【文章內(nèi)容簡介】 輔導：異型淋巴細胞在傳染性單核增多癥、病毒性肺肝炎、流行性出血熱等病毒感染或過敏原則刺激下，可使淋巴細胞增生，并出現(xiàn)某些形態(tài)學變化，稱為異型淋巴細胞。Downey將其按形態(tài)特征分為三型：1型（空泡型）：最多見。胞體比正常淋巴細胞稍大，多為圓形、橢圓形或不規(guī)則形。核圓形、腎形或分葉狀、常偏位。染色質(zhì)粗糙，呈粗網(wǎng)狀或小塊狀，排列不規(guī)則。胞質(zhì)豐富，染深藍色，含空泡或呈泡沫狀。Ⅱ型（幼稚型）：胞體較大，核圓形或卵圓形。染色質(zhì)細致呈網(wǎng)狀排列，可見1～2個至發(fā)生母細胞化的結果。Ⅲ型（不規(guī)則型）：胞體較大，外形常不規(guī)則，可有多數(shù)足。核形狀及結構與1型相同或更不殊途同歸，染色質(zhì)較粗糙致密。胞質(zhì)量豐富，染色淡藍或灰藍色，有透明感，邊緣處著色較深藍色。可有少數(shù)空泡。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：胎兒血型的預測羊水中存在ABH（O）血型物質(zhì)，故可在妊娠期預測胎兒的血型，以便對母體胎兒血型不合者進行圍生期監(jiān)護、治療和對新生兒的作好搶救準備。一、ABH分泌型血型的預測本試驗是根據(jù)羊中分泌的血型物質(zhì)可將相應抗血清中抗體中和原理設計的。，馮分作用10min后，便血型物質(zhì)將抗體中和完全，再于各管加入相對應的2%標準A型，B型，充分混勻。置室溫30min，低速離心1分鐘觀察有無凝集。本試驗最關鍵的部分是要選擇好抗血清的最適稀釋度。即選擇抗血清與2%標準紅細胞懸液恰能產(chǎn)生4+凝集的最高稀釋度，這樣才能在加入羊水后將相應抗體中和掉不再出現(xiàn)4+凝集。：11：256倍比稀釋后，將2%A，B，置室溫1小時后觀察結果，以出現(xiàn)4+凝塊的最高稀釋度定為最適稀釋度。實驗中要注意控制溫度，以免由于抗血清中冷凝集素未被完全吸收而造成結果判斷錯誤。二、ABH（O）血型酶的測定羊水ABH血型物質(zhì)的測定，無法預測非分泌型胎兒的血型。已知由A基因產(chǎn)生的N乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶能將N乙酰氨基半乳聯(lián)接在H物質(zhì)末端的半乳糖上，形成A血型物質(zhì)，B基因產(chǎn)生的D半乳糖轉(zhuǎn)移酶將D半乳糖聯(lián)接在H物質(zhì)末端的半乳糖上，形成B血型物質(zhì)。當有糖供體、二價錳離子與O型紅細胞共同孵育時，羊水中的轉(zhuǎn)移酶可在紅細胞膜上合億A或B物質(zhì)，利用血型測定的方法可檢測埋分泌型胎兒的血型。這時有嚴重ABO同種免疫史的孕婦非分泌型的胎兒血型鑒定提供了可能，也為在位于ABO基因部位的遺傳性疾病的產(chǎn)前診斷提供了可能，而可不必考慮胎兒是否為分泌型。2012年醫(yī)學檢驗考試臨檢基礎知識輔導：精液的男性生育力指數(shù)測定【計算公式】I=M（NV）/（A106）式中I為男性生育力指數(shù)；M為活動精子百分率；N為每毫升的精子數(shù)；V為精子運動的速度；A為畸形精子的百分率?！菊⒖贾怠空Ｈ松χ笖?shù)》1.【臨床意義】，表明完全無生育能力。，表明有不同程度的生育障礙。2012年醫(yī)學檢驗考試血液檢驗復習輔導：HIV抗體常見檢測方法目前作為診斷手段使用的檢測主要包括抗HIV病毒抗體檢測、病毒培養(yǎng)、核酸檢測和抗原檢測。其中對病毒抗體的檢測是最常規(guī)使用的方法，這不但是由于這類檢測特異性、敏感性較高，方法相對簡便、成熟，更重要的原因是HIV抗體在病毒感染后除早期短暫的“窗口期”外的整個生命期間長期穩(wěn)定地存在并可被檢測到。在一些特殊情況下，當抗體檢測無法滿足HIV感染診斷的需要時，病毒分離及測定、核酸檢測、抗原檢測可作為輔助手段使用，這包括對非典型血清學反應樣品的診斷、HIV感染的窗口期診斷、新生兒早期診斷和對特殊樣品的診斷。2012年醫(yī)學檢驗考試血液檢驗復習輔導：HIV抗體確認實驗免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗（LIATEKHIVⅢ）、放射免疫沉淀試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）。國內(nèi)常用的確認試驗方法是WB.（一）免疫印跡實驗（WB）免疫印跡實驗是廣泛用于許多傳染病診斷的實驗方法，就HIV的病原學診斷而言，它是首選的用以確認HIV抗體的確認實驗方法，WB的檢測結果常常被作為鑒別其他檢驗方法優(yōu)劣的“金標準”。確認試驗流程：有HIV1/2混合型和單一的HIV1或HIV2型。先用HIV1/2混合型試劑進行檢測，如果呈陰性反應，則報告HIV抗體陰性；如果呈陽性反應，則報告HIV1抗體陽性；如果不滿足陽性標準，則判為HIV抗體檢測結果不確定。如果出現(xiàn)HIV2型的特異性指示條帶，需用HIV2型免疫印跡試劑再做HIV2的抗體確認試驗，呈陰性反應，報告HIV2抗體陰性；呈陽性反應則報告HIV2抗體血清學陽性，并將樣品送國家參比實驗室進行核酸序列分析，WB的敏感性一般不低于初篩實驗，但它的特異性很高，這主要是基于HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測針對不同抗原成分的抗體，因而能夠用WB方法鑒別初篩實驗的準確性。從WB確認試驗結果看出，初篩試驗盡管選擇質(zhì)量較好的試劑，如第三代ELISA，仍會有假陽性出現(xiàn)，必須通過確認試驗才能得出準確結果。（二）免疫熒光實驗（IFA）IFA法經(jīng)濟、簡便、快速，曾被FDA推薦用于WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓練的技術人員、觀察和解釋結果易受主觀因素的影響，結果不宜長期保存，IFA不宜在一般的實驗室開展和應用。2012年醫(yī)學檢驗考試臨檢基礎知識輔導：重視血常規(guī)的復檢工作目前血細胞分析儀己經(jīng)普及到縣醫(yī)院或衛(wèi)生院，這對提高血細胞常規(guī)的準確性和重復性，減輕工作人員勞動強度起促進作用。但是我們應該認識到血細胞分析儀還是一個過篩工具，至今最先進的全自動血細胞分析儀還不能完全取代人工檢查，仍然有部分標本需要復檢。據(jù)我所知有的醫(yī)院有了血細胞分析儀，把人工操作的工具、試劑全丟棄，基本上不再復檢了。有的單位即使復檢，也沒有復檢標準，隨心所欲，其復檢率只有百分之幾，這顯然是不負責任的?，F(xiàn)就此問題談談個人看法。一、為什么要復檢？考試用書 血細胞分析儀測定原理雖有不同，但它的各種項目的閾值是人設定的，而且是固定的，可是病人血細胞變化是千姿百態(tài)，有部分細胞難以識別或認錯干擾其它細胞計數(shù)，如有核紅細胞可影響白細胞計數(shù)；細胞碎片、血小板聚集可影響血小板計數(shù)等。尤其是白細胞形態(tài)學分類與血細胞分析儀的白細胞分類有本質(zhì)上的不同，三分群僅僅是根據(jù)細胞大小來分而己，即使先進的五分類也與形態(tài)學也有很大差異，又如中性粒細胞毒性病變、變異淋巴細胞、瘧原蟲等臨床需要的指標無法顯示；有的幼稚細胞、有核紅細胞也不能區(qū)分；各參數(shù)之間有時還存在互相干擾?？傊?，血細胞分析儀的結果僅僅是屬于過篩而己，不能完全代替人工鏡檢。根據(jù)1987年我赴日本考察時，日本對三分群儀器白細胞分類是不收費的，而且每一例仍然需要涂片染色，在顯微鏡下重新分類后才能報告。1989年Coulter公司制定了復檢標準，調(diào)查了11個床位及性質(zhì)不同的醫(yī)療單位，它們均使用該公司的三分群血細胞分析儀，根據(jù)該公司的復檢標準，其復檢率為15%～60%，平均為40%，使手工分類減少40～85%，平均減少了60%，也就是說用節(jié)省下來的時間好好為40%需要分類的病人服務。最近日本名古屋大學醫(yī)學部附屬醫(yī)院報告，他們用SysmexXE2100（五分類）%.再次證明當前最先進血細胞分析儀也不能完全替代人工檢查。由于沒有復檢而產(chǎn)生的漏檢白血病、異常淋巴細胞、瘧原蟲，還有EDTA依賴性血小板假性降低等己引起的醫(yī)療糾紛，應該引起我們深思。二、復檢內(nèi)涵尚待統(tǒng)一有人認為“復檢”就是要在鏡下重新進行白細胞分類計數(shù)而己，這是偏面的。復檢內(nèi)涵應包據(jù)：對血細胞分析儀測定的全部結果進行評估，必要時包括原標本重查，或重新用人工復查等。因此血常規(guī)手工操作不能丟；2012年醫(yī)學檢驗考試臨檢基礎知識輔導：精液檢查的具備條件受檢者，經(jīng)歷一段經(jīng)常排精過程后，禁房事5－7天（上次排精到取標本間隔時間至少不得少于100小時）；備大口有蓋清潔干燥容器一個，以手淫方式獲取精液，一次全部射入容器，蓋上蓋，記錄標本離體時間；貼身保溫，30分鐘內(nèi)送到化驗室，并向檢驗員提供標本取出時間。精液常規(guī)觀察：精液總?cè)萘浚ê辽踊顒忧闆r，精子密度（個/毫升），精液液化時間（標本取出到精液液化的時間），不動精子（個/高倍視野）等。見不動精子，須染色方可區(qū)分：不活動的精子、死精子、未成熟精子等。找不到精子必須離心后檢驗，仍然找不到精子；方可報告無精。經(jīng)三次取樣化驗，結果仍然找不到精子方可確認無精子癥。2012年醫(yī)學檢驗考試免疫檢驗輔導：血漿的鑒別方法血漿是血液的液體成分，血細胞懸濁于其中。人體含有27503300毫升血漿，約占血液總體積的55%.血漿的絕大部分是水（體積的90%），其中溶解的物質(zhì)主要是血漿蛋白，還包括葡萄糖、無機鹽離子、激素以及二氧化碳。血漿的主要功能是運載血細胞，同時也是運輸分泌產(chǎn)物的主要媒介。將新鮮血液離心，使血細胞沉降，上層淡黃色清液即是血漿。血漿與血清的區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。2012年醫(yī)學檢驗考試免疫檢驗輔導：血漿的主要作用提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細胞生長必須的物質(zhì)。提供激素和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。提供結合蛋白：結合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用：有一些細胞，如內(nèi)皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經(jīng)被廣泛用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護細胞免受機械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們在代謝解毒中起重要作用，如SeO3，硒等。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：離心技術的工具離心機（centrifuge）是實施離心技術的裝置。離心機的種類很多，按照使用目的，可兩類，即制備型離心機和分析型離心機。前者主要用于分離生物材料，每次分離樣品的容量比較大，后者則主要用于研究純品大分子物質(zhì)，包括某些顆粒體如核蛋白體等物質(zhì)的性質(zhì)，每次分析的樣品容量很小，根據(jù)待測物質(zhì)在離心場中的行為（可用離心機中的光學系統(tǒng)連續(xù)地監(jiān)測），能推斷其純度、形狀和相對分子質(zhì)量等性質(zhì)。兩類離心機由于用途不同，故其主要結構也有差異。通常所使用的離心機根據(jù)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速大小的不同可分為普通離心機、高速離心機和超速離心機三類2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：離心技術的概況離心技術是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時產(chǎn)生強大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細胞、細胞器、病毒和生物大分子等。離心機轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時，當懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時，顆粒離開軸心方向移動，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時，則顆粒朝向軸心方向移動而發(fā)生漂浮。常用的離心機有多種類型，一般低速離心機的最高轉(zhuǎn)速不超過6000rpm，高速離心機在25000rpm以下，超速離心機的最高速度達30000rpm以上。根據(jù)離心原理，可設計多種離心方法，常見下列三大類型：。通過逐步增加相對離心力，使一個非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi)，達到彼此分離的目的。本法可分離各種細胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。2）預制梯度等密度離心法。要求在離心前預先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達與自身密度相等的梯度層，即達到等密度的位置而獲得分離。3）自成梯度等密度離心法。某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長時間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時，可以帶動原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達與其自身密度相等的梯度層里，即達到等密度的位置而獲得分離。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：離心技術的概況離心技術是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時產(chǎn)生強大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細胞、細胞器、病毒和生物大分子等。離心機轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時，當懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時，顆粒離開軸心方向移動，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時，則顆粒朝向軸心方向移動而發(fā)生漂浮。常用的離心機有多種類型，一般低速離心機的最高轉(zhuǎn)速不超過6000rpm，高速離心機在25000rpm以下，超速離心機的最高速度達30000rpm以上。根據(jù)離心原理，可設計多種離心方法，常見下列三大類型：。通過逐步增加相對離心力，使一個非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒