【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ： 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：是各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物，是維持組織或細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育、遺傳、繁殖等一系列生命活動(dòng)比不可少的物質(zhì)，基礎(chǔ)培養(yǎng)基的成分是完全已知的，而且可以按照細(xì)胞的不同營(yíng)養(yǎng)要求增加或減少某些(mǒu xiē)組分。 補(bǔ)充因子：是用來(lái)替代血清的各種因子的總稱。其種類(lèi)很多，包括大分子、小分子物質(zhì)和微量元素等。補(bǔ)充因子又可分為必需補(bǔ)充因子和特殊補(bǔ)充因子。,第三十二頁(yè)，共八十頁(yè)。,三類(lèi)(sān l232。i)無(wú)血清培養(yǎng)基：,第三十三頁(yè)，共八十頁(yè)。,培養(yǎng)基制備(zh236。b232。i)應(yīng)考慮的因素,（1）pH值：一般正常的成纖維細(xì)胞系以pH=7.4～7.7最好，轉(zhuǎn)化細(xì)胞以7.0～7.4更合適，上皮細(xì)胞5.5合適。 （2）緩沖能力：碳酸鹽緩沖系統(tǒng)由于毒性小、成本低，對(duì)培養(yǎng)物有營(yíng)養(yǎng)作用，因此比其他緩沖系統(tǒng)用得多。但在生理pH值條件下的緩沖能力差。 （3）滲透壓：一般常用冰點(diǎn)降低(ji224。ngdī)或蒸汽壓升高測(cè)定。 （4）黏度：培養(yǎng)基黏度受血清含量影響，在多數(shù)情況下，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有什么影響。,第三十四頁(yè)，共八十頁(yè)。,三、動(dòng)物(d242。ngw249。)細(xì)胞培養(yǎng)方法,第三十五頁(yè)，共八十頁(yè)。,懸浮(xu225。nf)培養(yǎng),懸浮培養(yǎng)是指細(xì)胞在培養(yǎng)器中自由懸浮生長(zhǎng)的過(guò)程，主要用于非帖壁依賴性細(xì)胞的培養(yǎng)。 懸浮培養(yǎng)對(duì)設(shè)備的要求(yāoqi)簡(jiǎn)單，但是懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞密度較低，轉(zhuǎn)化細(xì)胞懸浮培養(yǎng)有潛在致癌危險(xiǎn)，培養(yǎng)病毒易失去病毒標(biāo)記而降低免疫能力。,第三十六頁(yè)，共八十頁(yè)。,貼壁培養(yǎng),貼壁培養(yǎng)是指必須貼附在固體介質(zhì)表面上生長(zhǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)，主要用于非淋巴組織和多異倍體等貼壁依賴性細(xì)胞的培養(yǎng)。由于(y243。uy)大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞屬于貼壁依賴性細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的一種重要方法。,第三十七頁(yè)，共八十頁(yè)。,細(xì)胞貼壁一般分為貼壁因子(yīnzǐ)吸附于培養(yǎng)表面、細(xì)胞與表面接觸、細(xì)胞貼壁于培養(yǎng)表面和壁細(xì)胞在培養(yǎng)表面上擴(kuò)展等幾個(gè)步驟。,第三十八頁(yè)，共八十頁(yè)。,固定化培養(yǎng)(p233。iyǎng),固定化培養(yǎng)是既適用于帖壁依賴性細(xì)胞(x236。bāo)，有適用于非帖壁依賴性細(xì)胞(x236。bāo)的包埋培養(yǎng)方式，具有細(xì)胞(x236。bāo)生長(zhǎng)密度高、抗剪切力和抗污染能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。一般對(duì)于貼壁依賴性細(xì)胞(x236。bāo)通常采用膠原包埋，而對(duì)于非貼壁依賴性細(xì)胞(x236。bāo)則常用海藻酸鈣包埋。常用的細(xì)胞(x236。bāo)固定化的方法主要有吸附、共價(jià)帖附、離子/共價(jià)交聯(lián)、包埋和微囊化等。,第三十九頁(yè)，共八十頁(yè)。,四、動(dòng)物(d242。ngw249。)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和工藝,大規(guī)模動(dòng)物(d242。ngw249。)細(xì)胞培養(yǎng)的工藝流程,第四十頁(yè)，共八十頁(yè)。,工藝過(guò)程中，先將組織切成碎片，然后用溶解蛋白質(zhì)的酶處理而得到單個(gè)細(xì)胞，再用離心法收集細(xì)胞。將細(xì)胞植入營(yíng)養(yǎng)(y237。ngyǎng)培養(yǎng)基，使細(xì)胞在培養(yǎng)基中增殖到覆蓋瓶壁表面，用酶把細(xì)胞從瓶壁上消化下來(lái)，再接種到若干培養(yǎng)瓶中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，將培養(yǎng)所得的細(xì)胞“種子”冷藏于液氮中，從液氮中取出一部分細(xì)胞“種子”進(jìn)行解凍、復(fù)活培養(yǎng)，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)以獲得足夠的細(xì)胞量，將細(xì)胞接種于大規(guī)模生物反應(yīng)器中進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，按照產(chǎn)物的不同形式進(jìn)行產(chǎn)物分離純化。,第四十一頁(yè)，共八十頁(yè)。,第三節(jié) 植物(zh237。w249。)細(xì)胞的培養(yǎng),一、植物細(xì)胞培養(yǎng)流程 二、植物細(xì)胞(x236。bāo)培養(yǎng)基的組成 三、植物細(xì)胞培養(yǎng)的方法 四、植物細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù) 五、影響植物細(xì)胞培養(yǎng)的因素,第四十二頁(yè)，共八十頁(yè)。,植物細(xì)胞培養(yǎng)是指在離體條件下培養(yǎng)植物細(xì)胞的方法。將愈創(chuàng)組織或其他易分散的組織置于液體(y232。tǐ)培養(yǎng)基中，進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，使組織分散成游離的懸浮細(xì)胞，通過(guò)繼代培養(yǎng)使細(xì)胞增殖，獲得大量的細(xì)胞群體。小規(guī)模的懸浮培養(yǎng)在培養(yǎng)瓶中進(jìn)行，大規(guī)?？衫冒l(fā)酵罐生產(chǎn)。,第四十三頁(yè)，共八十頁(yè)。,植物細(xì)胞培養(yǎng)能生產(chǎn)一些微生物所不能合成的特有代謝產(chǎn)物，如生物堿類(lèi)（尼古丁、阿托品、番茄堿等）、色素（葉綠素、類(lèi)胡蘿卜素(h lu243。 bo s249。)、葉黃素等）、類(lèi)黃酮和花色苷、苯酚、皂角苷、固醇類(lèi)、萜類(lèi)、某些抗生素和生長(zhǎng)控制劑（赤霉素等）、調(diào)味品和香料等。 細(xì)胞培養(yǎng)用于種苗生產(chǎn)，如蘭花等名貴花卉和谷物良種的培育，可不受外界環(huán)境的影響。,第四十四頁(yè)，共八十頁(yè)。,工業(yè)化生產(chǎn)的植物(zh237。w249。)細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物,第四十五頁(yè)，共八十頁(yè)。,一、植物(zh237。w249。)細(xì)胞培養(yǎng)流程,植物細(xì)胞培養(yǎng)與微生物培養(yǎng)類(lèi)似，可采用液體培養(yǎng)基進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。植物組織細(xì)胞的分離，一般采用次氯酸鹽的稀溶液、福爾馬林、酒精等消毒劑對(duì)植物體或種子進(jìn)行滅菌消毒。 種子消毒后在無(wú)菌狀態(tài)下發(fā)芽，將其組織的一部分在半固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，隨著細(xì)胞增殖(zēngzh237。)形成不定形細(xì)胞團(tuán)（愈創(chuàng)組織），將此愈創(chuàng)組織移入液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)，愈創(chuàng)化時(shí)間隨植物種類(lèi)和培養(yǎng)基條件而異，慢的需幾周以上，一旦增殖(zēngzh237。)開(kāi)始，就可用反復(fù)繼代培養(yǎng)加快細(xì)胞生殖。 繼代培養(yǎng)可用試管或燒瓶等，大規(guī)模的懸浮培養(yǎng)可用傳統(tǒng)的機(jī)械攪拌罐、氣升式發(fā)酵罐。,第四十六頁(yè)，共八十頁(yè)。,植物細(xì)胞(x236。bāo)大量培養(yǎng)流程及培養(yǎng)系統(tǒng),第四十七頁(yè)，共八十頁(yè)。,二、植物(zh237。w249。)細(xì)胞培養(yǎng)基的組成,植物細(xì)胞培養(yǎng)與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)相比，其最大的優(yōu)點(diǎn)是植物細(xì)胞能在簡(jiǎn)單的合成培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。其培養(yǎng)基的成分由碳源、有機(jī)氮源、無(wú)機(jī)鹽類(lèi)、維生素、植物生長(zhǎng)激素和有機(jī)酸等其他(q237。tā)物質(zhì)組成。,第四十八頁(yè)，共八十頁(yè)。,常用的植物細(xì)胞(x236。bāo)培養(yǎng)基配比,第四十九頁(yè)，共八十頁(yè)。,