20xx年醫(yī)學(xué)專題—干細胞研究進展-20xx講稿-0(編輯修改稿)
2024-11-14 19:24 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 征象之前，用玻璃針挑取ESC集落，用 胰酶消化，反復(fù)吹打離散后重新接種。 集落呈克隆狀生長，與飼養(yǎng)(s236。yǎng)層細胞之間 有明顯的界限，細胞排列緊密，界限不 清，可見折光性比較強的分裂相。,從小鼠囊胚的內(nèi)細胞群中分離(fēnl237。)培養(yǎng)ESC,第二十一頁，共四十五頁。,ESC特異性表面(biǎomi224。n)標(biāo)記,從小鼠囊胚的內(nèi)細胞(x236。bāo)群中分離培養(yǎng)ESC,第二十二頁，共四十五頁。,ESC的鑒定嵌合體制備技術(shù)： 嵌合體（chimera）是指由兩種或兩種以上不同遺傳構(gòu)成的細胞 構(gòu)成的個體，這種個體的組織器官由基因型不同的細胞群組成。ESC能廣泛(guǎngf224。n)參與宿主各組織的形成，尤其是生殖系的形成，成 為嵌合體制備的最佳實驗材料。 嵌合體的成功制備也是證明ESC具有發(fā)育全能性的一個金指標(biāo)。,從小鼠囊胚的內(nèi)細胞群中分離(fēnl237。)培養(yǎng)ESC,嵌合體動物(d242。ngw249。)的制備方法主要有三種：融合法、顯微注射法和共培養(yǎng)法。,融合法 是指將來源于不同品系動物的早胚消化去透明帶后，在融合劑（多用植物血球凝集素）的作用下，形成融合胚。實驗過程中，由于消化劑、融合劑的使用，會對胚胎造成不同程度的損傷，所以融合法制備嵌合胚的成功率較低。,共培養(yǎng)法 是將著床前的早期胚胎與ESC進行共培養(yǎng)而獲得嵌合胚的一種方法。雖然有資料表明，粘附在早期胚胎滋養(yǎng)層外面的ESC，經(jīng)過過夜培養(yǎng)，能有效的與宿主ICM細胞整合，但是在共培養(yǎng)過程中，很難控制發(fā)生整合的ESC的數(shù)目，因此也限制了其使用。,顯微注射法 應(yīng)用最為廣泛。通過顯微注射法構(gòu)建嵌合體是一項復(fù)雜的技術(shù)，ESC本身的特性、受體胚胎的品系來源以及顯微注射的熟練程度等都會直接影響嵌合體的獲得。,第二十三頁，共四十五頁。,第一(d236。yī)部分,C57BL/6J inbred mice,KM outbred mice,ES cell culture,Single–cell suspension,510 ESC,micromanipulator,reimplantation,chimeras,pseudopregnant foster mother(KM),第二十四頁，共四十五頁。,ESC的鑒定嵌合體制備技術(shù)的應(yīng)用： 目前，嵌合體制備技術(shù)已廣泛應(yīng)用于發(fā)育生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)、 遺傳學(xué)、腫瘤學(xué)、毒理學(xué)等眾多研究領(lǐng)域，在當(dāng)今生物醫(yī)學(xué)研 究中發(fā)揮著愈來愈重要的作用。 在制備嵌合體之前，可以對ESC進行基因操作，獲取(hu242。qǔ)一些優(yōu)良 性狀，利用基因操作成功的ESC進行嵌合體的制備，如果出現(xiàn) 生殖系嵌合，就可以把優(yōu)良性狀遺傳下去。在家畜品種改良方 面有廣泛的應(yīng)用。,從小鼠囊胚的內(nèi)細胞群中分離(fēnl237。)培養(yǎng)ESC,第二十五頁，共四十五頁。,人胚胎(pēitāi)著床前的發(fā)育過程：,從人囊胚的內(nèi)細胞群中分離(fēnl237。)培養(yǎng)ESC,第二十六頁，共四十五頁。,ESC的誘導(dǎo)分化： 細胞分化cell differentiation：在個體發(fā)育中，由一種相同(xiānɡ t243。nɡ)的細胞 類型經(jīng)細胞分裂后逐漸在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上形成穩(wěn)定性差異， 產(chǎn)生各不相同(xiānɡ t243。nɡ)的細胞類群的過程。 誘導(dǎo)induction：胚胎中的一個區(qū)域影響另一個區(qū)域，使其沿一條 新途徑進行分化；某些環(huán)境因子的刺激使基因進入轉(zhuǎn)錄狀態(tài)。 ESC的誘導(dǎo)分化：胚胎干細胞在外界因素的刺激下逐漸發(fā)育為具 有特殊形態(tài)和功能的專一細胞的過程。,第二十七頁，共四十五頁。,目前，在體外通過加入一些誘導(dǎo)劑或細胞因子進行誘導(dǎo)分化實驗，還很難模擬體內(nèi)的正常分化過程，任何一個誘導(dǎo)體系都不能保證誘導(dǎo)ESC定向分化為某一類型細胞，只能(zhī n233。nɡ)使某種類型的細胞趨于優(yōu)勢。,第二十八頁，共四十五頁。,第二十九頁，共四十五頁。,ESC誘導(dǎo)分化的常用方法(fāngfǎ): 1. 加入誘導(dǎo)細胞分化的因子或化學(xué)物質(zhì)，如VGEF、 bFGF 、DMSO和RA等 2. 將ESC與特定的細胞共培養(yǎng) 3. 將某種分化誘導(dǎo)因子的基因轉(zhuǎn)入ESC內(nèi),第三十頁，共四十五頁。,ESC的神經(jīng)誘導(dǎo)： 1. 維甲酸（retinoic acid，RA）誘導(dǎo)： 維甲酸是維生素在體內(nèi)的活性衍生物,是一種很強的分化誘導(dǎo)劑, 它可誘導(dǎo)類胚體分化成多種細胞類型(l232。ix237。ng), 其分化方向取決于維甲酸的作用階段及劑量。 RA進入靶細胞后，由CRABP運送至細胞核，與核受體（RAR和 RXR）結(jié)合。RXR自身或者與其他受體結(jié)合成同 二聚體或異二聚體,識別DNA上維甲酸反應(yīng)元件(RARE或RXRE),調(diào)控靶基因的表達，發(fā)揮重要的生物學(xué)效應(yīng)，如調(diào)節(jié)細胞的分化、增殖和程序化死亡等。,1982年JonesWilleneuve首次報道將RA運用(y249。ny242。ng)于胚胎癌細胞（P19）向神經(jīng)元細胞和神經(jīng)膠質(zhì)細胞的誘導(dǎo), 在2448h內(nèi)有神經(jīng)樣細胞移出。 JonesVilleneuve EM, McBurney MW, Rogers K
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