15藥物遺傳毒性(編輯修改稿)
2025-02-10 17:35 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 DNA損傷和修復(fù)試驗(yàn) 顯性致死試驗(yàn) 在評(píng)價(jià)突變危害中常用的 有特殊重要意義的試驗(yàn) 二、遺傳毒性實(shí)驗(yàn)的組合 （一）原因 遺傳毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序通常為一組體內(nèi)、外遺傳毒理學(xué)試驗(yàn)。 —— 單一的實(shí)驗(yàn)不能全面的檢測(cè)各種遺傳終點(diǎn)的變化，容易出現(xiàn)假陰性結(jié)果。 ①化學(xué)毒物的致突變機(jī)制不盡相同； ②作用的靶部位不盡相同； ③有直接致突變作用和間接致突變作用。 ?應(yīng)包括 5類遺傳學(xué)終點(diǎn) ?應(yīng)包括多種進(jìn)化程度不同的物種 ?體內(nèi)試驗(yàn)與體外試驗(yàn)配合 ?體細(xì)胞試驗(yàn)陽性，再進(jìn)行生殖細(xì)胞試驗(yàn) ?驗(yàn)證陽性結(jié)果在體內(nèi)的真實(shí)性，必要時(shí)再選用生殖細(xì)胞致突變?cè)囼?yàn) （二）組合原則 國際協(xié)調(diào)組織 (1997)對(duì)于 藥品 的遺傳毒性評(píng)價(jià)建議的檢測(cè)試驗(yàn)組合為： ①細(xì)菌基因突變?cè)囼?yàn)； ②體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)或體外小鼠淋巴瘤細(xì)胞比試驗(yàn)； ③體內(nèi)嚙齒類造血細(xì)胞染色體損傷試驗(yàn) (骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)或骨髓或外周血多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn) )。 在三項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)中為陰性的化學(xué)物，通?？烧J(rèn)為其無遺傳毒性作用。但對(duì)于構(gòu)效關(guān)系顯示有可能具致癌性或致突變性，但在三項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)中為陰性的化學(xué)物，還需要改進(jìn)試驗(yàn)方法或再增加試驗(yàn)項(xiàng)目。 我國 《 新藥審批辦法 》 中要求在新藥臨床前特殊毒理學(xué)評(píng)價(jià)中應(yīng)包括致突變?cè)囼?yàn)、生殖毒性試驗(yàn)（致畸試驗(yàn)）、致癌試驗(yàn)和藥物依賴性試驗(yàn)。 其中致突變?cè)囼?yàn)的基本試驗(yàn)方法有三種：①鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（ Ames試驗(yàn)）；②哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)；③小鼠骨髓微核試驗(yàn)。 上述三項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)結(jié)果全部陰性時(shí)，則不必往下進(jìn)行。 我國 衛(wèi)生部在《 食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序 》 (1994)中對(duì)致突變?cè)囼?yàn)的要求是： 根據(jù)受試物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)以及對(duì)遺傳物質(zhì)作用終點(diǎn)的不同，兼顧體外和體內(nèi)試驗(yàn)，體細(xì)胞和生殖細(xì)胞的原則，進(jìn)行 ① Ames試驗(yàn)；②小鼠骨髓微核試驗(yàn)或骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)；③小鼠精子畸形試驗(yàn)；④睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn)。 如果有一項(xiàng)試驗(yàn)為陽性，還應(yīng)在其他備選試驗(yàn) (V79細(xì)胞 HGPRT基因突變?cè)囼?yàn)，顯性致死試驗(yàn)，果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)， UDS試驗(yàn) )中再選擇兩項(xiàng)試驗(yàn)進(jìn)行。 我國 《 農(nóng)藥安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序 》(1991)中對(duì)遺傳毒理學(xué)試驗(yàn)的要求則為：Ames試驗(yàn)和大腸桿菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)，骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)或骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)，睪丸細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)或顯性致死試驗(yàn)為必做項(xiàng)目。其中有一項(xiàng)出現(xiàn)陽性，還需從精子畸形試驗(yàn)、體外培養(yǎng)細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)、UDS、 果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)等試驗(yàn)中再選擇兩項(xiàng)進(jìn)行。 三、常用的致突變?cè)囼?yàn) 鼠傷寒沙門氏菌原養(yǎng)型 (his+ ) 組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株。 (his ) 正向突變 回復(fù)突變 177。 代謝活化系統(tǒng) 受試物 (一 ) Ames試驗(yàn) 原理 常用菌株 ⑴ TA97，移碼突變；⑵ TA98，移碼突變； ⑶ TA100，堿基置換；⑷ TA101，堿基置換； 微核 (Micronucleus)是存在于細(xì)胞胞質(zhì)中的染色體（斷片、單體、整個(gè)染色體），染色與細(xì)胞核一致，體積比主核小，故稱微核。其來源有二：①斷片或無著絲粒染色體在細(xì)胞分裂后期不能定向移動(dòng)，而遺留在細(xì)胞質(zhì)中；②有絲分裂毒物的作用使個(gè)別染色體或帶著絲粒的染色體環(huán)和斷片在細(xì)胞分裂后期被留在細(xì)胞質(zhì)中。 微核試驗(yàn)的檢測(cè)終點(diǎn)是 DNA斷裂劑和非整倍體誘變劑。 (二 )微核試驗(yàn) (Micronucleus test， MNT) MN NCE 制備細(xì)胞分裂中期相染色體標(biāo)本，在光鏡下可直接觀察染色體的數(shù)目和形態(tài)的改變。染色體畸變?cè)囼?yàn)也常稱為細(xì)胞遺傳學(xué)試驗(yàn)(cytogeic assay)。染色體畸變?cè)囼?yàn)可為體外試驗(yàn)，也可為體內(nèi)試驗(yàn)，包括對(duì)體細(xì)胞和生殖細(xì)胞的分析。 （三）染色體畸變?cè)囼?yàn) (chromosome aberration test) 觀察裂隙、斷裂、斷片、無著絲粒環(huán)、染色體環(huán)、雙或多著絲粒染色體、射體和染色體粉碎 體外染色體畸變
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