不同。 方案二與方案三的原理有什么不同？ 答：方案二是利用蛋白酶分解雜質蛋白，從而使提取的 DNA與蛋白質分開；方案三利用的是 DNA 和蛋白質對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質變性，與 DNA分離。 析出與鑒定 在濾液中仍然含有一些雜質，怎樣除去這些雜質呢？得到的 DNA呈何顏色？ 濾液與等體積的冷卻酒精混合均勻，靜置 2～ 3分鐘，析出的白色絲狀物就是 DNA。 DNA呈白色。 怎樣鑒定析出的白色絲狀物就是 DNA呢？ 具體做法。試管 2支，編號甲乙→各加等量 5mLNaCl溶液→甲中放入少量白色絲狀物，使之溶解→各加 4mL二苯胺，混合均勻→沸水浴5min→觀察顏色變化 實驗操作 制備雞血細胞液????加檸檬酸鈉 ，靜置或離心 ↓ 破碎細胞，釋放 DNA? 加蒸餾水，同一方向快速通方向攪拌 ↓→過濾，除去細胞壁、細胞膜等。 溶解核內(nèi) DNA???? 加入 NaCl至 2mol/L，同一方向緩慢攪拌 ↓ DNA析出?????? 加蒸餾水至 ，過濾，在溶解到 2mol/L溶液中 ↓→除去細胞質中的大部分物質。 DNA初步純化???? 與等體積 95％冷卻酒精混合，析出白色絲狀物 ↓→除去核蛋白、 RNA、多糖等。 DNA鑒定?????? 二苯胺，沸水浴，呈現(xiàn)藍色 注意事項：在雞血中加入檸檬酸鈉防止凝固；雞血靜置或離心 以提高細胞懸液濃度；使用塑料燒杯；使用尼龍布過濾；玻棒沿同一方向攪拌；玻棒攪拌要緩慢（細胞破裂快速攪拌）；玻棒不要碰到燒杯壁；二苯胺試劑要現(xiàn)用現(xiàn)配等。以下是附加文檔，不需要 的朋友下載后刪除，謝謝 頂崗實習總結專題 13 篇 第一篇 :頂崗實習總結 為了進一步鞏固理論知識，將理論與實踐有機地結合起來，按照學校的計劃要求，本人進行了為期個月的頂崗實習。這個月里的時間里，經(jīng)過我個人的實踐和努力學習，在同事們的指導和幫助下，對村的概況和村委會有了一定的了解，對村村委會的日常工作及內(nèi)部制度有了初步的認識，同時，在與其他 工作人員交談過程中學到了許多難能可貴經(jīng)驗和知識。通過這次實踐，使我對村委會實務有所了解，也為我今后的順利工作打下了良好的基礎。 一、實習工作情況 村是一