sds-page測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量ppt-powe(編輯修改稿)
2025-03-06 19:49 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 50%甲醇溶液和 46mL冰乙酸即可。 （ 11）脫色液： 75mL冰乙酸， 875mL重蒸水與 50mL甲醇混勻。 實(shí)驗(yàn)步驟 ? 1． 安裝夾心式垂直板電泳槽：目前，夾心式垂直板電泳槽有很多型號(hào)，雖然設(shè)置略有不同，但主要結(jié)構(gòu)相同，且操作簡(jiǎn)單，不易泄漏。同學(xué)們可根據(jù)具體不同型號(hào)要求進(jìn)行操作。主要注意：安裝前，膠條、玻板、槽子都要潔凈干燥；勿用手接觸灌膠面的玻璃。 ? 2．配膠：根據(jù)所測(cè)蛋白質(zhì)分子量范圍，選擇適宜的分離膠濃度。本實(shí)驗(yàn)采用 SDSPAGE不連續(xù)系統(tǒng)，按下表的配制分離膠和濃縮膠。 試劑名稱(chēng) 配制 20ml不同濃度分離膠所需各種試劑用量 /ml 配制 10ml濃縮膠所需試劑用量 5% % 10% 15% 3% 分離膠貯液 （ 30%%Bis) 分離膠緩沖液 （ ） 濃縮膠貯液 （ 10%%Bis） 濃縮膠緩沖液 （ TrisHCl） 10% SDS 1%TEMED 重蒸餾水 混勻后，置真空干燥器中，抽氣 10min 10%AP ? 3．制備凝膠板： （ 1）分離膠制備：按表配制 20ml 10%分離膠，混勻后用細(xì)長(zhǎng)頭滴管將凝膠液加至長(zhǎng)、短玻璃板間的縫隙內(nèi)，約 8cm高，用 1ml注射器取少許蒸餾水，沿長(zhǎng)玻璃板板壁緩慢注入，約 3— 4mm高，以進(jìn)行水封。約 30min后，凝膠與水封層間出現(xiàn)折射率不同的界線，則表示凝膠完全聚合。傾去水封層的蒸餾水，再用濾紙條吸去多余水分。 （ 2）濃縮膠的
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