20xx滬科版高中生命科學(xué)第二冊63基因工程與轉(zhuǎn)基因生物4(編輯修改稿)
2024-12-25 16:45 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ____ PCR技術(shù)擴(kuò)增 化學(xué)方法人工合成 從基因文庫獲取的方法 方法 基因文庫的構(gòu)建 PCR技術(shù)擴(kuò)增 人工合成 基因組文庫 部分基因文庫 （如 cDNA文庫） 優(yōu)點(diǎn) 操作簡單 專一性 可在短時間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因 專一性強(qiáng)，可產(chǎn)生自然界中不存在的新基因 缺點(diǎn) 工作量大、盲目性大、專一性差 操作過程較麻煩、技術(shù)要求過高 需要嚴(yán)格控制溫度，技術(shù)要求高 適用范圍小 提取目的基因的方法與比較 二：基因表達(dá)載體的構(gòu)建 —基因工程的核心 1 目的： 使目的基因在受體細(xì)胞中 穩(wěn)定存在 ，并且可以 遺傳給下一代 ，同時使目的基因能夠 表達(dá)和發(fā)揮 作用。 2 組成： 目的基因 +啟動子 +終止子 +標(biāo)記基因 等 ： 它們有什么作用？ a、目的基因 b、啟動子 c、終止子 d、標(biāo)記基因 位于基因的首端 ,是mRNA結(jié)合位點(diǎn) 位于基因的末端 ,終止轉(zhuǎn)錄 檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞 ① 載體 與 表達(dá)載體 的區(qū)別：均有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分 DNA片段。表達(dá)載體比載體增加了目的基因、啟動子、終止子三部分結(jié)構(gòu)。 注意 ! ② 用到的工具酶： 既用到限制酶切割載體，又用到 DNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵。 ③ 啟動子、終止子 對于目的基因表達(dá)必不可少。 ④ 目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞， 必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。 質(zhì)粒 DNA分子 限制酶處理 兩個切口 四個黏性末端 DNA連接酶 基因表達(dá)載體 （重組 DNA分子或重組質(zhì)粒） 同一種 一個切口 兩個黏性末端 三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 1 轉(zhuǎn)化： （ 1） 概念 ： 目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi) 維持穩(wěn)定和表達(dá) 的過程。 （ 2） 實(shí)質(zhì) ：基因重組。 2 常用的受體細(xì)胞 ： 細(xì)菌： 大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌 ； 酵母菌 （真核生物）：生產(chǎn)糖蛋白（干擾素）時作受體細(xì)胞； 植物細(xì)胞：體細(xì)胞、卵細(xì)胞、受精卵 動 物細(xì)胞 ：常用受精卵（全能性高）。 3 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的原理： 借鑒 細(xì)菌或病毒 侵染 細(xì)胞的途徑。 生物種類 植物細(xì)胞 動物細(xì) 胞 微生物細(xì)胞 常用方法 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉通道法 顯微注射法 Ca2＋ 處理法 受體細(xì)胞 一般為體細(xì)胞 受精卵 一般原核細(xì)胞 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方 法 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞 （ 1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 特點(diǎn) : 能感染 雙子葉植物 和 祼子植物 ,對單子葉植物無感染能力 Ti質(zhì)粒 的 T— DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并整合到其染色體上 轉(zhuǎn)化過程 : Ti質(zhì)粒 目的基因 構(gòu)建 表達(dá)載體 導(dǎo)入 植物細(xì)胞 插入 植物細(xì)胞染色 DNA 表達(dá) 新性狀 轉(zhuǎn)入 農(nóng)桿菌 （受體細(xì)胞：體細(xì)胞） （ 2）基因槍法 基因槍法又稱微彈轟擊法，是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動力，將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體 DNA打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法。 單子葉 植物中較常用 適用于 單子葉植物 （ 3）花粉通道法 植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要穿過花柱直通胚囊?；ǚ酃芡ǖ婪ň褪窃谥参锸芊酆?，花粉形成的花粉管還未愈合前，剪去柱頭，然后，滴加 DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞。 將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞 方法 : 顯微注射技術(shù) 操作程序 : 提純含目的基因表達(dá)載體 取受精卵 顯微注射 移植到子宮 受精卵發(fā)育 新性狀動物 常用受體細(xì)胞： 受精卵 3 將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞 ① 微生物作受體細(xì)胞原因 ： 繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對少 ②常用菌：大腸桿菌 ③常用法： Ca2+處理 （獲得感受態(tài)細(xì)胞） （增大細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性） ④過程： Ca2+處理 大腸桿菌 感受態(tài) 細(xì)胞 感受態(tài)細(xì)胞 吸收 DNA 表
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