【文章內容簡介】 菜培養(yǎng)基的試管中，經充分混合後， 倒入培養(yǎng)皿中。 微生物的生長 世代時間 (generation time)： 母細胞經二分裂生殖形成兩個子細胞 所需之時間 。 g= t = t n (log Nlog N0) g:世代時間 t: 某一培養(yǎng)時間 n:經過 n代繁殖 N:開始培養(yǎng)時之菌數 N0:子代細胞總數 N=N02n ? 2n=N/N0 ? log2n=log(N/N0) ? =logNlogN0 ? n=(logNlogN0)/=(logNlogN0) 微生物之生長測定 ?計數測定： ?帄盤測定： 在培養(yǎng)基中培養(yǎng)之後，測定樣品中的活菌數。 每一帄盤 (9cm)菌落數以 30~300個為原則。 (計活菌 ) ?特殊玻片顯微鏡測定： 用血球計數器檢視之。 (死活菌均計 ) ?過濾法： 以濾膜過濾菌液，待培養(yǎng)後估算菌落數。 (計活菌 ) 以濾膜過濾菌液，乾燥後計數。 (死活菌均計 ) 主要是用來測定在某一環(huán)境下微生物的生長狀況及了解其特性 ?計量測定： ?乾燥菌體恆重測之： 將菌液經離心使菌體沉下或經過濾處理後 ， 菌體以低 溫真空烘乾後 ， 加以秤乾重。 一般細菌為例： 1012~1013g/個。 ?濁度法： ?要完成檢量線。 利用濁度計：菌數越多濁度越高，菌液透光率越低， 透光率與細菌數成反比。 利用吸光計：利用固定波長 (500或 650㎜ )照射，測其 光學密度 (OD值 ) ，值越高菌數越多。 ?氮量測定： 測定總氮量，以 推估 粗蛋白質量並換算成菌體量。 ?生化活性測定： 如 ATP高則菌數含量高。 (計活菌 ) 菌體內含有大量蛋白質，而氮是組成胺基酸 必需成分 。 不同生物種類的含量則不同 。 一般生物的蛋白質中約含 16%的氮 ∴ 蛋白質量 16%=氮量 總氮量 247。247。單一細胞蛋白質量＝細菌數 例： 今測得 E. coli 細胞之總氮量為 單一 E. coli之細胞蛋白質量為 1ng 則有 247。247。1ng/個 ＝ 102g247。109g/個 ＝ 107個 每一活細胞所含 ATP 量是固定值。 如食品上測牛奶內是否有菌可採用此法。 利用 『 螢火蟲發(fā)螢光的原理 』， 而螢火蟲會發(fā)光的原因有 ： 螢光物質 螢光酵素 ＡＴＰ 將螢光物質 、 螢光酵素加在細菌 (提供 ATP)上，利用超音波振盪，反應後測知螢光量 (光子捕捉器 ) 微生物培養(yǎng)方式 同步培養(yǎng)： 應用不同生理調節(jié)方式或物理法，使同一 菌齡之細胞增殖以供使用。 例：利用溫度的改變： 大腸桿菌在 37℃ 下培養(yǎng)，可進行正常的分裂，但 各細菌之生長速率不同，當改變培養(yǎng)溫度為 25℃ 時，細菌分裂會受影響，此時所有細胞全部暫停 分裂，經一段時間後再移至 37℃ ，則所有細胞皆 同時分裂，達同步生長目的。 同步培養(yǎng)所得知結果，其能維持的時間非常有限。 經幾代的培養(yǎng)之後，菌中之生長速率又會不同。 微生物的控制 防治微生物的目的，在有效控制微生物的生長及其影響，對有益者則加以利用，對有害者則加以設法滅除之。 實驗室常用滅菌方法 ?溼熱滅菌法 ?乾熱滅菌法 ?火焰法 ?過濾除菌法 ?紫外線殺菌法 ?酒精 ?超音波 (或 +清潔劑 ) ?滅菌 (sterilization)：徹底的殺菌方法。 用物理或化學方式 殺死物體上所有微生物 ，永久性的喪 失其活力包括營養(yǎng)型及孢子型。 ?消毒 (disinfection) ：消毒劑 利用物理或化學方式 殺死所有病原性微生物 ，主要是破 壞正在生長之微生物營養(yǎng)細胞，孢子型則仍存在。 ?防腐 (antisepsis) ：防腐劑 利用物理或化學方式使物體內外之微生物 暫時處於不生 長繁殖但又未死亡 的狀態(tài)。 ?清潔 (sanitizing) ：清潔劑 以化學藥劑處理物品，降低其所帶之微生物含量。 ?商業(yè)滅菌 (mercial sterilization) 食品經殺菌處理後，按其所規(guī)定的微生物檢驗法，在其 所檢之商品中未檢出超出規(guī)定之微生物的一種殺菌法。 ?殺菌 (bactericidal) ：殺菌劑 利用物理化學方法殺死微生物的作用。含滅菌及消毒。 影響作用之因素 ?作用對象： 不同微生物對不同抗菌劑有不同反應，所以必須先考慮要除去的 微生物種類，才能決定最適當之方法。 ?濃度： 不論物理或化學藥劑，使用的劑量或濃度都會影響作用之效果。 ?溫度： 因溫度會影響化學反應之進行，提高溫度可加強殺菌效果。 ?時間： 當細菌死亡時，菌數隨時間之增加而降低， 菌數越多所需時間越長。 ?pH值： 除影響抗菌劑本身之效能外，也會加強或降低對菌體之效能。 ?其他環(huán)境因子： 一些環(huán)境因子會干擾或影響抗菌劑之作用，須先除去。 微生物生長的控制 類別 方法 物理方法 溫度 過濾 放射線 滲透壓 乾燥 超音波 化學方法 防腐劑及殺菌劑 重金屬 防腐劑 抗生素 溫度 ~高溫 ?乾熱殺菌法： 熱傳導方式：以空氣為介質 作用原理：利用高溫使微生物體內的水分蒸發(fā)及 蛋白質因高溫產生氧化變性而達滅菌 作用。 ?乾燥箱 (oven)滅菌法： 在乾燥箱中利用熱空氣進行滅菌 ， 作用條件： 160~180℃ 、 2~4小時 。 ?火焰法： 利用酒精燈或本生燈之火焰除去微生物，達完 全滅菌之作用。 ?灰化法及焚燒法： 利用 600℃ 以上高溫燃燒，以殺死微生物。 ?溼熱殺菌法 熱傳導方式：以水為介質 作用原理：利用產生之高溫及水中的氧氣與胺基酸 裡的氫氣產生氫鍵以破壞蛋白質，使蛋 白質變性而達滅菌作用。 ?高溫 高壓滅菌法 (autoclave)： 利用密閉鍋 (滅菌釜 )產生之高溫高壓 ， 經一段時間後可達 殺菌之目的。 條件： 121℃ 、 、 20~30mins。 ＊不適用 ： 蒸氣無法穿透之物品 ； 易受熱破壞之物品。 ?開放蒸氣 (steam)： 蒸汽溫度為攝氏 95~105度，因此滅菌的時間需 6~8小時才 能達到效果。 ?煮沸法 (boiling)： 將物品在 100℃ 沸水中加熱 15分鐘以上，將不形成芽孢 的細菌消滅之方法。 ?間歇滅菌法 (tyndallization)： 通常溫度不超過 100℃ ，每日一次，每次加熱時間 30分 鐘，每次滅菌後保溫在 25~30℃ ， 促使殘留的孢子體萌 發(fā)成營養(yǎng)體。如此反覆連續(xù)三次，即可達到完全滅菌 的效果。 ?巴斯德滅菌法 (pasteurization)： 由巴斯德所提出，以不造成物質變性之低溫，殺死微 生物的營養(yǎng)體，不過不能達完全滅菌之目的。 低溫： ６５ ℃ ， １５～３０分 高溫： ７１ ℃ or ７２ ℃ ，１５秒 ?超高溫瞬時滅菌法 (UHT)： 滅菌條件： 135~137℃ 、 3~5秒，可殺死微生物的營養(yǎng) 體和耐熱性強之芽胞細菌。 乾熱 ： 玻璃製品、金屬製品及耐乾熱的器材 ? 醫(yī)院中現在正須要剪刀、鑷子來開刀，但剪刀、鑷子須先滅菌，則拿一個鐵盤放入剪刀、鑷子等，再倒入酒精用火燒 一燒，即達滅菌！ ? 例如 :微生物實驗時少一個培養(yǎng)皿 ,則拿一個洗淨的培養(yǎng)皿倒入些酒精後 ,用火燒一燒 ,即可將之滅菌了！ 濕熱 ? 煮沸 ： 沒有遭受特別污染的製品（奶瓶消毒 ) ? 巴氏消毒法 ： 飲料、酒、牛奶 ? 間歇消毒法： 可能受到會產生內生胞子 污染之物品 如花生麵筋罐頭 ? 高