dna重組技術(shù)的基本工具概述(ppt72頁(yè))(編輯修改稿)
2025-01-26 02:15 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子 不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子 啟動(dòng)子 終止子 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 內(nèi)含子： 外顯子： 真核細(xì)胞的 基因結(jié)構(gòu) 編碼區(qū) 非編碼區(qū) 外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列 內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列 ： 有調(diào)控作用的核苷酸序列， 包括位于編碼區(qū)上游的 RNA 聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。 非編碼序列： 包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子 原核細(xì)胞 真核細(xì)胞 不同點(diǎn) 編碼區(qū)是 _____的 編碼區(qū)是間隔的、 _____的 相同點(diǎn) 都由能夠編碼蛋白質(zhì)的 ______和具有調(diào)控作用的 ______區(qū)組成的 原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較 思考 編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)一樣長(zhǎng)嗎？ 連續(xù) 不連續(xù) 編碼區(qū) 非編碼 一、目的基因的獲取 目的基因主要是指 ______________________ 編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 請(qǐng)舉出三個(gè)以上的例子 獲取目的基因的常用方法有哪些 ? （ 1）從基因文庫(kù)中獲取 （ 2）利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增 （ 3）人工合成 請(qǐng)閱讀 P9第一和二兩段 (一 )從基因文庫(kù)中獲取目的基因 將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫(kù) 基因文庫(kù) 基因組文庫(kù) 部分基因文庫(kù) （如 :cDNA文庫(kù)） 基因組文庫(kù)與部分基因文庫(kù)的關(guān)系 怎樣從基因文庫(kù)中得到我們所需的目的基因呢 ? ? 目的基因的提取方法 直接分離基因 人工合成基因 反轉(zhuǎn)錄法 根據(jù)已知的氨基酸序列合成DNA ： 鳥(niǎo)槍法 鳥(niǎo)槍法： 供體細(xì)胞中的 DNA 許多 DNA片段 運(yùn)載體 限制酶 與載體連接 載入 受體細(xì)胞 產(chǎn)生特定性狀 導(dǎo)入 外源 DNA擴(kuò)增 目的基因 分離 (直接分離法 ) 直接分離基因 1）反轉(zhuǎn)錄法： 以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使 RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈 DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈 DNA，從而獲得所需的基因。 目的基因的 mRNA 單鏈 DNA(cDNA) 雙鏈 DNA (即目的基因 ) 反轉(zhuǎn)錄 合成 2）根據(jù)已知的氨基酸序列合成 DNA法 ： 根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測(cè)出相應(yīng)的信使 RNA序列，然后按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，推測(cè)出它的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過(guò)化學(xué)方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。 蛋白質(zhì)的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列 推測(cè) 推測(cè) 目的基因 化學(xué)合成 ? 上述三種目的基因提取的方法有何優(yōu)缺點(diǎn)？ 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) 鳥(niǎo)槍法 反轉(zhuǎn)錄法 根據(jù)已知氨基酸合成 DNA法 操作簡(jiǎn)便廣泛使用 工作量大，盲目，分離出來(lái)的有時(shí)并非一個(gè)基因 專一性強(qiáng) 操作過(guò)程麻煩， mRNA很不穩(wěn)定，要求的技術(shù)條件較高 專一性最強(qiáng) 僅限于合成核苷酸對(duì)較少的簡(jiǎn)單基因 思考 :為什么要構(gòu)建基因文庫(kù) ?直接從含有目的基因的生物體內(nèi)提取不行嗎 ? ? 哪些新技術(shù)能大大簡(jiǎn)化基因工程的操作技術(shù)？ 1） DNA序列自動(dòng)測(cè)序儀： 2） PCR技術(shù)： 對(duì)提取出來(lái)的基因進(jìn)行核苷酸序列分析。 使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬(wàn)倍地?cái)U(kuò)增。 ① 概念： PCR全稱為 _______________，是一項(xiàng) 在生物 ____復(fù)制 ___________的核酸合成技術(shù) ③條件： _______________________、 _______________、 ___________ (做啟動(dòng)子 )、 ： ②原理： __________ ④方式：以 _____方式擴(kuò)增，即 ____（ n為擴(kuò)增循 環(huán)的次數(shù)） ⑤結(jié)果： 選修 1 P60
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