[醫(yī)藥]氯化鈣法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞(編輯修改稿)
2024-09-17 14:08 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 TFB代替氯化鈣可得到相同的或更好的結(jié)果。６）于４℃以4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，以回收細(xì)胞。７）倒出培養(yǎng)液，將管倒置１分鐘以使最后殘留的痕量培養(yǎng)液流盡。８）。此時(shí)，可將細(xì)胞分成小份，放于70℃凍存[加DMSO保存感受態(tài)細(xì)胞的方法與步驟：每4ml感受態(tài)細(xì)胞加0。75mlDMSO冰上放置10min再分裝放入70℃冰箱]。在這些條件下，盡管長期保存后轉(zhuǎn)化效率會稍有下降，但細(xì)胞仍可保持處于感受態(tài)。Dagert和Ehrlich(1979)曾表明細(xì)胞可以于４℃在CaCl2溶液中保存2448小時(shí)，在貯存的最初1224小時(shí)內(nèi)，轉(zhuǎn)化效率增加３－５倍，然后降低到初始水平。９）用冷卻的無菌吸頭從每種感受態(tài)細(xì)胞懸液中各取200μl轉(zhuǎn)移到無菌的微量離心管中，每管加ＤＮＡ（體積∞10μl,ＤＮＡ∞50ng），輕輕旋轉(zhuǎn)以混勻內(nèi)容物，在冰中放置30分鐘。
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