植物生理實驗課件-西昌學(xué)院基礎(chǔ)生物實驗教學(xué)中心-首頁(編輯修改稿)
2025-03-10 12:32 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 化錳 +二氯酚 +IAA+磷酸緩沖液 4 、反應(yīng)液 2ml+4ml吲哚乙酸試劑 → 30℃ 暗處保溫 30min → 顯色 5 、將反應(yīng)液于 530nm處測定光密度值 6 、 根據(jù)讀數(shù)查出相應(yīng)的吲哚乙酸殘留量 7 、配制從 035μ g/ml的 IAA濃度，分別測定 OD 值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 計算酶活力 U=(C2－ C1) 10/1/V’ V t/60 簡化成： U=(C2－ C1) 200 思考題 試比較幼苗的胚軸和胚根中吲哚乙酸氧化酶活 性大小。 試比較幼根的根尖和延伸區(qū)中吲哚乙酸氧化酶 活性大小。 實驗 11 植物組織中總氮、蛋白質(zhì)氮含量的測定（微量凱氏法） 【實驗原理】 ?植物組織中的有機氮化物包括蛋白氮和非蛋白氮。非蛋白氮主要是氨基酸和酰胺，以及少量無機氮化物，是可溶于三氯乙酸溶液的小分子。 ?將植物材料與濃硫酸共熱，硫酸分解為二氧化硫、水和原子態(tài)氧，并將有機物氧化分解成二氧化碳和水；而其中的氮轉(zhuǎn)變成氨，并進一步生成硫酸銨。為了加速有機物質(zhì)的分解，在消化時通常加入多種催化劑，如硫酸銅、硫酸鉀和硒粉等。消化完成后，加入過量 NaOH， 將 NH4+轉(zhuǎn)變成NH3， 通過蒸餾把 NH3導(dǎo)入過量的硼酸溶液中，再用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定，直到硼酸溶液恢復(fù)原來的氫離子濃度。滴定消耗的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸摩爾數(shù)即為 NH3的摩爾數(shù)，通過計算，可得出含氮量。 ?蛋白質(zhì)是一類復(fù)雜的含氮化合物，每種蛋白質(zhì)都有其恒定的含氮量，（約在 14％～ 18％，平均約含氮 16％）所以，可用蛋白氮的量乘以 （ 100／ 16＝ ），算出蛋白質(zhì)的含量。 【材料、儀器設(shè)備及試劑】 ?材料：各種干燥、過篩（ 60～ 80目）的植物樣品 ?儀器設(shè)備： 1. 消化管； 2. 微量凱氏定氮蒸餾裝置一套（圖 17）； 3. 三角燒瓶； ； 5. 量筒； 6. 容量瓶； 7. 燒杯； 8. 移液管等。 【實驗步驟】 ?樣品提取分離： ?樣品的消化： ?蒸餾及滴定： ?結(jié)果計算： 樣品中總氮量（％）＝ (V3V0) 100 14/(W 1000 10) 100 氮的回收率 樣品中蛋白氮含量（％）＝ (V1－ V2－V0) 100 14/(W 5 1000) 100 氮的回收率 回收率（％）＝ (V－ V0) 14/( 100) 100 【思考題】 ?植物的蛋白氮和非蛋白氮的分離原理是什么？ ?系數(shù) ？ ?開氏定氮器的原理是很么，如何操作？ 實驗 12 種子活力的快速測定 Ⅰ 氯化三苯基四氮唑法 (TTC法 ) 實驗原理 凡有生命活力的種子胚問呼吸作用過程中都有氧化還原反應(yīng)，而無生命活力的種胚則無此反應(yīng)。當(dāng) TTC滲入種胚的活細(xì)胞內(nèi)，并作為氫受體被脫氫輔酶上的氫還原時，便由無色 TTC變?yōu)榧t色的三苯基甲Ｘ（ TTＦ） 儀器與用品 １、實驗儀器 恒溫箱，燒杯，培養(yǎng)皿，鑷子，刀片、天平２、實驗試劑 %TTC溶液３、實驗材料 種子 方法與步驟 浸種 將待測種子于 3035℃ 溫水中浸種，以增強種胚的呼吸強度，使顯色迅速。 顯色 取吸脹種子 200粒，縱切為兩半，將其中一半置于 2只培養(yǎng)皿中（每皿 100粒），另一半沸水煮 5min殺死胚，加入適量的 TTC， 30 ℃ 保溫 1h。 觀察結(jié)果，計算活種子的百分率。 Ⅱ 溴麝香草酚藍(lán)法（ BTB法） 實驗原理 凡活細(xì)胞必有呼吸作用，吸收空氣中 O2，放出 CO2。 CO2溶于水成為 H2 CO2 ， 解離成 H+和HCO， 使得種胚周圍環(huán)境的酸度增加，可用溴麝香草酚藍(lán)法來測定酸度的改變。 BTB的變色范圍為 ， 酸性呈黃色，堿性呈藍(lán)色，中間經(jīng)過綠色。色澤差異顯著，易于觀察。 儀器與用品 實驗儀器 恒溫箱，天平，培養(yǎng)皿，燒杯， 鑷子，漏斗，濾紙，瓊脂 實驗試劑 %BTB溶液， 1%BTB瓊脂凝膠 實驗材料 種子 方法與步驟 浸種 同 TTC法 顯色 取吸脹種子 200粒，埋于備好的瓊脂凝 膠培養(yǎng)皿中（間隔至少 1cm）。 置于 3035℃ 下培養(yǎng) 24h， 觀察種胚周圍的顏色。用沸水 殺死的種子作對照。 算活種子的百分率。 Ⅲ 紅墨水染色法 實驗原理 凡生活細(xì)胞的原生質(zhì)膜具有選擇性吸收物質(zhì)的能力，而死的種胚細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失這種能力，于是染料便能進入死細(xì)胞而染色。 儀器與用品 實驗儀器 恒溫箱，燒杯，培養(yǎng)皿，漏斗，鑷子 實驗試劑 5%紅墨水 實驗材料 種子 方法與步驟 浸種 同上述 TTC法 染色 吸脹種子 200粒 → 縱切為二 → 一半加 5%紅墨水，染色 1015min→ 倒去紅墨水 → 用水沖洗 → 檢查種子死活。 用沸水殺死的種子作對照。 計算活種子的百分率。 思考題 試驗結(jié)果與實際情況是否相符？為什么？ 就你所知還有哪些快速方法可以測定種子 的生活力？ 試比較 TTC法、 BTB法、紅墨水，測定的結(jié) 果是否相同，為什么？ 實驗 13 高溫和低溫對植物的傷害 【實驗原理】 植物在遭遇不良環(huán)境（如高溫、低溫等）時，原生質(zhì)的結(jié)構(gòu)常受到影響，原生質(zhì)膜的選擇透性喪失，對物質(zhì)的透性發(fā)生變化，鹽類或有機物從細(xì)胞中滲出，進入周圍環(huán)境中。通過電導(dǎo)度的測量和糖的顯色反應(yīng)，可以測知物質(zhì)的外滲，表明植物的受害情況。 【儀器與用品】 電導(dǎo)儀，電冰箱，溫箱臺，水浴鍋，燒杯，量筒，移液管，試管，鑷子 蒽酮試劑 玉米或小麥幼苗 【方法與步驟】 23cm時，取出幼苗，盡量不要傷害根系，用鑷子除去幼苗上殘留的胚乳，用蒸餾水漂洗數(shù)次，以除去傷口上的物質(zhì)。然后以 10株為一組，
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