【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 不復(fù)制分裂的細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞；細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞；③③ 其可以在呼吸道和腸道中繁殖，因而不僅可以通過(guò)靜脈其可以在呼吸道和腸道中繁殖，因而不僅可以通過(guò)靜脈注射的方式進(jìn)行基因治療，還可以通過(guò)口服、噴霧、注射的方式進(jìn)行基因治療，還可以通過(guò)口服、噴霧、氣管內(nèi)滴注等方法；氣管內(nèi)滴注等方法；④④ 腺病毒載體中插入的外源基因可達(dá)腺病毒載體中插入的外源基因可達(dá) kb；；⑤⑤ 腺病毒容易制備、純化和濃縮，能夠滿足基因治療的臨腺病毒容易制備、純化和濃縮，能夠滿足基因治療的臨床需要；床需要；⑥⑥ 腺病毒的基因結(jié)構(gòu)與功能及其生活史目前了解較為清楚腺病毒的基因結(jié)構(gòu)與功能及其生活史目前了解較為清楚，用它作載體治療比較容易控制。，用它作載體治療比較容易控制。三、腺病毒相關(guān)病毒載體（三、腺病毒相關(guān)病毒載體（ adeno associated virus，AAV））223。 為正鏈為正鏈 DNA或負(fù)鏈或負(fù)鏈 DNA→ 形成雙鏈形成雙鏈 DNA。優(yōu)越性：優(yōu)越性：①① 腺病毒相關(guān)病毒的反向末端重復(fù)序列中沒(méi)有轉(zhuǎn)腺病毒相關(guān)病毒的反向末端重復(fù)序列中沒(méi)有轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)元件，這樣可以減少利用這種載體進(jìn)行錄調(diào)節(jié)元件，這樣可以減少利用這種載體進(jìn)行基因治療時(shí)激活原癌基因的可能性；基因治療時(shí)激活原癌基因的可能性；②② 其宿主細(xì)胞范圍較廣，且能夠形成慢性感染；其宿主細(xì)胞范圍較廣，且能夠形成慢性感染；③③ 其整合入宿主細(xì)胞染色體中時(shí)發(fā)生位點(diǎn)特異性其整合入宿主細(xì)胞染色體中時(shí)發(fā)生位點(diǎn)特異性整合，從而可以為轉(zhuǎn)入的外源基因提供較為穩(wěn)整合，從而可以為轉(zhuǎn)入的外源基因提供較為穩(wěn)定的染色體環(huán)境，有利于外源基因的表達(dá)；定的染色體環(huán)境，有利于外源基因的表達(dá)；④④ 其熱穩(wěn)定性較好，而作為輔助病毒的腺病毒，其熱穩(wěn)定性較好，而作為輔助病毒的腺病毒，則能在則能在 60℃℃ 被滅活；被滅活；⑤⑤ 其安全性較好，其本身不具有致病性。其安全性較好，其本身不具有致病性。 四、重組痘苗病毒載體（四、重組痘苗病毒載體（ vaccinia virus， VV））223。 基因組大小為基因組大小為 187 kb，為雙鏈，為雙鏈 DNA病毒。病毒。223。 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：①① 宿主細(xì)胞廣泛；宿主細(xì)胞廣泛；②② 既能感染分裂細(xì)胞，又能感染非分裂細(xì)胞。既能感染分裂細(xì)胞，又能感染非分裂細(xì)胞。五、單純皰疹病毒載體（五、單純皰疹病毒載體（ herpes simplex virus， HSV））223。 為雙鏈為雙鏈 DNA病毒，基因組大小為病毒，基因組大小為 152 kb。223。 HSV的特點(diǎn)：的特點(diǎn)：①① 十分了解十分了解 HSV的基因組序列；的基因組序列；②② 可容納可容納 30 kb外源基因；外源基因；③③ 宿主細(xì)胞范圍廣泛；宿主細(xì)胞范圍廣泛；④④ 重組重組 HSV在體外培養(yǎng)能得到較高的滴度；在體外培養(yǎng)能得到較高的滴度；⑤⑤ 具有嗜神經(jīng)性，它可從外周神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)入中樞具有嗜神經(jīng)性，它可從外周神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，并且在神經(jīng)元中潛伏下來(lái)，即病毒神經(jīng)系統(tǒng)，并且在神經(jīng)元中潛伏下來(lái)，即病毒的部分基因保持轉(zhuǎn)錄活性，但卻不影響神經(jīng)元的部分基因保持轉(zhuǎn)錄活性，但卻不影響神經(jīng)元行使正常功能。行使正常功能?！?RV載體：反轉(zhuǎn)錄病毒載體；載體：反轉(zhuǎn)錄病毒載體；▲ AV載體：腺病毒載體；載體：腺病毒載體；▲ HSV載體：?jiǎn)渭儼捳畈《据d體；載體：?jiǎn)渭儼捳畈《据d體；▲ AAV載體：腺病毒相關(guān)病毒載體。載體：腺病毒相關(guān)病毒載體。六、染色體外自主復(fù)制載體六、染色體外自主復(fù)制載體223。 前面提到的基因治療載體幾乎全部來(lái)源于動(dòng)物病前面提到的基因治療載體幾乎全部來(lái)源于動(dòng)物病毒，多數(shù)要整合入宿主細(xì)胞染色體之后才能發(fā)揮毒，多數(shù)要整合入宿主細(xì)胞染色體之后才能發(fā)揮作用。作用。223。 隨機(jī)整合隨機(jī)整合 →→ 外源外源 DNA插入的位置不同插入的位置不同 →→ 插入突插入突變、基因失活、沉默基因激活（如原癌基因）變、基因失活、沉默基因激活（如原癌基因） →→嚴(yán)重后果。嚴(yán)重后果。223。 因此這些載體一般不能用于快速增殖細(xì)胞的基因因此這些載體一般不能用于快速增殖細(xì)胞的基因治療。為克服這些缺陷，正在研究能在染色體外治療。為克服這些缺陷，正在研究能在染色體外自主復(fù)制的載體。自主復(fù)制的載體。223。 而很多情況下，基因治療的靶細(xì)胞正是那些快速而很多情況下，基因治療的靶細(xì)胞正是那些快速增殖的細(xì)胞。增殖的細(xì)胞。①① 哺乳動(dòng)物人工染色體哺乳動(dòng)物人工染色體? mammalian artificial chromosome， MAC，應(yīng)具備哺，應(yīng)具備哺乳動(dòng)物染色體的全部特征，即有自主復(fù)制序列，端粒乳動(dòng)物染色體的全部特征，即有自主復(fù)制序列，端粒和著絲粒。迄今為止還沒(méi)有得到可用于克隆外源基因和著絲粒。迄今為止還沒(méi)有得到可用于克隆外源基因的含有哺乳動(dòng)物染色體的復(fù)制起始位點(diǎn)、端粒和著絲的含有哺乳動(dòng)物染色體的復(fù)制起始位點(diǎn)、端粒和著絲粒的人工染色體。粒的人工染色體。②② 來(lái)源于來(lái)源于 EB病毒的載體病毒的載體222。 EB病毒（病毒（ EpsteinBarr virus， EBV））222。 基因組基因組 172 kb，含有，含有 84個(gè)個(gè) ORF和反向末端重復(fù)序列。和反向末端重復(fù)序列。222。 EB病毒制成的載體可以在連續(xù)分裂的靶細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存病毒制成的載體可以在連續(xù)分裂的靶細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在，因而可以用于對(duì)快速增殖細(xì)胞的基因治療。在，因而可以用于對(duì)快速增殖細(xì)胞的基因治療。第三節(jié)第三節(jié) 基因治療中外源基因?qū)氲幕瘜W(xué)基因治療中外源基因?qū)氲幕瘜W(xué)和物理方法和物理方法一、生物學(xué)方法一、生物學(xué)方法二、化學(xué)方法二、化學(xué)方法三、物理方法三、物理方法一、生物學(xué)方法一、生物學(xué)方法223。 利用病毒載體與細(xì)胞的表面受體的相互認(rèn)別把外利用病毒載體與細(xì)胞的表面受體的相互認(rèn)別把外源基因轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞。以后各節(jié)中將詳細(xì)介紹。源基因轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞。以后各節(jié)中將詳細(xì)介紹。二、化學(xué)方法二、化學(xué)方法①① DNA介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移 ———— 是指用磷酸鈣微量沉淀是指用磷酸鈣微量沉淀外源外源 DNA，然后與靶細(xì)胞混合；靶細(xì)胞攝入沉淀，然后與靶細(xì)胞混合；靶細(xì)胞攝入沉淀物，外源基因就被結(jié)合進(jìn)核內(nèi)，與染色體發(fā)生整物，外源基因就被結(jié)合進(jìn)核內(nèi)，與染色體發(fā)生整合。然后根據(jù)外源基因中選擇基因的特性對(duì)轉(zhuǎn)化合。然后根據(jù)外源基因中選擇基因的特性對(duì)轉(zhuǎn)化細(xì)胞進(jìn)行篩選。細(xì)胞進(jìn)行篩選。②② 染色體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移染色體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移 ———— 就是先將供體細(xì)胞用就是先將供體細(xì)胞用秋水仙素處理使其染色體固縮、破碎，用差速離秋水仙素處理使其染色體固縮、破碎，用差速離心分離法分離出染色體，然后將染色體與受體細(xì)心分離法分離出染色體，然后將染色體與受體細(xì)胞混合，部分染色體被吞噬入細(xì)胞質(zhì)，斷裂成小胞混合，部分染色體被吞噬入細(xì)胞質(zhì)，斷裂成小片段后，一部分片段可以進(jìn)入核內(nèi)，與染色體發(fā)片段后，一部分片段可以進(jìn)入核內(nèi)，與染色體發(fā)生整合。生整合。? 化學(xué)方法轉(zhuǎn)移基因的效率很低?；瘜W(xué)方法轉(zhuǎn)移基因的效率很低。三、物理方法三、物理方法①① 電穿透法電穿透法 ———— 是借助電流使是借助電流使 DNA直接穿過(guò)細(xì)胞膜直接穿過(guò)細(xì)胞膜，從而轉(zhuǎn)入細(xì)胞中。（還未應(yīng)用到基因治療中），從而轉(zhuǎn)入細(xì)胞中。（還未應(yīng)用到基因治療中）②② 顯微注射法顯微注射法 ———— 是直接將外源基因注射入細(xì)胞中是直接將外源基因注射入細(xì)胞中，這種方法的操作難度大，只能用在易固定且個(gè)，這種方法的操作難度大，只能用在易固定且個(gè)體較大的細(xì)胞上。應(yīng)用到生殖細(xì)胞涉及到倫理問(wèn)體較大的細(xì)胞上。應(yīng)用到生殖細(xì)胞涉及到倫理問(wèn)題，故也不能臨床應(yīng)用到基因治療中。題，故也不能臨床應(yīng)用到基因治療中。第四節(jié)第四節(jié) 基因治療的方式基因治療的方式223。 基因治療的靶細(xì)胞：體細(xì)胞；生殖細(xì)胞。基因治療的靶細(xì)胞：體細(xì)胞；生殖細(xì)胞。223。 體細(xì)胞基因療法（體細(xì)胞基因療法（ somatic cell gene therapy）） ———— 將遺傳物質(zhì)引入人的體細(xì)胞進(jìn)行基因治療的方將遺傳物質(zhì)引入人的體細(xì)胞進(jìn)行基因治療的方法為體細(xì)胞基因療法。法為體細(xì)胞基因療法。223。 生殖細(xì)胞基因療法（生殖細(xì)胞基因療法（ germ cell gene therapy）） ———— 以生殖細(xì)胞為對(duì)象的基因治療稱為生殖細(xì)胞基以生殖細(xì)胞為對(duì)象的基因治療稱為生殖細(xì)胞基因療法。因療法。223。 美國(guó)政府在美國(guó)政府在 1985年已規(guī)定基因治療的研究只能限年已規(guī)定基因治療的研究只能限于體細(xì)胞。于體細(xì)胞。目前有目前