血小板功能檢測(cè)(編輯修改稿)
2024-11-19 04:10 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 度為40μM；，鈣離子的濃度＜5μM）。如果使用EDTA抗凝劑，鈣離子的濃度將能低至不能使血小板凝集。肝素的效果不好，因?yàn)檠“褰?jīng)常粘附到試管壁，并且會(huì)使血小板集聚，在離心中沉積到紅細(xì)胞中，使富含血小板血漿中的血小板數(shù)目減少。水蛭素和PPACK通過(guò)抑制凝血酶的活性來(lái)抗凝，它們可以維持生理性濃度的鈣離子，而某些實(shí)驗(yàn)中正需要這種濃度，但水蛭素的價(jià)格非常昂貴無(wú)法常規(guī)使用。 血小板聚集到目前為止評(píng)價(jià)血小板功能最常見(jiàn)的方法是測(cè)定血小板的聚集功能，抗凝血在離心力135g離心15分鐘，制備富含血小板血漿（PRP）。如果可能，血小板計(jì)數(shù)應(yīng)當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)化（如在濃度為250109/ l時(shí)測(cè)定）,這可以通過(guò)加入少血小板血漿來(lái)實(shí)現(xiàn)。1毫升（）PRP在37℃加入到裝有金屬磁棒的玻璃試管中，在聚集儀中磁棒以1100rpm轉(zhuǎn)動(dòng)，通過(guò)比色計(jì)記錄穿過(guò)PRP的光強(qiáng)度。大多數(shù)誘導(dǎo)劑加入后，血小板形態(tài)由片狀轉(zhuǎn)變?yōu)閳A形，形成偽足，引起短暫的光透過(guò)率的下降，然后由于血小板聚集，光透過(guò)率大幅度增加。光透過(guò)率增加的速度和程度會(huì)被記錄下來(lái)。致聚劑主要為ADP，腎上腺素，膠原蛋白，花生四烯酸，TTXA2的類似物如U46619，或凝血酶受體活化肽如SFLLRN。（凝血酶不能作為PRP的促凝劑，因?yàn)闀?huì)引起凝結(jié)）。正常情況下枸櫞酸抗凝的PRP，對(duì)高濃度致聚劑反應(yīng)的聚集程度，與TXA2的形成，顆粒內(nèi)容物的分泌和血小板表面P選擇素的形成有關(guān)。低血小板計(jì)數(shù)會(huì)影響血小板聚集試驗(yàn)，如果PRP中血小板計(jì)數(shù)低于100109/l結(jié)果就不可靠。如果是脂血，也不能進(jìn)行此試驗(yàn)。如果血小板改變了形態(tài)，但不能與所有的致聚劑發(fā)生聚集，則其原因可能是罕見(jiàn)的Glanzmann血小板減少癥。與膠原蛋白或凝血酶相比，ADP是弱的致聚劑，在枸櫞酸抗凝的PRP中，低濃度ADP只引起初步的，不完全的，可逆的聚集。但當(dāng)濃度高于13μM時(shí)，初級(jí)的血小板聚集將不可逆，而且緊接著會(huì)引起第二相不可逆的過(guò)程（圖1）。這個(gè)兩相血小板聚集過(guò)程依賴TXA2的形成。高濃度ADP情況下，這兩相聚集過(guò)程會(huì)融合，形成一個(gè)平滑的曲線（圖1），類似于膠原蛋白或凝血酶的刺激效果。藥物，如阿司匹林，會(huì)抑制TXA2的形成，阻礙了ADP介導(dǎo)的第二相聚集過(guò)程。在生理性的鈣離子介質(zhì)中，只會(huì)發(fā)生第一相的聚集反應(yīng)。ADP誘導(dǎo)聚集嚴(yán)重減弱，以及膠原蛋白和凝血酶誘導(dǎo)聚集受損，提示為罕見(jiàn)的P2Y12ADP受體異常。噻氯匹定和clopidogrel通過(guò)此受體作用，產(chǎn)生類似的對(duì)ADP誘導(dǎo)選擇性抑制。弱的致聚劑，腎上腺素（510uM），可聚集PRP中的血小板，而不改變血小板的形態(tài)，但腎上腺素的致聚作用并不一致。如果服用了阿司匹林或其它抑制TXA2形成的藥物，血小板對(duì)任何濃度的腎上腺素都不反應(yīng)，不會(huì)產(chǎn)生聚集。膠原纖維（15μg/ml）會(huì)引起特征性滯后（可達(dá)1分鐘）的血小板聚集,聚集需要TXA2形成和顆粒內(nèi)容物的分泌，而且基本上是不可逆的。雖然血小板形態(tài)發(fā)生了變化，但是阿司匹林及其它抑制TXA2形成的藥物可以阻斷低濃度的膠原蛋白引起的聚集反應(yīng)。罕見(jiàn)的GPVI缺陷癥表現(xiàn)為血小板受膠原蛋白刺激后并不發(fā)生聚集，但在受到其它致聚劑的刺激后通常會(huì)發(fā)生聚集?；ㄉ南┧峥梢赞D(zhuǎn)變?yōu)門XA2，因此可作為聚集劑。阿司匹林和其它可以抑制環(huán)氧化酶的藥物具有抑制作用。但是TXA2的類似物U46619，卻可以在此類抑制劑的存在狀況下產(chǎn)生聚集作用。在罕見(jiàn)的環(huán)氧化酶缺失的病人，花生四烯酸不誘導(dǎo)血小板聚集，但U46619會(huì)引起血小板的聚集。SFLLRN(TRAP)具有凝血酶的誘導(dǎo)血小板強(qiáng)聚集作用的功能，只有當(dāng)TXA2形成障礙時(shí)，這一作用才會(huì)稍有減弱。分泌缺陷，特別是致密顆粒缺少ADP的增強(qiáng)作用，會(huì)造成異常的聚集，即存在正常的第一相過(guò)程，而無(wú)第二相過(guò)程。分泌缺陷時(shí)低濃度的膠原蛋白和SFLLRN誘導(dǎo)血小板聚集會(huì)減弱。 瑞托霉素聚集血小板這一試驗(yàn)同樣用聚集儀對(duì)枸櫞酸抗凝的PRP進(jìn)行測(cè)試?？股厝鹜忻顾乜勺鳛橹戮蹌?。正常的樣本是第一相聚集后緊接著會(huì)發(fā)生第二相聚集。缺乏反應(yīng)提示為BernardSoulier綜合癥或VWF缺乏。 全血血小板聚集用阻抗血小板聚集儀可測(cè)定稀釋的抗凝全血的血小板聚集功能。將兩個(gè)電極插入樣本中，當(dāng)有電流通過(guò)時(shí)，血小板會(huì)粘附到電極上。然后
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