15藥物遺傳毒性(編輯修改稿)
2025-02-10 17:35 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 DNA損傷和修復(fù)試驗 顯性致死試驗 在評價突變危害中常用的 有特殊重要意義的試驗 二、遺傳毒性實驗的組合 （一）原因 遺傳毒理學(xué)評價程序通常為一組體內(nèi)、外遺傳毒理學(xué)試驗。 —— 單一的實驗不能全面的檢測各種遺傳終點的變化，容易出現(xiàn)假陰性結(jié)果。 ①化學(xué)毒物的致突變機制不盡相同； ②作用的靶部位不盡相同； ③有直接致突變作用和間接致突變作用。 ?應(yīng)包括 5類遺傳學(xué)終點 ?應(yīng)包括多種進化程度不同的物種 ?體內(nèi)試驗與體外試驗配合 ?體細胞試驗陽性，再進行生殖細胞試驗 ?驗證陽性結(jié)果在體內(nèi)的真實性，必要時再選用生殖細胞致突變試驗 （二）組合原則 國際協(xié)調(diào)組織 (1997)對于 藥品 的遺傳毒性評價建議的檢測試驗組合為： ①細菌基因突變試驗； ②體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗或體外小鼠淋巴瘤細胞比試驗； ③體內(nèi)嚙齒類造血細胞染色體損傷試驗 (骨髓細胞染色體畸變試驗或骨髓或外周血多染紅細胞微核試驗 )。 在三項標準試驗中為陰性的化學(xué)物，通常可認為其無遺傳毒性作用。但對于構(gòu)效關(guān)系顯示有可能具致癌性或致突變性，但在三項標準試驗中為陰性的化學(xué)物，還需要改進試驗方法或再增加試驗項目。 我國 《 新藥審批辦法 》 中要求在新藥臨床前特殊毒理學(xué)評價中應(yīng)包括致突變試驗、生殖毒性試驗（致畸試驗）、致癌試驗和藥物依賴性試驗。 其中致突變試驗的基本試驗方法有三種：①鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變試驗（ Ames試驗）；②哺乳動物培養(yǎng)細胞染色體畸變試驗；③小鼠骨髓微核試驗。 上述三項致突變試驗結(jié)果全部陰性時，則不必往下進行。 我國 衛(wèi)生部在《 食品安全性毒理學(xué)評價程序 》 (1994)中對致突變試驗的要求是： 根據(jù)受試物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)以及對遺傳物質(zhì)作用終點的不同，兼顧體外和體內(nèi)試驗，體細胞和生殖細胞的原則，進行 ① Ames試驗；②小鼠骨髓微核試驗或骨髓細胞染色體畸變試驗；③小鼠精子畸形試驗；④睪丸染色體畸變試驗。 如果有一項試驗為陽性，還應(yīng)在其他備選試驗 (V79細胞 HGPRT基因突變試驗，顯性致死試驗，果蠅伴性隱性致死試驗， UDS試驗 )中再選擇兩項試驗進行。 我國 《 農(nóng)藥安全性毒理學(xué)評價程序 》(1991)中對遺傳毒理學(xué)試驗的要求則為：Ames試驗和大腸桿菌回復(fù)突變試驗，骨髓細胞微核試驗或骨髓細胞染色體畸變試驗，睪丸細胞染色體畸變試驗或顯性致死試驗為必做項目。其中有一項出現(xiàn)陽性，還需從精子畸形試驗、體外培養(yǎng)細胞染色體畸變試驗、UDS、 果蠅伴性隱性致死試驗等試驗中再選擇兩項進行。 三、常用的致突變試驗 鼠傷寒沙門氏菌原養(yǎng)型 (his+ ) 組氨酸營養(yǎng)缺陷型突變株。 (his ) 正向突變 回復(fù)突變 177。 代謝活化系統(tǒng) 受試物 (一 ) Ames試驗 原理 常用菌株 ⑴ TA97，移碼突變；⑵ TA98，移碼突變； ⑶ TA100，堿基置換；⑷ TA101，堿基置換； 微核 (Micronucleus)是存在于細胞胞質(zhì)中的染色體（斷片、單體、整個染色體），染色與細胞核一致，體積比主核小，故稱微核。其來源有二：①斷片或無著絲粒染色體在細胞分裂后期不能定向移動，而遺留在細胞質(zhì)中；②有絲分裂毒物的作用使個別染色體或帶著絲粒的染色體環(huán)和斷片在細胞分裂后期被留在細胞質(zhì)中。 微核試驗的檢測終點是 DNA斷裂劑和非整倍體誘變劑。 (二 )微核試驗 (Micronucleus test， MNT) MN NCE 制備細胞分裂中期相染色體標本，在光鏡下可直接觀察染色體的數(shù)目和形態(tài)的改變。染色體畸變試驗也常稱為細胞遺傳學(xué)試驗(cytogeic assay)。染色體畸變試驗可為體外試驗，也可為體內(nèi)試驗，包括對體細胞和生殖細胞的分析。 （三）染色體畸變試驗 (chromosome aberration test) 觀察裂隙、斷裂、斷片、無著絲粒環(huán)、染色體環(huán)、雙或多著絲粒染色體、射體和染色體粉碎 體外染色體畸變
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