【文章內(nèi)容簡介】 程度或等級； 。第三節(jié) 局部毒性作用第四十二 頁 ，共八十八 頁 。一、眼睛刺激試驗(yàn) 眼刺激性〔 eye irritation〕指眼球外表接觸受試物后所產(chǎn)生的可逆性炎性變化。 眼腐蝕性〔 eye corrosion〕指眼球外表接觸受試物后引起的不可逆性組織損傷 。 試驗(yàn)方法： Draize 法〔 1944年〕 常用動(dòng)物：白兔第四十三 頁 ，共八十八 頁 。Draize法：〔自身對照原那么〕試驗(yàn)方法：一般采用 4只白兔，受試物以一次劑量滴入每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)〔 〕，以生理鹽水處理另一側(cè)眼作為自身對照。在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)觀察對兔眼的刺激和腐蝕作用程度，并按規(guī)定的分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分。觀察指標(biāo)：結(jié)膜 (發(fā)紅、球結(jié)膜水腫和分泌物 )，角膜 (混濁程度和范圍 )，虹膜 (充血、腫脹和角膜周圍充血 )。實(shí)驗(yàn)期限：一般為 7天，必要時(shí)延長至 21天 (觀察期能足已評價(jià)刺激是否存在可逆性 )。本卷須知：如 72h眼刺激反響仍不消退時(shí)，需另取 4只白兔觀察洗眼效果，即滴入受試物后分別在 4s和 30s時(shí)，用生理鹽水洗眼 5min，觀察洗眼后的眼睛反響?！蚕囱坌Ч囼?yàn)〕第四十四 頁 ，共八十八 頁 。第四十五 頁 ，共八十八 頁 。Draize 法眼損傷程度評分表：第四十六 頁 ，共八十八 頁 ?！怖m(xù)表〕〔續(xù)表〕第四十七 頁 ，共八十八 頁 。第四十八 頁 ，共八十八 頁 。第四十九 頁 ，共八十八 頁 。眼睛刺沖動(dòng)物試驗(yàn)替代法：眼睛刺沖動(dòng)物試驗(yàn)替代法： 利用尿囊絨膜與結(jié)膜結(jié)構(gòu)相似性。利用尿囊絨膜與結(jié)膜結(jié)構(gòu)相似性。 用分光光度計(jì)法測定溶血程度〔用分光光度計(jì)法測定溶血程度〔 Hb從從 RBC漏出〕。漏出〕。 〔用酶標(biāo)儀測定〕血紅蛋白變性試驗(yàn)〔用酶標(biāo)儀測定〕 因角膜透明度降低是化學(xué)物破壞了蛋白質(zhì)構(gòu)象。因角膜透明度降低是化學(xué)物破壞了蛋白質(zhì)構(gòu)象。 兔眼角膜上皮細(xì)胞兔眼角膜上皮細(xì)胞 SIRC模型，觀察細(xì)胞增殖、膜完整性等〔模型，觀察細(xì)胞增殖、膜完整性等〔中性紅不能沉積在死細(xì)胞內(nèi)，用酶標(biāo)儀測定〕中性紅不能沉積在死細(xì)胞內(nèi)，用酶標(biāo)儀測定〕 受試物受試物 +立體人類皮膚立體人類皮膚 +MTT，用酶標(biāo)儀測定提取液中的，用酶標(biāo)儀測定提取液中的 MTT吸吸光度〔光度〔 MTT不能沉積在死細(xì)胞內(nèi)〕不能沉積在死細(xì)胞內(nèi)〕第五十 頁 ，共八十八 頁 。二、皮膚刺激試驗(yàn) 皮膚刺激性〔 dermal irritation〕指皮膚接觸或涂敷受試物后，局部產(chǎn)生的可逆性炎性變化。 皮膚腐蝕性 (dermal corrosion〕指皮膚接觸或涂敷受試物后，引起局部的不可逆性組織損傷 。 皮膚刺激試驗(yàn)類型： ① 單次和屢次皮膚刺激試驗(yàn)； ② 完整皮膚和破損皮膚刺激試驗(yàn)等。 試驗(yàn)方法： Draize 法〔 1944年〕 常用動(dòng)物：家兔或豚鼠 第五十一 頁 ，共八十八 頁 。 破損皮膚刺激試驗(yàn) 是人為將動(dòng)物皮膚某部位擦傷〔不能傷及真皮和產(chǎn)生出血〕，以比較受試物對完整皮膚及受損皮膚造成的刺激反響的差異。 傷口消毒藥物一般都需要做破損皮膚刺激試驗(yàn)。第五十二 頁 ，共八十八 頁 。皮膚刺激試驗(yàn)〔 Draize 法〕： 〔自身對照原那么〕 試驗(yàn)方法： 將受試物一次或?qū)掖瓮糠笥谑茉噭?dòng)物背部一側(cè)皮膚上 ()，涂敷持續(xù)時(shí)間一般為 4h，以生理鹽水處理另一側(cè)背部皮膚作自身對照。 觀察指標(biāo)： 皮膚反響常為紅斑或紫紅色斑、水腫等，損傷嚴(yán)重時(shí)可形成焦痂，一般按紅斑和水腫的嚴(yán)重程度評分，并與自身對照比較，從而評價(jià)受試物對皮膚的刺激作用。 實(shí)驗(yàn)觀察期：一般為 14天。第五十三 頁 ，共八十八 頁 。皮膚刺激試驗(yàn)結(jié)果的影響因素：皮膚刺激試驗(yàn)結(jié)果的影響因素： 〔皮膚受損程度〕；皮膚的完整性〔皮膚受損程度〕； ；固態(tài)受試物的物理狀態(tài)與溶解度； ；受試動(dòng)物年齡與性別； 〔存在判斷差異〕等。實(shí)驗(yàn)人員主觀因素〔存在判斷差異〕等。無需做皮膚刺激試驗(yàn)條件：無需做皮膚刺激試驗(yàn)條件： ① 受試物為強(qiáng)酸或強(qiáng)堿類腐蝕性物質(zhì)〔受試物為強(qiáng)酸或強(qiáng)堿類腐蝕性物質(zhì)〔 pH≤2 或或 ≥ 〕〕 ② 受試物有很強(qiáng)的經(jīng)皮吸收毒性，經(jīng)皮受試物有很強(qiáng)的經(jīng)皮吸收毒性，經(jīng)皮 LD50小于小于 200 mg/kg體重；體重； ③ 急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)中，受試物劑量達(dá)急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)中，受試物劑量達(dá) 2024mg/kg體重仍未體重仍未出現(xiàn)皮膚刺激性作用。出現(xiàn)皮膚刺激性作用。 第五十四 頁 ，共八十八 頁 。皮膚刺激皮膚刺激 /腐蝕的體外替代法：腐蝕的體外替代法： 單層細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)單層細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 〔如：皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞、皮膚黑色素細(xì)胞、皮膚成纖維〔如：皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞、皮膚黑色素細(xì)胞、皮膚成纖維細(xì)胞等〕細(xì)胞等〕 EpidermTM重組人表皮模型〔美國〕重組人表皮模型〔美國〕 即體外構(gòu)建的含表皮和真皮雙層結(jié)構(gòu)即體外構(gòu)建的含表皮和真皮雙層結(jié)構(gòu)第五十五 頁 ，共八十八 頁 。Draize法皮膚損傷程度評分表：第五十六 頁 ，共八十八 頁 。第五十七 頁 ，共八十八 頁 。第五十八 頁 ，共八十八 頁 。三、皮膚變態(tài)反響試驗(yàn) 皮膚變態(tài)反響〔 skin sensitization〕 是皮膚對化學(xué)物產(chǎn)生的免疫源性皮膚反響，又稱過敏性接觸性皮炎或皮膚致敏反響。 在人身上有瘙癢、紅斑、丘疹、水皰、融合水皰等，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物身上，通常只能見到皮膚紅斑和水腫等反響。 試驗(yàn)?zāi)康模捍_定重復(fù)接觸化學(xué)物是否可引起變態(tài)反響及其反響程度。 受試動(dòng)物：豚鼠，每組動(dòng)物 10~20只。 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：需做陽性對照和陰性對照，陰性對照動(dòng)物僅給予受試物激發(fā)接觸。〔陽性物 2,4二硝基氯苯〕 第五十九 頁 ，共八十八 頁 。 致敏機(jī)制： 化學(xué)物在穿透皮膚的過程中，可作為半抗原與體內(nèi)某些特定的載體蛋白共價(jià)結(jié)合，形成完全抗原，誘導(dǎo)抗體形成，產(chǎn)生免疫記憶，如再次接觸較低濃度的相同或結(jié)構(gòu)相似的化學(xué)物，即能引發(fā)皮膚變態(tài)反響。 試驗(yàn)方法： ① 局部封閉涂皮法〔 Buehler Test〕〔傳統(tǒng)方法〕 ② 豚鼠最大值試驗(yàn)〔 guinea pig maximization test〕 用完全福氏佐劑，皮內(nèi)注射。 ③ 局部淋巴結(jié)試驗(yàn)〔 local lymph node assay， LLNA〕 實(shí)驗(yàn)記錄： 記錄皮膚具有紅斑和水腫〔過敏反響〕的動(dòng)物數(shù)。第六十 頁 ，共八十八 頁 。局部封閉涂皮法〔二步法〕局部封閉涂皮法〔二步法〕 致敏接觸：致敏接觸： 實(shí)驗(yàn)前將受試動(dòng)物背部左側(cè)皮膚去毛區(qū)實(shí)驗(yàn)前將受試動(dòng)物背部左側(cè)皮膚去毛區(qū) 3cm3cm ，將受試，將受試物物 ~ 2cm2cm 濾紙上，將其敷貼在去毛區(qū)，用兩層濾紙上，將其敷貼在去毛區(qū)，用兩層紗布，一層油紙或不透水塑料膜覆蓋，再以無刺激膠布固定，紗布，一層油紙或不透水塑料膜覆蓋，再以無刺激膠布固定，持續(xù)持續(xù) 6h， 6h后去除敷貼及受試物。第后去除敷貼及受試物。第 7天和第天和第 14天以同樣方法重天以同樣方法重復(fù)一次。復(fù)一次。 激發(fā)接觸：激發(fā)接觸： 實(shí)驗(yàn)前將受試動(dòng)物背部右側(cè)皮膚去毛區(qū)實(shí)驗(yàn)前將受試動(dòng)物背部右側(cè)皮膚去毛區(qū) 2cm2cm 。末次致。末次致敏后敏后 14~28天，將天，將 ~側(cè)去毛區(qū)，覆蓋方法同前，持續(xù)側(cè)去毛區(qū)，覆蓋方法同前，持續(xù) 6h，去掉斑貼及受試物后，每，去掉斑貼及受試物后，每日觀察至第日觀察至第 12天。天。第六十一 頁 ，共八十八 頁 。第六十二 頁 ，共八十八 頁 。第六十三 頁 ，共八十八 頁 。一、概述 重復(fù)屢次接觸化學(xué)物的毒性研究。 根據(jù)持續(xù)時(shí)間分類〔按 OECD〕： 短期毒性作用〔亞急性〕 〔染毒期一般為 28天〕 亞慢性毒性作用 〔嚙齒類動(dòng)物一般為 90天，犬為 1年〕 慢性毒性作用 〔嚙齒類動(dòng)物一般為 1年，或終身染