血小板功能檢測(編輯修改稿)
2024-11-19 04:10 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 度為40μM；，鈣離子的濃度＜5μM）。如果使用EDTA抗凝劑，鈣離子的濃度將能低至不能使血小板凝集。肝素的效果不好，因為血小板經(jīng)常粘附到試管壁，并且會使血小板集聚，在離心中沉積到紅細胞中，使富含血小板血漿中的血小板數(shù)目減少。水蛭素和PPACK通過抑制凝血酶的活性來抗凝，它們可以維持生理性濃度的鈣離子，而某些實驗中正需要這種濃度，但水蛭素的價格非常昂貴無法常規(guī)使用。 血小板聚集到目前為止評價血小板功能最常見的方法是測定血小板的聚集功能，抗凝血在離心力135g離心15分鐘，制備富含血小板血漿（PRP）。如果可能，血小板計數(shù)應(yīng)當標準化（如在濃度為250109/ l時測定）,這可以通過加入少血小板血漿來實現(xiàn)。1毫升（）PRP在37℃加入到裝有金屬磁棒的玻璃試管中，在聚集儀中磁棒以1100rpm轉(zhuǎn)動，通過比色計記錄穿過PRP的光強度。大多數(shù)誘導(dǎo)劑加入后，血小板形態(tài)由片狀轉(zhuǎn)變?yōu)閳A形，形成偽足，引起短暫的光透過率的下降，然后由于血小板聚集，光透過率大幅度增加。光透過率增加的速度和程度會被記錄下來。致聚劑主要為ADP，腎上腺素，膠原蛋白，花生四烯酸，TTXA2的類似物如U46619，或凝血酶受體活化肽如SFLLRN。（凝血酶不能作為PRP的促凝劑，因為會引起凝結(jié)）。正常情況下枸櫞酸抗凝的PRP，對高濃度致聚劑反應(yīng)的聚集程度，與TXA2的形成，顆粒內(nèi)容物的分泌和血小板表面P選擇素的形成有關(guān)。低血小板計數(shù)會影響血小板聚集試驗，如果PRP中血小板計數(shù)低于100109/l結(jié)果就不可靠。如果是脂血，也不能進行此試驗。如果血小板改變了形態(tài)，但不能與所有的致聚劑發(fā)生聚集，則其原因可能是罕見的Glanzmann血小板減少癥。與膠原蛋白或凝血酶相比，ADP是弱的致聚劑，在枸櫞酸抗凝的PRP中，低濃度ADP只引起初步的，不完全的，可逆的聚集。但當濃度高于13μM時，初級的血小板聚集將不可逆，而且緊接著會引起第二相不可逆的過程（圖1）。這個兩相血小板聚集過程依賴TXA2的形成。高濃度ADP情況下，這兩相聚集過程會融合，形成一個平滑的曲線（圖1），類似于膠原蛋白或凝血酶的刺激效果。藥物，如阿司匹林，會抑制TXA2的形成，阻礙了ADP介導(dǎo)的第二相聚集過程。在生理性的鈣離子介質(zhì)中，只會發(fā)生第一相的聚集反應(yīng)。ADP誘導(dǎo)聚集嚴重減弱，以及膠原蛋白和凝血酶誘導(dǎo)聚集受損，提示為罕見的P2Y12ADP受體異常。噻氯匹定和clopidogrel通過此受體作用，產(chǎn)生類似的對ADP誘導(dǎo)選擇性抑制。弱的致聚劑，腎上腺素（510uM），可聚集PRP中的血小板，而不改變血小板的形態(tài)，但腎上腺素的致聚作用并不一致。如果服用了阿司匹林或其它抑制TXA2形成的藥物，血小板對任何濃度的腎上腺素都不反應(yīng)，不會產(chǎn)生聚集。膠原纖維（15μg/ml）會引起特征性滯后（可達1分鐘）的血小板聚集,聚集需要TXA2形成和顆粒內(nèi)容物的分泌，而且基本上是不可逆的。雖然血小板形態(tài)發(fā)生了變化，但是阿司匹林及其它抑制TXA2形成的藥物可以阻斷低濃度的膠原蛋白引起的聚集反應(yīng)。罕見的GPVI缺陷癥表現(xiàn)為血小板受膠原蛋白刺激后并不發(fā)生聚集，但在受到其它致聚劑的刺激后通常會發(fā)生聚集?；ㄉ南┧峥梢赞D(zhuǎn)變?yōu)門XA2，因此可作為聚集劑。阿司匹林和其它可以抑制環(huán)氧化酶的藥物具有抑制作用。但是TXA2的類似物U46619，卻可以在此類抑制劑的存在狀況下產(chǎn)生聚集作用。在罕見的環(huán)氧化酶缺失的病人，花生四烯酸不誘導(dǎo)血小板聚集，但U46619會引起血小板的聚集。SFLLRN(TRAP)具有凝血酶的誘導(dǎo)血小板強聚集作用的功能，只有當TXA2形成障礙時，這一作用才會稍有減弱。分泌缺陷，特別是致密顆粒缺少ADP的增強作用，會造成異常的聚集，即存在正常的第一相過程，而無第二相過程。分泌缺陷時低濃度的膠原蛋白和SFLLRN誘導(dǎo)血小板聚集會減弱。 瑞托霉素聚集血小板這一試驗同樣用聚集儀對枸櫞酸抗凝的PRP進行測試?？股厝鹜忻顾乜勺鳛橹戮蹌?。正常的樣本是第一相聚集后緊接著會發(fā)生第二相聚集。缺乏反應(yīng)提示為BernardSoulier綜合癥或VWF缺乏。 全血血小板聚集用阻抗血小板聚集儀可測定稀釋的抗凝全血的血小板聚集功能。將兩個電極插入樣本中，當有電流通過時，血小板會粘附到電極上。然后
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