【文章內(nèi)容簡介】 ： 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：是各種營養(yǎng)物質(zhì)的混合物，是維持組織或細胞生長、發(fā)育、遺傳、繁殖等一系列生命活動比不可少的物質(zhì)，基礎(chǔ)培養(yǎng)基的成分是完全已知的，而且可以按照細胞的不同營養(yǎng)要求增加或減少某些(mǒu xiē)組分。 補充因子：是用來替代血清的各種因子的總稱。其種類很多，包括大分子、小分子物質(zhì)和微量元素等。補充因子又可分為必需補充因子和特殊補充因子。,第三十二頁，共八十頁。,三類(sān l232。i)無血清培養(yǎng)基：,第三十三頁，共八十頁。,培養(yǎng)基制備(zh236。b232。i)應(yīng)考慮的因素,（1）pH值：一般正常的成纖維細胞系以pH=7.4～7.7最好，轉(zhuǎn)化細胞以7.0～7.4更合適，上皮細胞5.5合適。 （2）緩沖能力：碳酸鹽緩沖系統(tǒng)由于毒性小、成本低，對培養(yǎng)物有營養(yǎng)作用，因此比其他緩沖系統(tǒng)用得多。但在生理pH值條件下的緩沖能力差。 （3）滲透壓：一般常用冰點降低(ji224。ngdī)或蒸汽壓升高測定。 （4）黏度：培養(yǎng)基黏度受血清含量影響，在多數(shù)情況下，對細胞生長沒有什么影響。,第三十四頁，共八十頁。,三、動物(d242。ngw249。)細胞培養(yǎng)方法,第三十五頁，共八十頁。,懸浮(xu225。nf)培養(yǎng),懸浮培養(yǎng)是指細胞在培養(yǎng)器中自由懸浮生長的過程，主要用于非帖壁依賴性細胞的培養(yǎng)。 懸浮培養(yǎng)對設(shè)備的要求(yāoqi)簡單，但是懸浮培養(yǎng)的細胞密度較低，轉(zhuǎn)化細胞懸浮培養(yǎng)有潛在致癌危險，培養(yǎng)病毒易失去病毒標記而降低免疫能力。,第三十六頁，共八十頁。,貼壁培養(yǎng),貼壁培養(yǎng)是指必須貼附在固體介質(zhì)表面上生長的細胞培養(yǎng)，主要用于非淋巴組織和多異倍體等貼壁依賴性細胞的培養(yǎng)。由于(y243。uy)大多數(shù)動物細胞屬于貼壁依賴性細胞，貼壁培養(yǎng)是動物細胞培養(yǎng)的一種重要方法。,第三十七頁，共八十頁。,細胞貼壁一般分為貼壁因子(yīnzǐ)吸附于培養(yǎng)表面、細胞與表面接觸、細胞貼壁于培養(yǎng)表面和壁細胞在培養(yǎng)表面上擴展等幾個步驟。,第三十八頁，共八十頁。,固定化培養(yǎng)(p233。iyǎng),固定化培養(yǎng)是既適用于帖壁依賴性細胞(x236。bāo)，有適用于非帖壁依賴性細胞(x236。bāo)的包埋培養(yǎng)方式，具有細胞(x236。bāo)生長密度高、抗剪切力和抗污染能力強等優(yōu)點。一般對于貼壁依賴性細胞(x236。bāo)通常采用膠原包埋，而對于非貼壁依賴性細胞(x236。bāo)則常用海藻酸鈣包埋。常用的細胞(x236。bāo)固定化的方法主要有吸附、共價帖附、離子/共價交聯(lián)、包埋和微囊化等。,第三十九頁，共八十頁。,四、動物(d242。ngw249。)細胞培養(yǎng)技術(shù)和工藝,大規(guī)模動物(d242。ngw249。)細胞培養(yǎng)的工藝流程,第四十頁，共八十頁。,工藝過程中，先將組織切成碎片，然后用溶解蛋白質(zhì)的酶處理而得到單個細胞，再用離心法收集細胞。將細胞植入營養(yǎng)(y237。ngyǎng)培養(yǎng)基，使細胞在培養(yǎng)基中增殖到覆蓋瓶壁表面，用酶把細胞從瓶壁上消化下來，再接種到若干培養(yǎng)瓶中進行擴大培養(yǎng)，將培養(yǎng)所得的細胞“種子”冷藏于液氮中，從液氮中取出一部分細胞“種子”進行解凍、復(fù)活培養(yǎng)，進行擴大培養(yǎng)以獲得足夠的細胞量，將細胞接種于大規(guī)模生物反應(yīng)器中進行大規(guī)模培養(yǎng)，按照產(chǎn)物的不同形式進行產(chǎn)物分離純化。,第四十一頁，共八十頁。,第三節(jié) 植物(zh237。w249。)細胞的培養(yǎng),一、植物細胞培養(yǎng)流程 二、植物細胞(x236。bāo)培養(yǎng)基的組成 三、植物細胞培養(yǎng)的方法 四、植物細胞的大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù) 五、影響植物細胞培養(yǎng)的因素,第四十二頁，共八十頁。,植物細胞培養(yǎng)是指在離體條件下培養(yǎng)植物細胞的方法。將愈創(chuàng)組織或其他易分散的組織置于液體(y232。tǐ)培養(yǎng)基中，進行振蕩培養(yǎng)，使組織分散成游離的懸浮細胞，通過繼代培養(yǎng)使細胞增殖，獲得大量的細胞群體。小規(guī)模的懸浮培養(yǎng)在培養(yǎng)瓶中進行，大規(guī)模可利用發(fā)酵罐生產(chǎn)。,第四十三頁，共八十頁。,植物細胞培養(yǎng)能生產(chǎn)一些微生物所不能合成的特有代謝產(chǎn)物，如生物堿類（尼古丁、阿托品、番茄堿等）、色素（葉綠素、類胡蘿卜素(h lu243。 bo s249。)、葉黃素等）、類黃酮和花色苷、苯酚、皂角苷、固醇類、萜類、某些抗生素和生長控制劑（赤霉素等）、調(diào)味品和香料等。 細胞培養(yǎng)用于種苗生產(chǎn)，如蘭花等名貴花卉和谷物良種的培育，可不受外界環(huán)境的影響。,第四十四頁，共八十頁。,工業(yè)化生產(chǎn)的植物(zh237。w249。)細胞培養(yǎng)產(chǎn)物,第四十五頁，共八十頁。,一、植物(zh237。w249。)細胞培養(yǎng)流程,植物細胞培養(yǎng)與微生物培養(yǎng)類似，可采用液體培養(yǎng)基進行懸浮培養(yǎng)。植物組織細胞的分離，一般采用次氯酸鹽的稀溶液、福爾馬林、酒精等消毒劑對植物體或種子進行滅菌消毒。 種子消毒后在無菌狀態(tài)下發(fā)芽，將其組織的一部分在半固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，隨著細胞增殖(zēngzh237。)形成不定形細胞團（愈創(chuàng)組織），將此愈創(chuàng)組織移入液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)，愈創(chuàng)化時間隨植物種類和培養(yǎng)基條件而異，慢的需幾周以上，一旦增殖(zēngzh237。)開始，就可用反復(fù)繼代培養(yǎng)加快細胞生殖。 繼代培養(yǎng)可用試管或燒瓶等，大規(guī)模的懸浮培養(yǎng)可用傳統(tǒng)的機械攪拌罐、氣升式發(fā)酵罐。,第四十六頁，共八十頁。,植物細胞(x236。bāo)大量培養(yǎng)流程及培養(yǎng)系統(tǒng),第四十七頁，共八十頁。,二、植物(zh237。w249。)細胞培養(yǎng)基的組成,植物細胞培養(yǎng)與動物細胞培養(yǎng)相比，其最大的優(yōu)點是植物細胞能在簡單的合成培養(yǎng)基上生長。其培養(yǎng)基的成分由碳源、有機氮源、無機鹽類、維生素、植物生長激素和有機酸等其他(q237。tā)物質(zhì)組成。,第四十八頁，共八十頁。,常用的植物細胞(x236。bāo)培養(yǎng)基配比,第四十九頁，共八十頁。,