基因診斷3(編輯修改稿)
2025-01-25 18:06 本頁面
【文章內容簡介】 . 鐮形細胞貧血的 Gene診斷 33 ? 已知限制酶 Mst 1識別序列 （ CCTNAGG） ? ? ? CCTGAGG ? ? CCTGTGG ? 突變后不能識別， ? 酶切位點消失，限制酶切片段長度發(fā)生變化。 34 2) ASO探針診斷 已知突變 Gene部位和性質，合成寡核苷酸探針， 32P標記，進行斑點雜交。 Normal βΑGene Probe—— 與正常 Probe βΑ雜交穩(wěn)定 Mutation βS Gene Probe—— 與異常 βS雜交 穩(wěn)定 35 等位基因特異性寡核苷酸探針（ ASO） （ Allelespecificoligonucleotide ） 36 斑點雜交結果： βΑ/βΑ βΑ/βS βS/βS 正常探針 突變探針 突變 型 遺傳病的 直接 基因診斷 37 突變 型 遺傳病的 直接 基因診斷 38 BamHI BamHI α2 α1 α2 10 kb 14 kb probe 1） ?地中海貧血的基因診斷 ?基因不同程度的缺失可引起不同類型的 ?地中海貧血。 直接基因診斷 — 缺失 型 遺傳病的 直接 基因診斷 39 Southern blot 檢測結果： αα/αα αα/α αα/ α / / 正常 缺 1 缺 2 缺 3 缺 4 14kb 10kb 缺失 型 遺傳病的 直接 基因診斷 40 ? 2） β地貧的Gene診斷 ? β珠蛋白基因兩側有 pst1酶切位點， pst1酶切正常可得到 ? β珠蛋白基因缺失， pst1酶切則得到 kb片段為 β0 缺失 型 遺傳病的 直接 基因診斷 41 以 βGene為探針， Southern blot 方法檢測 ? βΑ/βA βΑ/β0 β0/β0 ? 缺失 型 遺傳病的 直接 基因診斷 42 3） DMD的基因診斷 DMD屬 XR DMD基因是最大的基因，有 79個外顯子 DMD基因突變主要以 缺失 為主，可涉及基因的不同部位 E1 E2 E3 缺失 型 遺傳病的 直接 基因診斷 43 病例 外顯子 1 2 3 4 5 6 7 8 Pm 3 43 50 13 6 47 60 52 bp 535 113 缺失 型 遺傳病的 直接 基因診斷 44 二）間接基因診斷方法及實例 當 致病基因 雖然已知，但其 異常性質未知 時，或疾病 Gene本身尚未知 時，主要通過 Gene和 DNA多態(tài)的連鎖分析 間接地 作出診斷。 45 連鎖分析基于 遺傳標記 與 Gene在染色體上連鎖， 通過對受檢者及其家系進行連鎖分析，分析子代獲得某種 遺傳標記 與 疾病 的關系，間接推斷受檢 子代是否獲得帶有致病基因的染色體 ，間接地判斷并做出診斷。 遺傳標記是基因組中的 DNA 多態(tài) 如： RFLP， VNTR 等。 間接基因診斷 46 遺傳標記 相關基因 表型分析 間接基因診斷 47 1 Southern blotRFLP診斷 (PKU) PAH基因兩側有 Msp1酶切位點 ,用該酶消化可產生23kb、 19kb 兩種等位片段，以 PAHcDNA為探針與
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