組培實(shí)驗(yàn)外植體選擇處理及接種培養(yǎng)(編輯修改稿)
2024-09-01 11:07 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 抽的嫩枝條作為外植體接種。這樣便可大大減少材料的污染。 或在無(wú)菌條件下對(duì)采自田間的枝條進(jìn)行暗培養(yǎng)，待抽出徒長(zhǎng)的黃化枝條時(shí)采枝，經(jīng)滅菌后接種也可明顯減少污染。 ②選擇合適的時(shí)間去田間采取外植體 ? 避免陰雨天去田間采取外植體。 ? 在晴天采取外植體時(shí)，下午采取的外植體要比早晨采的污染少，因材料經(jīng)過(guò)日曬后可殺死部分細(xì)菌或真菌。 ? 目前對(duì)材料內(nèi)部污染還沒(méi)有令人滿意的滅菌方法 。在菌類(lèi)長(zhǎng)入組織內(nèi)部時(shí) ， 要?jiǎng)內(nèi)ド夏晟镊[片 ，甚至要除去韌皮組織 ， 只接種內(nèi)部的分生組織 ，以收到一定的防污染效果 。 （ 2）外植體的滅菌 ①多次滅菌法：一是 將 切好的外植體放入 %的次氯酸鹽溶液中消毒 2030min； 二是 在無(wú)菌蒸餾水中沖洗 3次； 三是 將材料封閉在無(wú)菌的培養(yǎng)皿中過(guò)夜，保持一定溫度； 四是 第二天再將外植體用 %次氯酸鈉滅菌 2030min，然后用蒸餾水洗 3次。 對(duì)層積過(guò)的種子可用多次滅菌法 ，在種子吸脹前后都要滅菌。 ② 對(duì)易污染而難滅菌的材料用多種藥液交替浸泡消毒： ? 一是將外植體用洗滌液充分洗凈并修整干凈； ? 二是將材料放入 75%灑精中滅菌 3060s； ? 三是在 1： 500的 Roccal B（ 一種商品滅菌劑名 ） 稀釋液中浸 5min； ? 四是在 %次氯酸鈉溶液中滅菌 20—30min； ? 五是用無(wú)菌水沖洗 5次 ， 或放入無(wú)菌的 （ HCl）中浸 1520s， 再用無(wú)菌水沖洗數(shù)次 。 （ 3）玻璃器皿的滅菌 ? 濕熱滅菌法 —— 即將玻璃器皿包扎后置入蒸汽滅菌鍋中進(jìn)行高溫高壓滅菌，滅菌時(shí)間可延長(zhǎng)達(dá) 25min— 30min。 ? 干熱滅菌法 —— 即將玻璃器皿置入電熱烘箱中進(jìn)行滅菌。 ? 煮沸滅菌 —— 即將玻璃器皿放入水中煮沸進(jìn)行滅菌。 （ 4）金屬器械的滅菌 火焰滅菌法 ：即把金屬器械放在 95%的酒 精中浸一下 ， 然后放在火焰上燃燒滅菌 。 這一步驟應(yīng)當(dāng)在無(wú)菌操作過(guò)程中反復(fù)進(jìn) 行。 干熱滅菌法 ：即將拭凈或烘干的金屬器械用 紙包好，盛在金屬盒內(nèi)，放在烘箱中滅菌。 ? （ 5） 布質(zhì)制品的滅菌 ? 濕熱滅菌法：工作服、口
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