【正文】 目的？ 將 DNA和蛋白質(zhì)進一步分離。酒精是一種常用有機溶劑，但 DNA卻不能溶于酒精（特別是 95％冷卻酒精），但細胞中蛋白質(zhì)可溶于酒精。 兩者的不同之處在于：花藥培養(yǎng)的選材非常重要，需事先摸索時期適宜的花蕾；花藥裂開后釋放出的愈傷組織 或胚狀體也要及時更換培養(yǎng)基；花藥培養(yǎng)對培養(yǎng)基配方的要求更為嚴格。將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株。但是，某些植物的花粉細胞核不易著色，需采用 焙花青 鉻礬法 ，這種方法能將 花粉細胞核 染成 藍黑色 花蕾：選擇 完全未開放 的花蕾 影響花藥培養(yǎng)的因素誘導花粉能否成功及誘導成功率的高低，受多種因素影響，其中 材料的選擇 與培養(yǎng)基的組成 是主要的影響因素 ③同一生殖細胞形成的兩個精子，其基因組成完全相同。隨著細胞不斷長大，細胞核由中央移向細胞一側(cè)（ 單核靠邊期 ），并分裂成 1個生殖細胞核和 1 個花粉管細 胞核，進而形成兩個細胞，一個是生殖細胞，一個是營養(yǎng)細胞?；ǚ凼怯?花粉母細胞 經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是 單倍體的生殖細胞 。最后進行露天栽培。 接種： 接種過程中 插入外植體時形態(tài)學上端朝上，每個錐形瓶接種 7～ 8個外植體。用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數(shù)為 70%的酒精中搖動 2~3次，持續(xù) 6~7s，使用順序 實驗結(jié)果 先生長素， 后細胞分裂素 有利于分裂但不分化 先細胞分裂素， 后生長素 細胞既分裂也分化 同時使用 分化頻率提高 生長素／ 細胞分裂素比值與結(jié)果 比值高時 促根分化， 抑芽形成 比值低時 促芽分化， 抑根形成 比值適中 促進愈傷組織生長 組織類型 細胞來源 細胞形態(tài) 細胞結(jié)構(gòu) 細胞排列 細胞去向 根尖 分生組織 受精卵 正方形 無液泡 緊密 分化成多種 細胞組織 愈傷組織 高度分化細胞 無定形 高度液泡化 疏松 再分化成新個體 相同點 都通過有絲分 裂進行細胞增殖 立即將外植體取出，在無菌水中清洗。 微生物培養(yǎng)基以 有機營養(yǎng) 為主， MS培養(yǎng)基則需提供大量 無機營養(yǎng) 。 不同的植物對各種條件的要求往往不同。 激素： 植物激素中 生長素 和 細胞分裂素 是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。一般來說，容易進行無性繁殖的植物容易進行組織培養(yǎng)。 比較根尖分生組織和愈傷組織的異同 影響植物組織培養(yǎng)的條件 材料： 不同的植物組織，培養(yǎng)的難易程度差別很大。但在生物體的生長發(fā)育過程中并不表現(xiàn)出來，這是因為在 特定的時間和空間 條件下，通過基因的 選 擇性表達 ，構(gòu)成不同組織和器官。由高度分化的植物組織或細胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細胞的脫分化，或者叫做去分化。方法二的另一缺點是：有些微生物具有降解色素 的能力，它們在長時間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分。一般應(yīng)將紙埋于深約 10cm左右腐殖土壤中。 課題延伸 對分解纖維素的微生物進行了初步的篩選后，只是分離純化的第一步，為確定得到的 是纖維素分解菌，還需要進行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實驗，纖維素酶的發(fā)酵方法有 液體發(fā)酵 和 固體發(fā)酵 兩種。當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。 纖維素分解菌的篩選 （ 1）篩選方法：剛果紅染色法。形狀、大小、隆起程度、顏色 疑難解答 （ 1） 如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？ 統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計 3個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均值 每 克樣品中的菌落數(shù) =（ C/V） *M 其中， C 代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)， V 代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（ ml）， M代表稀釋倍數(shù) 課題三 分解纖維素的微生物的分離 纖維素，一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。在實際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在 30~300之間、適于計數(shù)的平板。在富含有機質(zhì)的土壤表層，有更多的微生物生長。 采用此方法的注意事項： 30~300 之間的 平板進行計數(shù) ，影響計數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入 TTC 設(shè)置對照 設(shè)置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。 （ 2）稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目的原理 當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。 （ 2）選擇性培養(yǎng)基 在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作 選擇培養(yǎng)基 。 （ 2）確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法 將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫 1～ 2 天，無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。營養(yǎng)物質(zhì)是指維持機體生命活動，保證發(fā)育、生殖所需的外源物質(zhì)。 （ 2）對于需要長期保存的菌種，可以采用 甘油管藏 的方法。 ①臨時保藏方法 將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng) 。 涂布平板操作的討論 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進行。 （ 6）涂布平板操作的步驟： ①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。 平板劃線操作的討論 ？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以 便得到菌落。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。 ⑤將試管通過火焰，并塞上棉塞。 （ 5）平板劃線法操作步驟： ①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體，這就是菌落。 ，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為 什么？ 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。 倒平板操作的討論 ，需要冷卻到 50℃ 左右時，才能用來倒平板。 ③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基（約10～ 20mL）倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。 ④表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈 。消毒方法常用 煮沸消毒法 ， 巴氏消毒法 （對于一些不耐高溫的液體）還有 化學藥劑 （如酒精、氯氣、石炭酸等）消毒、 紫外線消毒 。 ④實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。無菌技術(shù) 只有固氮微生物才能利用 N2。 單質(zhì)碳不能作為碳源 。 選擇培養(yǎng) 基 是指在培養(yǎng)基中加入某種化學物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長，促進所需要的微生物的生長。 合成培養(yǎng)基 是用成分已知的化學物質(zhì)配制而成，其中成分的種類比例明確，常用于微生物的分離鑒定。根據(jù)菌落的特征可以判斷是哪一種菌。 亞硝酸鹽為白色粉末，易溶于水，在食品生產(chǎn)中用作食品添加劑。 反應(yīng)式為： C6H12O6 ? ?? 酶 2C3H6O3+能量 含抗生素牛奶不能生產(chǎn)酸奶的原因是抗生素殺死乳酸菌 。 課題三 制作泡菜 用含水量高的豆腐制作腐乳，不易成形。 疑難解答 （ 1）利用所學的生物學知識，解釋豆腐長白毛是怎么一回事？ 豆腐生長的白毛是毛霉的白色菌絲。防止雜菌污染：①用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。 加鹽腌制的時間約為 8天左右。 樣品水分含量（ %） 計算公式如下 ： (烘干前容器和樣品質(zhì)量 烘干后容器和樣品質(zhì)量 )/烘干前樣品質(zhì)量 通過各種輔料與酶的緩解作用，生成腐乳的香氣。 實驗流程：讓豆腐上長出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制 釀造腐乳的主要生產(chǎn)工序是將豆腐進行前期發(fā)酵和后期發(fā)酵。代謝類型是異養(yǎng)需氧型。因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。 疑難解答 （ 1）你認為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？ 應(yīng)該先沖洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗時引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機會。先在試管中加入發(fā)酵液 2ｍ L，再滴入物質(zhì)的量濃度為 3mol/L 的 H2SO43滴，振蕩混勻，最后滴加常溫下飽和的重鉻酸鉀溶液 3滴，振蕩試管，觀察顏色 1充氣口是在醋酸發(fā)酵時連接充氣泵進行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時用來排出二氧化碳的；出料口是用來取樣的。②醋酸菌最適生長溫度為 30～ 35℃，控制好發(fā)酵溫度，使發(fā)酵時間縮短，又減少雜菌污染的機會。 C6H12O6＋ 6O2→ 6CO2＋ 6H2O 在無氧條件下，酵母菌能進行酒精發(fā)酵。高中生物選修一生物技術(shù)實踐 知識點總結(jié) 專題一 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用 課題一 果酒和果醋的制作 發(fā)酵：通過微生物技術(shù)的培養(yǎng)來生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物的過程。酵母菌的生殖方式：出芽生殖 (主要 ) 分裂生殖 孢子生殖 在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖。 2C2H5OH＋ 4O2→ CH3COOH＋ 6H2O 控制發(fā)酵條件的作用①醋酸菌對氧氣的含量特別敏感，當進行深層發(fā)酵時，即使只是短時間中斷通入氧氣，也會引起醋酸菌死亡。在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。使用該裝置制酒時，應(yīng)該關(guān)閉充氣口；制醋時，應(yīng)該充氣口連接氣泵，輸入氧氣。 20℃左右最適合酵母菌的繁殖。毛霉是一種絲狀真菌。 原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。 后期發(fā)酵主要是酶與微生物協(xié)同參與生化反應(yīng)的過程。 *水分測定方法如下 ： 精確稱取經(jīng)研缽研磨成糊狀的樣品 5～ 10g(精確到 )，置于已知重量的蒸發(fā)皿中，均勻攤平后，在 100～ 105℃ 電熱干燥箱內(nèi)干燥 4h，取出后置于干燥器內(nèi)冷卻至室溫后稱重，然后再烘 30min，直至所稱重量不變?yōu)橹埂＜欲}腌制：將長滿毛霉的豆腐塊分層整齊地擺放在瓶中，同時逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高而增加鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。食鹽的作用： ，避免腐敗變質(zhì) ，是豆腐變硬，在后期制作過程中不易酥爛 ，給腐乳以必要的咸味 。鹵湯中酒的含量一般控制在 12%左右。香辛料的作用： 封瓶時，最好將瓶口通過酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。 （ 3）我們平常吃的豆腐，哪種適合用來做腐乳？ 含水量為 70%左右的豆腐適于作腐乳。它能形成腐乳的“體”，使腐乳成形。 分裂方式是二分裂。 亞硝酸鹽被吸收后隨尿液排出體外，但在適宜 pH 、溫度和一定微生物作用下形成致癌物質(zhì)亞硝胺。培養(yǎng)基：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)，是進行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可以形成肉眼可見的菌落。按照 成分 培養(yǎng)基可分為 人工合成培養(yǎng)基 和 天然培養(yǎng)基 。按照培養(yǎng)基的 用途 ，可將培養(yǎng)基分為 選擇培養(yǎng)基 和 鑒定培養(yǎng)基 。培養(yǎng)基的化學成分包括 水 、 無機鹽 、 碳源 、 氮源 、 生長因子 等。異養(yǎng)微生物只能利用有機碳源。如 N NH NO NH4+（無機氮源） 蛋白質(zhì)、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有機氮源）等。例如，培養(yǎng) 乳酸桿菌 時需要在培養(yǎng)基中添加 維生素 ，培養(yǎng) 霉菌 時須將培養(yǎng)基的 pH調(diào)至 酸性 ，培養(yǎng) 細菌 是需要將 pH 調(diào)至 中性或微堿性 ，培養(yǎng) 厭氧型微生物 是則需要提供 無氧 的條件 ③為避免周圍環(huán)境 中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行。消毒與滅菌的區(qū)別 消毒 指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。 滅菌方法： ①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法； ②玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱 ； ③培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋 。 ②右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過火焰。 ，為什么要將平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。將聚集的菌種 逐步稀釋 分散到培養(yǎng)基的表面。 （ 4）用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的 目的 是：使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落，以便于純化菌種。④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第 一區(qū)域劃線的末端開始往第 二區(qū)域內(nèi)劃線。 ，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。 ④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。 菌種的保存 （ 1）對于頻繁使用的菌種，可以采用 臨時保藏 的方法。 ② 缺點 ：這種方法保存的時間不長，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。 疑難解答 （ 1）生物的營養(yǎng) 營養(yǎng)是指生物攝取、利用營養(yǎng)物質(zhì)的過程。 微生物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機鹽、碳源、氮源及特殊營養(yǎng)物質(zhì)五類。土壤