【文章內(nèi)容簡介】 細(xì)胞融合與細(xì)胞雜交：（1）細(xì)胞融合：指用自然或人工方法,使兩個(gè)或多個(gè)不同的細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的過程。（2）誘導(dǎo)融合的方法：1）生物法：滅活的仙臺病毒誘導(dǎo)融合，是動物細(xì)胞融合所特有的 2）化學(xué)法：聚乙二醇誘導(dǎo)融合 3）物理法：電融合技術(shù)：效率很高（3）細(xì)胞雜交：基因型不同的細(xì)胞間的融合稱為細(xì)胞雜交。（4）動物細(xì)胞融合技術(shù)的應(yīng)用由于細(xì)胞雜交中染色體容易丟失，因此利用雜交細(xì)胞檢測特定染色體丟失與特定基因產(chǎn)物減少的對應(yīng)關(guān)系，可以進(jìn)行基因定位。（5）動物細(xì)胞融合的意義：克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和性，成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段。（6）動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較：動物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的原理基本相同，誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法與植物原生質(zhì)體融合的方法類似，常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、滅活的病毒、電刺激等。比較項(xiàng)目細(xì)胞融合的原理細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)手段用途植物體細(xì)胞雜交細(xì)胞膜的流動性去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合離心、電刺激、振動，聚乙二醇等試劑誘導(dǎo)克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和性，獲得雜種植株動物細(xì)胞融合細(xì)胞膜的流動性使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合除應(yīng)用植物細(xì)胞雜交手段外，再加滅活的病毒誘導(dǎo)制備單克隆抗體的技術(shù)之一雜交瘤技術(shù)和單克隆抗體制備：（1）雜交瘤技術(shù)：將抗體生成細(xì)胞同瘤細(xì)胞進(jìn)行雜交的技術(shù)。該技術(shù)解決了抗血清的異質(zhì)性問題。（2）雜交瘤技術(shù)制備單抗體：① 抗體：一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。從血清中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差。② 雜交瘤技術(shù)制備單抗體的基本方法：1） 用外界抗原刺激動物（如小鼠），使其發(fā)生免疫反應(yīng)，使B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體；2） 利用仙臺病毒或聚乙二醇等作介導(dǎo)，使經(jīng)免疫的動物的脾細(xì)胞與可以無限傳代的骨髓瘤細(xì)胞融合；3） 經(jīng)過篩選、克隆培養(yǎng)，獲得來自單一細(xì)胞的既能產(chǎn)生特異抗體、又能無限增殖的雜交瘤細(xì)胞克隆。③ 單克隆抗體的制備過程：注入小鼠細(xì)胞融合分離抗原注入小鼠體內(nèi)B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)選擇培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)從腹水提取從培養(yǎng)液提取單克隆抗體④ 制備過程中的相關(guān)問題：1）單克隆抗體的制備運(yùn)用了哪些動物細(xì)胞工程技術(shù)？ 答：動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞融合2）制備過程中進(jìn)行了幾次篩選？每次篩選的目的是什么？ 答：兩次篩選：在細(xì)胞融合后選出雜交瘤細(xì)胞；對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)后選出能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群，繼續(xù)培養(yǎng)。（3）雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。（4）雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：可以從特異抗原成分比例極少的抗原混合物中獲得單抗。特異性強(qiáng)，靈敏度高。（5）單克隆抗體的作用：① 作為診斷試劑：準(zhǔn)確識別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異，并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)。② 用于治療疾病和運(yùn)載藥物：主要用于治療癌癥治療，可制成“生物導(dǎo)彈”，也有少量用于治療其它疾病。動物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程度：受精卵 → 二分裂球→四分裂球→八分裂球→桑椹胚→囊胚→原腸胚→組織、器官→幼體① 動物的受精卵，卵裂球含有28個(gè)細(xì)胞時(shí)，每個(gè)細(xì)胞具有全能性。② 隨著胚胎發(fā)育的繼續(xù)，有的細(xì)胞只具有分化出各種組織細(xì)胞的潛能，這樣的細(xì)胞叫多能干細(xì)胞。③ 有的細(xì)胞只能分化為一種細(xì)胞，叫單能干細(xì)胞。在動物體內(nèi)，已經(jīng)分化的細(xì)胞不再分化為其他細(xì)胞，甚至終生不再分裂，如高度分化的神經(jīng)細(xì)胞④ 動物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程度 受精卵＞胚胎干細(xì)胞＞多能干細(xì)胞＞單能干細(xì)胞＞體細(xì)胞 低等動物細(xì)胞：全能性一般容易體現(xiàn)。 癌細(xì)胞：仍能逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞。無論分化還是癌變，變化的都是表現(xiàn)型，基因組成的完整性可以保留。動物難以克隆的根本原因： 基因的選擇性表達(dá)（差異表達(dá)），使得細(xì)胞中合成了專一的蛋白質(zhì)，即動物細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生了分化。分化的細(xì)胞，其細(xì)胞核中物種的基因組完整，具有全能性，但其基因組中的基因不同時(shí)進(jìn)行活動，有的基因開放，有的基因關(guān)閉（如哺乳動物的紅細(xì)胞），不能像受精卵那樣發(fā)揮細(xì)胞的全能性，以此為起點(diǎn)進(jìn)行細(xì)胞克隆，難度很大。細(xì)胞核移植實(shí)驗(yàn)和動物的克隆繁殖：（1）核移植概念：就是利用一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核（核供體）來取代另一細(xì)胞中的細(xì)胞核，形成一個(gè)重建的“合子”。（2）哺乳動物核移植可以分為胚胎細(xì)胞核移植（比較容易）和體細(xì)胞核移植（比較難）。（3）選用去核卵(母)細(xì)胞的原因：卵(母)細(xì)胞比較大，容易操作；卵(母)細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)多，營養(yǎng)豐富。（4）體細(xì)胞核移植的大致過程是： 核移植胚胎移植（5）多莉的培育用到了哪些技術(shù)？答：核移植、動物細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎移植（6）體細(xì)胞克隆羊的培育成功，證明了什么？ 答：1）高度分化細(xì)胞經(jīng)一定技術(shù)處理，也可回復(fù)到類似受精卵時(shí)期的功能。 2）在胚胎和個(gè)體發(fā)育中，細(xì)胞質(zhì)具有調(diào)控細(xì)胞核（包括異源的細(xì)胞核）發(fā)育的作用。（7）體細(xì)胞克隆羊成功的分子細(xì)胞生物學(xué)機(jī)理有哪些？ 答：1）重組卵細(xì)胞最初分裂時(shí)雖然復(fù)制了DNA，但轉(zhuǎn)錄并未開始2）重組卵細(xì)胞的供體核DNA丟失了來源于乳腺細(xì)胞的阻止核基因表達(dá)的調(diào)節(jié)蛋白。3）重組卵細(xì)胞開始第三次分裂時(shí)，原乳腺細(xì)胞的調(diào)節(jié)蛋白全部被卵細(xì)胞質(zhì)中的蛋白因子替換了，核DNA被重新編排，胚細(xì)胞開始表達(dá)自己的基因，進(jìn)而調(diào)控胚在代孕母親子宮中的進(jìn)一步發(fā)育。4）核移植前對乳腺細(xì)胞的營養(yǎng)限制性培養(yǎng)（調(diào)節(jié)牛血清濃度）和電脈沖細(xì)胞融合技術(shù)，有利于核的變化和細(xì)胞融合后基因表達(dá)分子開關(guān)啟動。（8）體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用：①加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)良畜群繁育； ②保護(hù)瀕危物種，增大存活數(shù)量；③生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白； ④作為異種移植的供體；⑤用于組織器官的移植等。（9）體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：克隆動物存在著健康問題、表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷等。（10）動物克隆成功的條件： 1）具有包含本物種完整基因組的細(xì)胞核的活細(xì)胞。 如：乳腺上皮細(xì)胞；2）能有效調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育的細(xì)胞質(zhì)物質(zhì)。 如：去核卵的細(xì)胞質(zhì)；3）完成胚胎發(fā)育的必要的環(huán)境條件。 如：誘導(dǎo)重組細(xì)胞生長、分化的實(shí)驗(yàn)條件和懷胎母體的子宮環(huán)境練習(xí)：（1）用于動物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞 （ ） A、容易產(chǎn)生各種變異 B、具有更強(qiáng)的全能性C、取材十分方便 　　 D、分裂增殖的能力強(qiáng)（2）下列為有關(guān)動物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，其中不正確的是（ ）A．用于培養(yǎng)的細(xì)胞大都取自胚胎或幼齡動物的器官或組織B．將所取的組織先用胰蛋白酶等進(jìn)行處理使其分散成單個(gè)細(xì)胞C．在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液D．動物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培養(yǎng)的細(xì)胞全部衰老死亡 （3）用動、植物成體的體細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是（ ）A．都需用CO2培養(yǎng)箱 B．都須用液體培養(yǎng)基 C．都要在無菌條件下進(jìn)行 D．都可體現(xiàn)細(xì)胞的全能性（4）動物細(xì)胞克隆是指（ ） A．一個(gè)單細(xì)胞培養(yǎng)成一個(gè)新的細(xì)胞群的技術(shù) B．一個(gè)重組細(xì)胞經(jīng)分裂、分化發(fā)育成一個(gè)動物個(gè)體的技術(shù) C．幾個(gè)同種動物的細(xì)胞培養(yǎng)成一個(gè)新的細(xì)胞群的技術(shù) D．一個(gè)卵裂球經(jīng)胚胎分割發(fā)育成四個(gè)細(xì)胞群的技術(shù)（5）某研究小組為測定藥物對體外培養(yǎng)細(xì)胞的毒性，準(zhǔn)備對某種動物的肝腫瘤細(xì)胞(甲)和正常肝細(xì)胞(乙)進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)。下列說法正確的是 ( )，也可用胃蛋白酶處理%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CO2的作用是刺激細(xì)胞的呼吸、乙細(xì)胞在持續(xù)的原代培養(yǎng)過程中，乙會出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象（6）下列關(guān)于動物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，正確的是 ( )（7）世界上第一只克隆綿羊“多莉”