第七章食品中常見(jiàn)病原菌微生物檢驗(yàn)技術(shù)(編輯修改稿)
2025-09-11 23:05 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 BP平板 ） 、 血平板 、 血漿凝固酶試驗(yàn) ? 多數(shù)產(chǎn)腸毒素的菌株在 血瓊脂平板上能形成溶血圈 ， 并能 產(chǎn)生血漿凝固酶 ， 這些是鑒定致病性金黃色葡萄球菌的 重要指標(biāo) 。 四、操作方法 ? ? （ 1）檢樣處理 將 25g（ mL）檢樣加于 225mL滅菌生理鹽水中的滅菌器內(nèi)，制成 1： 10檢樣混懸液。 ? （ 2）增菌培養(yǎng) 吸取液體檢樣 5ml，接種于 50mL7． 5％氯化鈉肉湯 50ml進(jìn)行增菌。 ? （ 3）分離培養(yǎng) 將上述培養(yǎng)物，分別劃線接種到 BairdParker 平板和血平板。 ? 血平板 36 ℃ 177。 1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。 ? BairdParker 平板 36 ℃ 177。 1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h 或 45 h～ 48 h。 ? （ 4）觀察菌落形態(tài) ? BairdParker 平板、血平板上挑取可疑菌落。 ? 金黃色葡萄球菌在 BairdParker 平板上，菌落直徑為 2 mm～ 3 mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為 淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣的硬度，偶然會(huì)遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無(wú)混濁帶及透明圈。 ? 在血平板上，形成菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤(rùn)、 金黃色（有時(shí)為白色），菌落周圍可見(jiàn)完全透明溶血圈。 BP平板 Baird－ Parker(BP培養(yǎng)基 /貝爾德帕克平板 ) 用于凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌的分離和菌落計(jì)數(shù)用 。 ￥ 7（ 90mm) ? 血平板 ：金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生溶血素，因此在血平板上產(chǎn)生明顯的溶血環(huán)。 ? 血平板上其 典型菌落 呈金黃色，有時(shí)也為白色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血圈。 血平板 ? （ 5）革蘭氏染色鏡檢 ? （ 6）血漿凝固酶試驗(yàn) ? 挑取 BairdParker 平板或血平板上可疑菌落 1 個(gè)或以上，分別接種到 5 mL BHI 和營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面， 36 ℃ 177。 1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。 取新鮮配置兔血漿 mL，放入小試管中，再加入 BHI 培養(yǎng)物 mL～ mL，振蕩搖勻，置 36 ℃ 177。 1 ℃ 溫箱或水浴箱內(nèi)，每半小時(shí)觀察一次，觀察 6 h，如呈現(xiàn)凝固（即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，被判定為陽(yáng)性結(jié)果。同時(shí)以血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性和陰性葡萄球菌菌株的肉湯培養(yǎng)物作為對(duì)照。 ? 也可用商品化的試劑，按說(shuō)明書操作，進(jìn)行血漿凝固酶試驗(yàn)。結(jié)果如可疑，挑取營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面的菌落到 5 mL BHI， 36 ℃ 177。 1 ℃培養(yǎng) 18 h～ 48 h，重復(fù)試驗(yàn)。 檢測(cè)步驟 鑒定 ? 金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生 凝固酶 ，因此對(duì)其鑒別的主要實(shí)驗(yàn)是測(cè)定其凝固酶。 ? 對(duì)于凝固不完全的菌株，可以通過(guò)一些其他實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步 確認(rèn) ，例如：厭氧葡萄糖發(fā)酵、溶葡萄球菌酶敏感性實(shí)驗(yàn)、耐熱核酸酶實(shí)驗(yàn)等。 ? 所有這些實(shí)驗(yàn)不能作為鑒別其產(chǎn)毒與否的依據(jù)。 血漿凝固酶試驗(yàn)： 吸取 1:4新鮮兔血漿 mL，放入小試管中，再加入培養(yǎng) 24 h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養(yǎng)物 mL，振蕩搖勻，置 36177。 1℃ 溫箱或水浴內(nèi)，每半小時(shí)觀察一次，觀察 6 h，如呈現(xiàn) 凝塊 ,即將試管倒置或 傾斜時(shí)，呈現(xiàn)凝塊者，被認(rèn)為陽(yáng)性結(jié)果。同時(shí)以已知陽(yáng)性和陰性葡萄球菌株及肉湯作為對(duì)照。 ? 【方法】 ? （ 1）玻片法 ? （ 2）試管法 ? 【結(jié)果判斷】 ? （ 1）玻片法： 5～ 10s內(nèi)出現(xiàn)凝集者為陽(yáng)性。 ? （ 2）試管法：如有凝塊或整管凝集出現(xiàn)為陽(yáng)性。 4h后無(wú)上述現(xiàn)象出現(xiàn)，則放置過(guò)夜后再觀察。 ? 【應(yīng)用】 ? 本試驗(yàn)僅用于致病性葡萄球菌的鑒定。 一、動(dòng)物學(xué)試驗(yàn) 主要用幼貓和猴。 二、血清學(xué)試驗(yàn) 腸毒素作為抗原，可以和特異性抗體發(fā)生結(jié)合性反應(yīng)，產(chǎn)生可見(jiàn)沉淀 用血清學(xué)反應(yīng)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌腸毒素方法主要有： 金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測(cè) 對(duì)分型進(jìn)行簡(jiǎn)單的了解。 １、血清學(xué)分型： 金黃色葡萄球菌水解，獲得兩種抗原成分：蛋白抗原
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