植物生理實驗課件-西昌學(xué)院基礎(chǔ)生物實驗教學(xué)中心-首頁(文件)
【正文】 膜喪失這種能力，于是染料便能進入死細(xì)胞而染色。 思考題 試驗結(jié)果與實際情況是否相符？為什么？ 就你所知還有哪些快速方法可以測定種子 的生活力？ 試比較 TTC法、 BTB法、紅墨水，測定的結(jié) 果是否相同，為什么？ 實驗 13 高溫和低溫對植物的傷害 【實驗原理】 植物在遭遇不良環(huán)境（如高溫、低溫等）時，原生質(zhì)的結(jié)構(gòu)常受到影響，原生質(zhì)膜的選擇透性喪失，對物質(zhì)的透性發(fā)生變化，鹽類或有機物從細(xì)胞中滲出，進入周圍環(huán)境中。 1h、 2h、 3h后，分別測定每一處理中溶液的電導(dǎo)度。 【 思考題】 ，試比較水稻和小麥幼苗在低溫和高溫中受害的程度。本實驗分析 ABA含量的方法為酶聯(lián)免疫法（ ELISA） ,該方法是被分析物先與相應(yīng)的抗原或抗體反應(yīng)，然后檢測抗原或抗體上酶標(biāo)記物的活性并進行定性定量測定。本實驗使用前者。 試劑：磷酸緩沖液（稱 8g KH2PO4, Na2HPO4,1000ml,） ,樣品稀釋液（ 100 ml磷酸緩沖液 加 Tween20） ,洗滌緩沖液（ 1000ml蒸餾水中溶解 20g NaCl, 再加 1ml Tween20）， ABA 標(biāo)準(zhǔn)溶液（用 ABA甲酯母液配成參比系列溶液，濃度單位為 ng/L）， 鄰苯二胺基質(zhì)液（稱 5g 鄰苯二胺 ,溶于 mol/L pH 磷酸緩沖液，使用前加入 30% H2O2）。 5000g離心 10min,殘渣加 甲醇液，再離心 1次，合并上清液，記錄體積，殘渣棄去。 棄去孔內(nèi)溶液，用磷酸緩沖液洗滌酶標(biāo)板 3次，甩干。 暗中，各孔加入 100ul鄰苯二胺基質(zhì)液，濕盒在 37℃顯色 15min， 加入 50ul硫酸中止反應(yīng)。 1將樣品孔得 OD值代入公式，換算出 ABA甲酯摩爾數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)，除以樣品重量，得每克樣品的 ABA量。 培養(yǎng)基為離體培養(yǎng)物提供了細(xì)胞分裂、生長及分化所需要的營養(yǎng)物質(zhì)，培養(yǎng)基成分包括大量元素（如 N, P, K, Ca, Mg）、 微量元素（如 B,Mn, Cu, Zn, Fe）、 有機物、碳源和植物激素等。 5ml ）、 漏斗（ 68cm）、 封口膜、封瓶膜、牛皮筋、細(xì)口瓶 (500ml。 按以下方案設(shè)計附加激素的培養(yǎng)基配方及配制培養(yǎng)基 （激素濃度 mg/L） NAA 6BA） 0 0 MS (1號 ) 1 1/0（ 4號） 2 2/0（ 7號） 1 0/（ 2號） 0/1（ 3號） 1/（ 5號） 1/1（ 6號） 2/（ 8號） 2/1（ 9號） （ 1）取母液 大量元素 微量元素 鐵鹽 有機物 （ 2）稱量蔗糖 (30g/L) (3)稱瓊脂粉 (7g/L) 加蒸餾水 600ml/L 混合 定容 調(diào) pH值 分裝 封瓶口 高壓滅菌 冷卻 凝固 ?[注意事項 ] 不要將培養(yǎng)基倒在瓶口上。 ? [儀器與用品 ] 儀器：超靜工作臺；恒溫培養(yǎng)箱、光照培養(yǎng)箱；或光、暗恒溫培養(yǎng)室；噴霧器；手術(shù)剪刀；槍頭鑷子；解刨刀；衛(wèi)生紙 。 操作者的消毒 更換干凈的工作服，戴工作帽和口罩；用肥皂水清洗雙手，擦干，再用酒精棉球擦拭一遍。期間需要動山腳平數(shù)次；最后用無菌水沖洗 56次，無菌紙吸干備用 切割材料和接種 剪刀、鑷子等金屬器具，在酒精燈火焰上灼燒滅菌，等冷卻后，將材料分割成小段或小塊接種。接種后，瓶口在火焰上旋轉(zhuǎn)一圈，稍停一會用封口瓶膜封口，并用牛皮筋扎緊。 ? [注意事項 ] 接種時，手和衣袖與酒精燈火焰保持適當(dāng)?shù)木嚯x，以免燒傷。 [儀器與用品 ] 光照培養(yǎng)室、超靜工作臺、冰箱、高壓滅菌鍋。 WT,sos1， sos2， sos3 的種子，經(jīng)常規(guī)消毒滅菌后，播種到 MS0平板上。 另一部分小苗轉(zhuǎn)移到土壤中栽培。 記錄觀察結(jié)果并統(tǒng)計數(shù)據(jù)，寫成實驗報告 。小苗從培養(yǎng)皿中取出并在清水中洗凈根部的培養(yǎng)基，每小盆移栽 45顆小苗，小苗基部用手按實，使之與土壤密切接觸。 平板轉(zhuǎn)移到 25℃ 光照培養(yǎng)室培養(yǎng)到 7天，光強 120140 umol/. 將一部分苗轉(zhuǎn)移到含 NaCl梯度濃度的平板上；平板上小苗擺成兩排，上面為對照，下面為突變體。 材料：擬南芥 C型野生型和 sos sos sos3 突變體。 ? [思考題 ] ? 為什么選用兩種消毒劑對材料進行消毒？ ? 接種時要注意哪些環(huán)節(jié)才能保證材料的消毒即徹底又不傷害材料的生活力？ 實驗 17 模式植物擬南芥的栽培與突變體表性分析 [實驗原理 ] 擬南芥是重要的植物生理及分子生物學(xué)的模式植物。 培養(yǎng)、觀察培養(yǎng)物的生長現(xiàn)象。每瓶接種 45個外植體；每皿接種 810個外植體。用吸水紙擦干表面水分。 材料：菊花花蕾、嫩莖、嫩葉。 高壓滅菌的時間是多長？為何不宜過長和過短？ 實驗 16 植物組織培養(yǎng) 2材料的消毒、接種與培養(yǎng)（愈傷組織的誘導(dǎo)與器官的分化） ? [實驗原理 ] 用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段叫 外植體（ explant） ,外植體切口可經(jīng)脫分化誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織，愈傷組織經(jīng)分化可形成根、芽等器官。 蔗糖、硝酸銨、硝酸鉀、磷酸二氫鉀、硫酸銨、硼酸；萘乙酸、6芐基腺嘌呤、 6呋喃甲基腺嘌呤、赤霉素等。 ）、 pH計、 50； 100ml 三角瓶、90cm 培養(yǎng)皿、 1000ml和 500ml 燒杯、量筒（ 50ml。 實驗 15 植物組織培養(yǎng) 1培養(yǎng)基的配制 ? [實驗原理 ] 植物組織培養(yǎng) （ plant tissue culture） 是指在無菌條件下，在人工制備的培養(yǎng)基上培養(yǎng)植物的離體器官、組織、細(xì)胞的技術(shù)。 求出每份樣品孔的平均值。 各孔內(nèi)依次加入標(biāo)準(zhǔn) ABA
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