【文章內(nèi)容簡介】 格有100mL、250mL、500mL和1000 mL用來裝無菌水、培養(yǎng)基和振蕩培養(yǎng)微生物等。規(guī)格有50mL、100mL、250mL、500mL和1000mL 用來配制培養(yǎng)基與各種溶液等。 、1mL、2mL、5mL、10mL用來量取轉(zhuǎn)移各種溶液等。 規(guī)格有50mL、100mL、250mL、500mL。（二）學習玻璃器皿的洗滌方法 在2%的鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時，用自來水沖洗干凈。（1）試管、培養(yǎng)皿、三角瓶：洗衣粉和去污粉洗刷，自來水沖洗 A 裝有固體培養(yǎng)基：刮掉，洗滌B 帶菌的器皿：2%%，然后洗滌 C 帶病原菌培養(yǎng)物的器皿：先高壓蒸汽滅菌，倒去培養(yǎng)物（2）玻璃吸管：吸管尖端與裝在水龍頭上的橡皮管連接，反復沖洗A 吸過血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管：立即投入盛有自來水的容器中浸泡，實驗后集中沖洗。B 塞有棉花的吸管：用水將棉花沖出，然后沖洗C 吸過含有微生物培養(yǎng)物的吸管：2%%新潔爾滅消毒液中浸泡24小時然后洗 D 吸管內(nèi)壁有油垢：洗滌液中浸泡數(shù)小時，再沖洗(三)學習各種器皿的包扎：牛皮紙或舊報紙包緊，一般以5～8套培養(yǎng)皿包成1包 ：， cm長的棉花（勿用脫脂棉），目的是避免將外界或嘴中雜菌吹入管內(nèi)，或不慎將菌液吸出管外。用4～5 ：用橡皮塞和牛皮紙。(四)干熱滅菌 1．裝入待滅菌物品將包好的待滅菌物品（培養(yǎng)皿、吸管等）放入電烘箱內(nèi)，關好箱門。物品不要擺太擠，以免妨礙空氣流通；不要接觸電烘箱內(nèi)壁的鐵板，以防包裝紙烤焦起火。2．升溫 接通電源，撥動開關，打開電烘箱排氣孔，讓溫度逐漸上升。當溫度升至100℃時，關閉排氣孔。3．恒溫 當溫度升達到160～170℃時，恒溫調(diào)節(jié)器會自動控制調(diào)節(jié)溫度，保持此溫度2h。干熱火菌過程。嚴防恒溫調(diào)節(jié)的自動控制失靈而造成安全事故。4．降溫 切斷電源、自然降溫。5．開箱取物 待電烘箱內(nèi)溫度降到70℃以下后，打開箱門，取出滅菌物品。[指導與訓練方案]？ 。[實驗項目]實驗二 培養(yǎng)基的制備與滅菌 [教學時數(shù)]4學時[實驗目的與要求]1．了解培養(yǎng)基的配制原理；掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。2．了解常見滅菌、清毒基本原理及方法；掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過濾除菌的操作方法。[實驗原理]培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無機鹽、生長因素和水。根據(jù)微生物的種類和實驗目的不同，培養(yǎng)基也有不同的種類和配制 方法。從培養(yǎng)基的組成成分可分為: ：由各種純化學物質(zhì)按一定比例配制而成。：一部分純化學物質(zhì)和一部分天然物質(zhì)配制而成。：利用天然來源的有機物配制而成。從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為: ：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。：在液體培養(yǎng)基中加入2%左右的凝固劑的固體狀態(tài)的培養(yǎng)基或農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。：—%凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養(yǎng)基。察氏一號培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普通的霉菌培養(yǎng)基。高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達到殺死微生物的效果。，鍋內(nèi)溫度可達到121℃，一般維持20min,即可殺死一切微生物的營養(yǎng)體或芽孢，而達到滅菌目的。[實驗材料與設備] 試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培養(yǎng)基、分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、棉花、牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布、吸管、培養(yǎng)皿、電烘箱、注射器、微孔濾膜過濾器、鑷子等。 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂 [實驗步驟] →溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查 ：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查 ：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌 。，注意溫度的時間控制，70186。C以下放物、取物。，加熱后排除冷空氣，到時降壓回零取物。，壓濾時，壓力要適當，不可太猛太快，濾膜要注意清洗保存。[指導與訓練方案]，為什么必須立即滅菌?如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的? ?為什么? ?為什么? ? [實驗項目]實驗三 環(huán)境和人體微生物的檢測及無菌操作技術(shù)[教學時數(shù)]3學時 [實驗目的與要求]，體會微生物分布的廣泛性。，掌握利用稀釋涂布平板法從土壤中分離微生物的方法。[實驗原理] 自然環(huán)境中和人及動物的體表、體內(nèi)都存在大量的微生物，它們一遇到適合的條件就會大量繁殖。當把取自不同來源的含菌樣品接種于含有生長發(fā)育需要的各種營養(yǎng)成分的固體培養(yǎng)基時，就會形成肉眼可見的微生物集體群落菌落。每種微生物菌落都有其獨有的特點，如大小、顏色、表面干燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑、邊緣整齊或不整齊等。因此，可以通過平板培養(yǎng)來檢測不同環(huán)境下微生物的數(shù)量、種類和特點。[實驗材料與設備] 、磁力攪拌器、移液槍：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、察氏一號培養(yǎng)基；地面以下510cm的土壤； 、無菌棉棒、無菌生理鹽水、涂布棒、記號筆、培養(yǎng)皿、吸管、試管、三角瓶 [實驗步驟] 在酒精燈火焰旁操作，將融化并冷卻至不燙手的滅菌固體培養(yǎng)基倒入無菌的培養(yǎng)皿，倒量為容積的1/3~1/2或者覆蓋皿底5毫米左右，然后平放到桌面待其凝固即為無菌平板。制備土樣懸濁液：稱取土樣1g，迅速倒入盛有99ml無菌水和玻璃球的三角瓶中，置入磁力棒，攪拌1015min，使土樣充分打散，即成102的土壤懸濁液。稀釋：，如此重復，可依次制成103～106的稀釋液。(注意：操作時每一個稀釋度換用一支移液管，每次吸入土液后，要將移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于前一次，以減少稀釋中的誤差。) 、培養(yǎng)標記： AⅠ1105姓名按培養(yǎng)基類別：細菌培養(yǎng)基A，霉菌培養(yǎng)基B 按3個大組：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、按4個中組：14 按樣品類別：1010口腔a、鼻腔b、頭發(fā)c、空氣d按個人標記：姓名培養(yǎng)：將接種的平板分別放入細菌和霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。霉菌保持2527℃，35天；細菌3537℃，12天。[指導與訓練方案]無菌倒平板時注意的事項有哪些？平板接種后為什么要倒置培養(yǎng)？通過本次試驗你學到了什么？有什么體會？ [實驗項目]實驗六 細菌的單染色與革蘭氏染色 [教學時數(shù)] 3學時[實驗目的與要求]、染色和無菌操作技術(shù)。、學習并掌握單染色和革蘭氏染色技術(shù)。[實驗原理] 細菌的細胞小而透明，在普通的光學顯微鏡下不易識