20xx年醫(yī)學(xué)專題—mtt法檢測(cè)細(xì)胞活力講解(編輯修改稿)
2024-11-04 12:59 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 最大陽性反應(yīng)率 Pn:最小陽性反應(yīng)率,第十一頁，共二十四頁。,舉例(jǔ l236。),藥物濃度(n243。ngd249。)0.0.00.000.0000.00000.000001umol/l，稀釋倍數(shù)為10，最大濃度為0.1，抑制率為0.9 0.80、0.60.40.21，0.06。代入 計(jì)算公式： Pm=0.95 Pn=0.06 P=0.95+0.80+0.65+0.43+0.21+0.06=3.1 Xm=lg0.1=1 lgI=lg0.1/0.01=1 lgIC50=11*(3.1(30.950.06)/4)=3.6025 IC50=0.00025,第十二頁，共二十四頁。,注意事項(xiàng),1． 選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度。在進(jìn)行MTT試驗(yàn)前，對(duì)每一種細(xì)胞都應(yīng)測(cè)其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長曲線(qūxi224。n)，然后確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間。 2． 設(shè)空白對(duì)照，與試驗(yàn)平行設(shè)不加細(xì)胞只加培養(yǎng)液的空白對(duì)照孔。最后比色時(shí)，以空白孔調(diào)零。,第十三頁，共二十四頁。,實(shí)驗(yàn)前應(yīng)明確(m237。ngqu232。)的問題,1.選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度。一般情況下，96孔培養(yǎng)板的一內(nèi)貼壁細(xì)胞長滿時(shí)約有105個(gè)細(xì)胞。但由于不同細(xì)胞貼壁后面積差異很大，因此，在進(jìn)行MTT試驗(yàn)前，要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長曲線，確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間，以保證培養(yǎng)終止致細(xì)胞過滿。這樣，才能(c225。in233。ng)保證MTT結(jié)晶形成酌量與細(xì)胞數(shù)呈的線性關(guān)系。否則細(xì)胞數(shù)太多敏感性降低，太少觀察不到差異。,第十四頁，共二十四頁。,2.藥物濃度的設(shè)定(sh232。 d236。nɡ)。一定要多看文獻(xiàn)，參考別人的結(jié)果再定個(gè)比較大的范圍先初篩。根據(jù)自己初篩的結(jié)果縮小濃度和時(shí)間范圍再細(xì)篩。切記！否則，可能你用的時(shí)間和濃度根本不是藥物的有效濃度和時(shí)間。 3. 時(shí)間點(diǎn)的設(shè)定。在不同時(shí)間點(diǎn)的測(cè)定OD值，輸入excel表，最后得到不同時(shí)間點(diǎn)的抑制率變化情況，畫出變化的曲線，曲線什么時(shí)候變得平坦了（到了平臺(tái)期）那個(gè)時(shí)間點(diǎn)應(yīng)該就是最好的時(shí)間點(diǎn)（因?yàn)檫@個(gè)時(shí)候的細(xì)胞增殖抑制表現(xiàn)的最明顯）。,
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