【文章內容簡介】 ......................... 36 結論與討論 ............................................................................................. 39 第五章 菌株 LM2303 抑菌作用研究 ................................................................. 41 材料 ......................................................................................................... 41 微生物菌株 ................................................................................... 41 試劑 ............................................................................................... 41 儀器 ............................................................................................... 42 培養(yǎng)基 ........................................................................................... 42 方法 ......................................................................................................... 43 菌懸液制備 ................................................................................... 43 菌株 LM2303 對有害微生物生長的影響 ................................... 43 抑菌物質粗提物制備 ................................................................... 43 抑菌物質抑菌譜測 定 ................................................................... 44 真菌孢子懸液制備 ....................................................................... 44 抑菌物質對真菌孢子萌發(fā)的影響 ............................................... 44 抑菌物質對真菌菌絲形態(tài)的影響 ............................................... 44 抑菌 物質穩(wěn)定性研究 ................................................................... 45 III 抑菌物質分離純化及定性研究 ................................................... 45 結果與分析 ............................................................................................. 47 菌株 LM2303 對有害微生物的抑制作用 ................................... 47 菌株 LM2303 抑菌物質抑菌譜 ................................................... 48 對真菌菌絲形態(tài)的影響 ............................................................... 49 對真菌孢子萌發(fā)的抑制作用 ....................................................... 50 抑菌物質的穩(wěn)定性研究結果 ....................................................... 51 抑菌物質 分離純化及鑒定 ........................................................... 52 結論與討論 ............................................................................................. 55 第六章 生防菌株在冬棗貯藏中的應用 ............................................................. 56 材料 ......................................................................................................... 56 菌株 ............................................................................................... 56 培養(yǎng)基 ........................................................................................... 56 試劑 ............................................................................................... 57 儀器 ............................................................................................... 57 方法 ......................................................................................................... 57 冬棗貯藏期致腐真菌的分離 ....................................................... 57 回接驗證試驗 ............................................................................... 58 冬棗致腐真菌的種屬鑒定 ........................................................... 58 冬棗致腐真菌 拮抗菌株的篩選 ................................................... 58 結果與分析 ............................................................................................. 58 冬棗致腐真菌的分離鑒定 ........................................................... 58 冬棗致腐真菌拮抗菌株的篩選結果 ........................................... 60 結論與討 論 ............................................................................................. 61 第七章 結 論 ..................................................................................................... 62 參考文獻 ............................................................................................................... 63 致 謝 ................................................................................................................... 70 作者簡介 ............................................................................................................... 71 IV 廣譜高效微生物防腐劑產生菌的篩選及應用 1 第一章 前言 研究背景 在食品工業(yè)中，糧食、果蔬及加工類食品的防腐保鮮始終是一個亟待解決的重要問題，據 FDA 統計，全世界每年約有 10% ~ 20% 的食物損失于各種腐敗，其中微生物侵染是導致食物腐敗變質的主要因素。各類食物的腐敗變質不僅會導致其喪失營養(yǎng)和食用價值，造成巨大的經濟損失，而且由于許多微生物在生長繁殖過程中產生的有毒次級代謝產物，還會引起食品安全問題，嚴重危害人類健康(石立三等 , 20xx)。據 WHO 統計，全世界每年數以億計的食源性 疾病患者中， 70%是由病原微生物污染的食物引起的。因此，防止微生物侵染是食品工業(yè)面臨重大問題，也是保證食品安全的首要任務。 目前，用于各類食品防腐保鮮的方法主要有物理和化學的方法。 (1)物理方法：主要是采用熱處理、氣調、輻照及低溫貯藏等方法來防止食品腐敗變質，其中熱處理和紫外線輻照處理的方法在葡萄、梨、蘋果、西紅柿等多種果蔬的防腐保鮮應用中取得較好效果 (趙明慧等 , 20xx)。但低溫貯藏、輻照處理等物理方法均需要特定的專業(yè)設備，難以大面積的普及推廣應用 (呂勞富和何勇 , 20xx)。 (2)化學方法：主要是運用化學合成藥劑來控制病原微生物的侵染，化學方法具有效價高、效果穩(wěn)定、作用機理明確等顯著優(yōu)點，但長期的研究表明，化學合成藥劑對人體不同程度存在一定的毒性，其中一些具有誘癌性和致畸性，在超標使用的情況下甚至會引起食物中毒，而且化學合成藥劑長期大量使用會導致病原微生物產生抗性和造成環(huán)境污染 (劉鐘棟 , 20xx)。 由于物理和化學方法在實際生產應用中存在一定局限性，迫切需要尋求更安全有效的防腐保鮮新技術。近年來越來越多的人把目光投向天然防腐劑的開發(fā)利用，天然來源的防腐劑分為動植物源和微生物源防腐劑 ，相對于動植物來源的防腐劑，微生物因為具有生長繁殖快、生長條件簡單、易于培養(yǎng)等特點而成為天然防腐劑的重要來源。利用微生物菌株及其代謝產物進行生物防治的研究開發(fā)已引起國內外學者的廣泛關注， 它主要是利用微生物及其代謝產物來抑制病原微生物的生長繁殖從而達到防腐保鮮的目的， 生物防治方法是現階段各類食品防腐保鮮研究的熱點 (賈士儒 , 20xx)。目前，世界上公認的、采用微生物發(fā)酵法生產并已經投入使用的安全生物防腐劑有：乳酸鏈球菌素 (Nisin)、納他霉素 (Natamycin)和 ε聚賴氨酸 (εpolylysine)。 河南工業(yè)大學碩士學位論文 2 生防微生物概況 用于生物防治的微生物種類 利用微生物進行各類食品的防腐保鮮就是選取不會對食品造成危害的微生物來抑制病原微生物的生長繁殖，從而達到防止食品腐敗變質或降低食品腐敗變 質程度的目的，目前研究較多的生防微生物主要有芽孢桿菌 (Sharma et al, 20xx)、乳酸菌 (Jiang et al, 20xx)、放線菌 (Subramaniam et al, 20xx)、酵母菌 (Droby et al, 20xx)及霉菌 (Ippolito A et al, 20xx)等，如表 11 所示。 表 11 用于生物防治的微生物 微生物種類 微生物菌株 芽孢桿菌 枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)、地衣芽孢桿菌 (Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢桿菌 (Bacillus amyloliquefaciens)、短小芽孢桿菌 (Bacillus pumilus)、蠟樣芽孢桿菌 (Bacillus cereus) 乳酸菌 雙歧桿菌 (Bifidobacterium)、干酪乳桿菌 (Lactobacillus casei)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳桿菌 (Lactobacillus acidophilus)、保加利亞乳桿菌 (Lactobacillus bulgaricus)、乳酸鏈球菌 (Lactic streptococci)、乳酸片球菌 (Pediococcus acidilactici) 放線菌 白色鏈霉菌 (