基因工程的常規(guī)技術(shù)(編輯修改稿)
2025-10-08 20:46 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 到實(shí)現(xiàn)。 ?1988年 Saiki等將耐熱 DNA聚合酶（ Taq）引入了 PCR技術(shù) ?1989年美國(guó) 《 Science》 雜志列 PCR 為十余項(xiàng)重大科學(xué)發(fā)明之首 ,比喻 1989年為 PCR爆炸年 ,Mullis榮獲 1993年度諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。 Kary B. Mullis（ 1944－） Th e Nobe l Priz e in Che m is tr y 1 9 9 3 fo r c o n tr i b u ti o n s t o th e d e v e l o p m e n ts o f m e th o d s w i th i n DN A b a s e d c h e m i s try fo r h i s i n v e n t i o n o f t h e p o l y m e ra s e c h a i n r e a c ti o n (PCR ) m e t h o d Kar y B. M ul lisLa J ol l a , CA , USAB:1 9 4 4 PCR技術(shù)的基本原理 無(wú)細(xì)胞分子克隆法：在微量離心管中 ,加入適量的緩沖液 , 微量的模板 DNA,四種脫氧單核苷酸 ,耐熱性多聚酶 , 一對(duì)合成 DNA的引物 ,通過 高溫變性 、 低溫退火 和 中溫延伸 三個(gè)階段為一個(gè)循環(huán) ,每一次循環(huán)使特異區(qū)段的基因拷貝數(shù)放大一倍 ,一般樣品是經(jīng)過 30次循環(huán) ,最終使基因放大了數(shù)百萬(wàn)倍 。 擴(kuò)增了特異區(qū)段的 DNA帶。 PCR擴(kuò)增原理 引物 延伸 延伸 5’ 5’ 3’ 3’ 變性、退火 變性、退火 Polymerase Chain Reaction (PCR) 引物設(shè)計(jì)： （ 1)序列應(yīng)位于高度保守區(qū) ,與非擴(kuò)增區(qū)無(wú)同源序列。 （ 2）引物長(zhǎng)度以 1530 bp為宜（
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