基因工程技術(shù)ppt課件-閱讀頁(yè)
2024-09-10 23:03本頁(yè)面
【正文】 度 ?mol/L 濃度過(guò)高易導(dǎo)致模板與引物錯(cuò)配 ,反應(yīng)特異性下降。 ② 避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu) ， 避免序列內(nèi)有較長(zhǎng)的回文結(jié)構(gòu) ， 使引物自身不能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu) 。 ④ 要避免兩個(gè)引物間特別是 3′末端堿基序列互補(bǔ)以及同一引物自身 3′末端堿基序列互補(bǔ)的 ， 使它們不能形成引物二聚體或發(fā)卡結(jié)構(gòu) 。 ⑥ 引物 5`末端堿基可不與模板 DNA匹配 ， 可添加與模板無(wú)關(guān)的序列 (如限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列 、 ATG起始密碼子或啟動(dòng)子序列等 )， 便于克隆和表達(dá) ， 但其保護(hù)堿基有一定的要求 。 （ 1）變性 使雙鏈 DNA解鏈為單鏈 ,95℃ 3～ 5分鐘 (2) 退火 溫度由引物長(zhǎng)度和 GC含量決定 , 適宜的退火溫度大約低于引物 Tm值 4555℃ ，介于 4555℃ 。降低溫度可增加反應(yīng)的靈敏性。 ⑵ 基因表達(dá)：用 RTPCR檢測(cè)某一特定基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)。 ⑵ 遺傳病相關(guān)基因檢測(cè)：鐮刀型細(xì)胞貧血、血友病。 3. 法醫(yī)學(xué)中的基因和親子鑒定 4. 考古學(xué)中生物種類間的親緣關(guān)系、進(jìn)化途徑判定 5. 基因動(dòng)、植物的檢測(cè) ⑴ 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的檢測(cè)：檢測(cè)某一基因的遺傳穩(wěn)定性。
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