食品安全檢驗(yàn)技術(shù)-廣東海洋大學(xué)(編輯修改稿)
2025-02-03 12:59 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 應(yīng) 。 洗滌多余的酶標(biāo)抗原 ， 加酶反應(yīng)的底物后 ， 底物被酶催化顯色 ， 故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析 。 在整個(gè)反應(yīng)當(dāng)中 ， 樣品中氯霉素含量越多 ， 反應(yīng)顯色就越淡 。 反之 ，樣品中氯霉素含量越少 ， 則顯色越深 。 【實(shí)驗(yàn)步驟】 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 ① 從冰箱取出試劑盒 ， 將氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液 、 濃縮萃取稀釋液 、 濃縮洗滌液 、 酶標(biāo)記物 、 底物溶液及微量測(cè)試孔條置于室溫下回溫 30min。 ② 配制原倍萃取稀釋液及洗滌液：用蒸餾水將 10倍濃縮萃取稀釋液及濃縮洗滌液都分別用蒸餾水按 1:9的比例稀釋 。 【實(shí)驗(yàn)步驟】 樣品制備 ① 將 3g對(duì)蝦肉剪碎后放入 50mL帶塞離心管中 ， 加入6mL乙酸乙酯 ， 用均質(zhì)機(jī)均質(zhì)約 1min， 再震蕩約 30s。 ② 離心 （ 3000rpm， 10min） ， 取 2mL上清液至玻璃管中 ， 于 50℃ 下氮?dú)獯蹈?。 ③ 于上述玻璃管中加入正己烷 2mL， 先將殘余物完全溶解后 ， 再加入 1mL原倍萃取稀釋液 ， 震蕩約 30s。 ④ 離心 （ 3000rpm， 10min） ， 用吸管吸去上層液及中間乳化層部分 ， 棄掉 ， 取下層液備用 。 【實(shí)驗(yàn)步驟】 操作測(cè)定 ① 取一定的微量測(cè)試孔條 ， 于適當(dāng)微孔中分別加入 100μL標(biāo)準(zhǔn)溶液 （ 六個(gè)濃度 ） 。 ② 在另外的微孔中加入 100μL已完成前處理的樣品溶液 ③ 在每一微孔中加入 50μL酶標(biāo)記物 。 ④ 輕敲盤(pán)子四周 ， 使其充分混合后于室溫下避光靜置溫育 1h。 ⑤ 甩掉微孔中的反應(yīng)液 ， 再將洗液加滿每一微孔后甩掉 ， 重復(fù)洗 3次 ， 最后一次甩掉洗液后 ， 在吸水紙上拍干 。 ⑥ 于每一微孔中加入底物溶液 100μL后 ， 輕敲盤(pán)子四周 ， 使其充分混合 ， 室溫下避光靜置溫育 20min。 ⑦ 于每一微孔中加入 100μL反應(yīng)終止液 ， 用酶標(biāo)儀于波長(zhǎng)450nm下判讀 。 【注意事項(xiàng)】 使用前先將試劑盒置于室溫下 ， 回溫 30min。 回溫后 ， 取出所需微量測(cè)試孔條 ， 將剩余板條立即放
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