血友病(編輯修改稿)
2024-11-19 04:10 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 毒載體目前最為有效的載體系統(tǒng), 利用反轉(zhuǎn)錄可高效表達(dá)。將帶有內(nèi)源內(nèi)含子的人凝血IX 因子cDNA( hFIX 小基因) 構(gòu)建到不含腺病毒基因而只帶有反向末端重復(fù)順序( ITR) 和包裝信號ψ等順式元件的微小腺病毒( mini adenovirus) 載體GT2073 上, 得到載體GTi IX。將該載體與帶有l(wèi)acZ 報告基因的微小腺病毒載體pRP1001 分別轉(zhuǎn)移入腺病毒包裝細(xì)胞293Cre4 中, 隨后再轉(zhuǎn)染輔助病毒AdLC8, 從而包裝出微小腺病毒AdGTi IX 和AdRP1001。經(jīng)超離心純化后對兩種病毒的檢測結(jié)果表明, 1012 / ml 1012/ ml, %。 用AdRP1001 以感染復(fù)數(shù)( MOI) 為50的比例轉(zhuǎn)染3T3 細(xì)胞, X gal 染色后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞藍(lán)染率在90%以上。 用AdGTi IX 以MOI= 50 的比例轉(zhuǎn)染3T3 細(xì)胞, ELISA 結(jié)果表明, / 106 細(xì)胞24h。此結(jié)果顯示出該載體系統(tǒng)在血友病B 基因治療方面有很好的應(yīng)用前景, 為進(jìn)一步的動物試驗及免疫原性研究等臨床前研究奠定了良好的基礎(chǔ)。 將這種微小腺病毒載體系統(tǒng)應(yīng)用于人凝血IX 因子的離體細(xì)胞表達(dá)研究,
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