免疫原與抗血清制備技術(shù)(編輯修改稿)
2025-03-11 13:38 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 。14WO 34MoO 310H20絡(luò)合物的雙縮脲法蛋白質(zhì)＋ Ca2+堿性加深藍色已知分子量的標準品? 測未知分子量： 將樣品在同一凝膠柱上，同一條 件下層析、洗脫、測保留體積，并查出分子量。? 此法簡便、樣品用量少，有一定的實用價值。凝膠柱保留體積分子量的對數(shù) 2.理化性質(zhì)鑒定繪制標準曲線① 凝膠層析技術(shù)進行測定垂直電泳聚合成大分子凝膠 ② 聚丙烯酰胺凝膠電泳（ PAGE）? 有分子篩效應(yīng)、電荷效應(yīng)及濃縮效應(yīng)，能精 確地分離和鑒定高分子物質(zhì)。? PAG的分子篩效應(yīng)測定蛋白質(zhì)抗原的分子量。? 原理： 雙丙烯酰胺N,Nmethylene bisacrylamide,Bis 丙烯酰胺(acrylamide,Acr) 催化劑 3. 純度鑒定? 方法： 醋酸纖維膜電泳進行鑒定。返回? 原理： 蛋白質(zhì)在一定 pH下都帶有電荷，由于 各種蛋白質(zhì)等電點不同、分子量也異，因此 所帶電量也各不相同，在外加直流電場的作 用下，它們泳動的速度不同，經(jīng)一段時間后 即可彼此分開，形成電泳譜；從而判斷蛋白 質(zhì)抗原的純度。? 特點： 快速簡便。 三、半抗原免疫原的制備： 低分子量的化學物質(zhì)。例如多糖、 多肽、甾族激素、脂肪胺、類脂質(zhì)、核苷、 某些藥物 (包括抗生素）及其他化學物品等。： 蛋白質(zhì)類 多肽聚合物 大分子聚合物 載體連接方法 : 載體類型 ： 人血清白蛋白、 牛血清白蛋白 、兔 血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白等。： 人工合成的，常見的有多聚賴 氨酸，其分子量大（可達十幾萬到幾十萬 )， 這種多聚物和半抗原結(jié)合后，可刺激免疫動 物產(chǎn)生高效價、高親和力的抗體。： 羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮 等，可與半抗原結(jié)合，加入弗氏完全佐劑亦 可誘發(fā)動物產(chǎn)生抗體。 半抗原 載體連接方法 1碳化二亞胺法：RNH=CHR’半抗原＋載體蛋白質(zhì) 攪拌 1～ 2h室溫 24h透吸除去未反應(yīng)的半抗原人工免疫原混合混合 半抗原 載體連接方法 2戊二醛法 :半抗原 NH2載體蛋白 NH2半抗原 N=CH(CH2)3CH=NH載體蛋白OHC(CH2)3CHO*戊二醛是常用的帶有兩個活性基團的雙 功能聯(lián)接劑 半抗原 載體連接方法 3氯甲酸異丁脂法：半抗原 COOH載體蛋白 NH2ClCOOCH2CH(CH3)2半抗原 COOCOOCH2CH(CH3)2半抗原 CONH載體蛋白簡便，用于類固醇抗原制備HOCH2CH(CH3)2＋ 半抗原 載體連接方法 4琥珀酸酐法： 用于不含羧基衍生物半抗原制備半抗原 CH2OH CH2CO CH2CO 帶羧基的半抗原琥珀酸衍生物半抗原 CH2OOCCH2CH2COOH返回吡啶再經(jīng)氯甲酸異丁脂法或碳化二亞胺法制備載體半抗原 四、佐劑* 概念： 與抗原同時或預(yù)先注射于機體，能增 加機體免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型的物質(zhì)。 條件： ① 增加抗原的表面積； ② 改變抗原的活性基團構(gòu)型； ③ 佐劑與抗原混合能延長抗原在局部 組織的存留時間； ④ 可直接或間接激活免疫活性細胞； ⑤ 無毒性或無副作用。 （二）常用佐劑的種類和制備：5%硫酸鋁 5%氫氧化鈉 氫氧化鋁沉淀制成懸液即為佐劑強烈攪拌 NS洗二次NS等體積抗原免疫接種 10%硫酸鉀鋁氫氧化鈉校正 pH值至 沉淀 乳狀懸液* 明礬佐劑抗原常用用于肌肉注射，皮下注射 易引起肉芽種和膿腫。
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