基因工程技術(shù)ppt課件(編輯修改稿)
2025-09-18 23:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 DNA結(jié)合蛋白類。 ③一般 100ng DNA模板 /100?L。 ④模板濃度過高會導(dǎo)致反應(yīng)的非特異性增加。 （ 5）引物濃度 ?mol/L 濃度過高易導(dǎo)致模板與引物錯配 ,反應(yīng)特異性下降。 ① 引物長度一般以 15～ 30bp為宜 ,過短則降低特異性 ， 過長則會引起引物間退火而影響有效擴增 。 ② 避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu) ， 避免序列內(nèi)有較長的回文結(jié)構(gòu) ， 使引物自身不能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu) 。 ③ G/C和 A/T堿基均勻分布 ， G/C含量在 45～ 55%之間 ， 引物堿基序列盡可能選擇堿基隨機分布 ， 避免出現(xiàn)嘌呤或嘧啶連續(xù)排列 。 ④ 要避免兩個引物間特別是 3′末端堿基序列互補以及同一引物自身 3′末端堿基序列互補的 ， 使它們不能形成引物二聚體或發(fā)卡結(jié)構(gòu) 。 ⑤ 引物 3′末端堿基一般應(yīng)與模板 DNA嚴(yán)格配對 ， 并且 3′末端為 G、 C或 T時引發(fā)效率較高 。 ⑥ 引物 5`末端堿基可不與模板 DNA匹配 ， 可添加與模板無關(guān)的序列 (如限制性核酸內(nèi)切酶的識別序列 、 ATG起始密碼子或啟動子序列等 )， 便于克隆和表達(dá) ， 但其保護堿基有一定的要求 。 ⑦ 引物的堿基順序不能與非擴增區(qū)有同源性。
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