【文章內(nèi)容簡介】 ，當固定相 選 定 時 ，流 動 相的種 類 ，配比能 顯 著地影響分離效果，因此流 動 相的 選擇 很重要。 流 動 相 應(yīng) 注意的因素 79/2： 5點 ， 08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 選擇 流 動 相的注意因素：（ 1）流 動 相的 純 度：一般是采用分析 純試劑 ，必要 時 需 進 一步 純 化，以除去干 擾 的 雜質(zhì) 。（ 2） 應(yīng) 避免使用會引起柱效 損 失或保留 值 特性 變化的溶 劑 。（固定相不能吸附溶 劑 或與流 動 相互溶。）（ 3） 對試樣 要有適宜的溶解度，否 則 會在柱 頭 易產(chǎn) 生沉淀。（ 4）溶 劑 的粘度小些 為 好，否 則 會降低 試樣組 分的 擴 散系數(shù)，造成 傳質(zhì) 速率 緩 慢，柱效下降。（ 5） 應(yīng) 柱 檢測 器相匹配　（溶 劑 不能被相 應(yīng) 的 檢測 器 檢測 出來）08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 劑 的 選擇 79/3： a. 依據(jù) ：溶 劑 的極性是重要依據(jù)。 劑 極性 順 序，水最大，煤油最小。 組 合溶 劑 系 統(tǒng) 作 為 流 動 相（底液和洗脫液）（底 劑 決定基本的色 譜 分離情況；洗脫 劑則調(diào)節(jié)試樣組 分的滯留并對 幾個具有 選擇 性的分離作用） 選擇 合適的底液和洗脫液 08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 選用溶劑的依據(jù)：溶劑的極性。? 正相色 譜 ：底 劑 （弱極性）＋洗脫 劑 （極性 較強 ）? 反相色 譜 ：水（主體）＋有機溶 劑調(diào)節(jié)劑 。? 離子交 換 色 譜 ： 組 分保留 值 通 過 流 動 相的離子強 度（ 鹽 的 濃 度）和 pH來控制。增加 鹽 的 濃 度，保留 值 降低；陽離子交 換 柱流 動 相 pH增加，保留 值 增加，陰離子交 換 柱相反。? 排阻色 譜 ：所用的溶 劑 必 須 與凝膠本身非常相似， 這樣 才能 潤 濕凝膠并防止吸附作用。08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 167。36 高效液相色譜儀 high performance liquid chromatograph08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 液相色譜儀（ 2）08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 液相色譜儀（ 3）08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 液相色譜儀（ 4）08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 167。 高效液相色 譜儀一、概述 80/1：高效液相色 譜儀 一般都具 備貯 液器、高 壓泵 、梯度洗提裝置、 進樣 器、色 譜 柱、 檢測 器、恒溫器、記錄儀 等主要部件。 二、 結(jié) 構(gòu)示意 圖 ， fig34.三、部件介 紹 壓泵 （ 壓 力 150 ～ 350105 Pa）要求 ： 穩(wěn) 定； 80/1 力平 穩(wěn) 無脈 動 ； 81/2. 流速要有一定的可 調(diào) 范 圍 .81/4. 動 畫08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 類 型： a .往復(fù)式柱塞 泵 — 是目前廣泛使用的 恒流 泵 . 機理特點 81/2。6: 1)不受整個色 譜 體系中其余部分阻力稍有 變 化的影響， 連續(xù) 供給 恒定體 積 的流 動 相 ； 2）可方便地通 過 改 變 柱塞沖程的大小或往復(fù)的 頻 率來 調(diào)節(jié) 流量； 3）由于死體 積 小（ 約 ），更 換 溶 劑 方便，很適用于梯度洗提 . 不足 ： 1） 輸 出有脈沖波 動 ，會干 擾檢測 器正常工作； 2）由于 產(chǎn) 生基 線 噪聲而影響 檢測 的靈敏度 .08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 動 放大 泵 — 恒 壓泵 原理： p1SA = p2SB 其工作原理 :這 是一種恒 壓泵 。 特點 82/6: 1）能供 給 無脈沖的 穩(wěn) 定流量的 輸 出 . 2）液缸體 積 大，更 換 流動 相不方便； 3）不便于梯度洗提 . 4）適合勻 漿 法填裝色 譜柱。08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 （梯度洗脫、梯度淋洗）裝置 82/ ： 與 GC 中的程序升溫一 樣 .（ P2 23） 義 83/1：所 謂 梯度洗提，就是 載 液中含有兩種以上不同極性的溶 劑 ， 在分離 過 程中按一定的程序 連續(xù) 改 變載 液中溶 劑 的配比和極性，通 過載 液中極性的 變 化來改變 被分離 組 分的分離因素，以 提高分離效果 。 應(yīng) 用梯度洗提 還 可以使分離 時間縮 短，分辨能力增加， 還 可提高最小 檢測 量和定量分析的精度。 外梯度 （低 壓 梯度）：先混合后 輸 入色 譜 柱； 內(nèi)梯度 （高 壓 梯度）：先 泵 入梯度混合室再入色 譜 柱；08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 裝置 83/1： 進樣 方式及 試樣 體 積對 柱效有很大影響 .要 獲 得良好的分離效果和重 現(xiàn) 性，需要將 試樣 “濃縮 ”地瞬 間 注入色 譜 柱入擔體的中心成一個點。 方式 1）注射器 進樣 裝置： 由于不能承受高 壓 ，所以需用停流 進樣 方法，但該 方式無法取得精確的保留 時間 ，峰形的重 現(xiàn)性亦 較 差 .08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 2） 高 壓 定量 進樣閥通 過進樣閥 （通常是六通 閥 ）直接向 壓 力系 統(tǒng) 內(nèi) 進樣 而不必停止流 動 相的一種裝置（ fig37） 準 備 ： 1和 6， 2和 3連 通， 試樣 由 4注入定量管； ： 閥 芯 順時針旋 轉(zhuǎn) 600， 這時 1和 2，3和 4， 5和 6連 通， 試樣 送入柱中 .特點：進樣 準確，重 現(xiàn)性好，適于定量分析 .08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 譜 柱 ： id， mm； L=1530cm； 填料 顆 粒度， 510 181。m； n=500010000 展 趨勢 1）減小填料粒度， 35 181。m； 2）減小柱內(nèi)徑， 1mm； 1）干法，填料粒度大于 20 181。m； 2）濕法（勻 漿 法），粒度小于 20 181。m； (生成勻 漿 ，高 壓 裝柱）08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 器 要求 84/1：具有靈敏度高、重 現(xiàn) 性好、響 應(yīng) 快、 現(xiàn) 性范圍寬 、適用范 圍 廣、 對 流 動 相和溫度波 動 不敏感、死體積 小等特點 . 檢測 器 85/11）原理，被分析 試樣組 分 對 特定波 長 紫外光的 選擇 性吸收， 組 分 濃 度與吸光度關(guān)系遵守比 爾 定律2）光路 圖 ， 圖 38；3） 特點 85/3； 敏度； b. 對 溫度和流速不敏感，可用于梯度洗提 . 缺點 ：不適用于 對 紫外光不吸收的 試樣 .4） 發(fā) 展 851；光 電 二極管 211/1024個 陣 列 檢測 器 .08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 紫外檢測器的重要進展； 光電二極管陣列檢測器： 211/1024個二極管陣列，各檢測特定波長，計算機快速處理，三維立體譜圖，如圖所示。08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 光電二極管陣列檢測器08級儀器分析教程（ 20232023學(xué)年 )Instrumental Analytical 儀器 分析分析 光 檢測 器 86/ 1）原理： 許 多物 質(zhì) ，特 別 是具有 對 稱共 軛結(jié) 構(gòu)的有機芳 環(huán) 分子受紫外光激 發(fā) 后，能 輻 射出比紫外光波 長較長 的 熒 光，某些不 發(fā) 射 熒 光的物 質(zhì) 亦可通 過 化學(xué)衍生 轉(zhuǎn)變 成能 發(fā) 出 熒 光的物 質(zhì) 而得到檢測 。 2）光路 圖 ： 圖 311； 3）特點： 熒 光 檢