dna芯片原理分類與操作(編輯修改稿)
2025-01-18 06:24 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 較高DNA芯片DNA微陣列的制備采用事先合成的 DNA或制備基因探針，然后打印在支持物上l噴墨打印 優(yōu)點：速度快，量準，對支持物表面要求低； 缺點：斑點大，探針密度低，液滴分配不均l針式打印 優(yōu)點：簡便，價低，液滴小，探針密度大； 缺點：準確性和重現(xiàn)性差DNA芯片的制備DNA芯片噴墨打印技術(shù)DNA芯片針式打印法（接觸式點樣）Best!DNA芯片點陣的制作DNA芯片 樣品的準備 樣品的準備包括l樣品的分離純化l擴增l標記DNA芯片分離純化：樣品來源于活的細胞，使用一定方法分離并純化 DNA或 RNA（特別是 mRNA）。只有達到一定純度的樣品，才能保證后續(xù)操作的正確。目前分離純化使用的試劑均有商品出售，品牌繁多，原理也不盡相同，產(chǎn)物收率和耗時也相差甚遠分離純化DNA芯片樣品準備樣品準備l樣品的擴增：擴增的目的在于獲得足夠的樣品量。現(xiàn)已發(fā)展出固相 PCR系統(tǒng)。l樣品的標記：主要采用 熒光標記法 ，也可用生物素，或放射性核標記。標記的方式采用 PCR或 RTPCR。常用的熒光色素為 Cy Cy5。用 Cy Cy5標記 dNTP，經(jīng) PCR后，產(chǎn)物即可被標記。待測樣品和對照可采用雙色熒光標記。樣品擴增和標記DNA芯片 分子雜交 芯片的雜交：將已知序列的 DNA探針顯微固化于支持物表面，將已標記好的樣品與之進行雜交，雜交過程一般在 30分鐘完成。樣品與 DNA芯片上的探針陣列進行雜交。與經(jīng)典分子雜交的區(qū)別：雜交時間短， 30分鐘內(nèi)完成可同時平行檢測許多基因序列影響雜交反應(yīng)的因素 ：鹽濃度、溫度、反應(yīng)時間、 DNA二級結(jié)
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