免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)(編輯修改稿)
2025-09-01 03:17 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 形成 AgAb1Ab2﹡E Ab3﹡E 復(fù)合物 （三）方法評(píng)價(jià) 人民衛(wèi)生出版社 三、非標(biāo)記抗體酶免疫組化染色法 （一）原理 該技術(shù)首先用酶免疫動(dòng)物，制備效價(jià)高、特異性強(qiáng)的抗酶抗體（ Ab3），將酶與 Ab3結(jié)合形成復(fù)合物，然后利用第二抗體（ Ab2）作橋， Ab2既可與 Ab3的 Fc段結(jié)合，又可與結(jié)合在組織抗原上的第一抗體（ Ab1）的 Fc段結(jié)合，經(jīng)酶催化底物的顯色反應(yīng)，達(dá)到對(duì)抗原的檢測(cè)。 人民衛(wèi)生出版社 （二）技術(shù)類型 用辣根過(guò)氧化物酶（ HRP）免疫動(dòng)物（如兔）制備抗 HRP的抗體（ Ab3），經(jīng) Ab2（如羊抗兔）作橋，將結(jié)合在組織抗原上的 Ab1(兔抗相應(yīng)組織抗原的抗體 )與 Ab3連接起來(lái)，最后將 HRP與 Ab3結(jié)合形成 AgAb1Ab2Ab3HRP復(fù)合物，加底物顯色 人民衛(wèi)生出版社 人民衛(wèi)生出版社 ? 即過(guò)氧化物酶（ P） 抗過(guò)氧化物酶（ AP）法，為酶橋法的改良，技術(shù)要點(diǎn)基本上與酶橋法相同，但該法將抗酶抗體（抗過(guò)氧化物酶（ AP））與酶（過(guò)氧化物酶（ P））制成了可溶性復(fù)合物（ PAP） ,該復(fù)合物由 2個(gè)抗酶抗體和 3個(gè)過(guò)氧化物酶分子組成，呈五角形，非常穩(wěn)定。 ? 通過(guò)橋抗體（ Ab2）將特異性識(shí)別組織抗原的抗體（ Ab1）與 PAP復(fù)合物的抗酶抗體連接起來(lái) 人民衛(wèi)生出版社 人民衛(wèi)生出版社 人民衛(wèi)生出版社 PAP法 該法是 PAP法的改良，通過(guò)兩次連接橋抗體和 PAP，形成 AgAb1Ab2PAPAb2PAP復(fù)合物，在抗原抗體復(fù)合物上結(jié)合了比 PAP法更多的酶分子，大大增強(qiáng)了方法的敏感性。 APAAP法就是以堿性磷酸酶代替 HRP建立的堿性磷酸酶（ AP） 抗堿性磷酸酶（ AAP）法，簡(jiǎn)稱 APAAP法。技術(shù)要點(diǎn)與 PAP法相似。 人民衛(wèi)生出版社 （三）方法評(píng)價(jià) 該技術(shù)既可檢測(cè)抗原，又可檢測(cè)抗體。由于酶不是標(biāo)記在抗體上，而是經(jīng)抗原（酶）抗體反應(yīng)與抗酶抗體結(jié)合，避免了酶標(biāo)抗體的缺點(diǎn)，提高了方法的敏感性。尤其是雙橋PAP法，是當(dāng)今免疫組化技術(shù)中敏感性較高的方法。 人民衛(wèi)生出版社 四、臨床應(yīng)用 ? 酶免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)主要用于組織切片或其它抗原的定性、定位、定量檢測(cè)。組織切片中各類抗原性物質(zhì)，如各類蛋白質(zhì)、酶、激素、細(xì)胞、病毒、腫瘤抗原、漿細(xì)胞中的免疫球蛋白、各種多肽、細(xì)胞表面標(biāo)志等均可檢測(cè)。 人民衛(wèi)生出版社 第三節(jié) 熒光免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) ? 利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先用熒光素標(biāo)記已知抗體并以此作為探針，檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后，即會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光，進(jìn)而對(duì)組織中的某種抗原進(jìn)行定性、定位和定量分析 。 人民衛(wèi)生出版社 一、標(biāo)本制作 ? 常見(jiàn)的臨床標(biāo)本材料主要有組織、細(xì)胞和細(xì)菌三大類，按不同標(biāo)本性質(zhì)可制作涂片、印片或組織切片等。 （一）載玻片和蓋玻片的處理 載玻片和蓋玻片要厚薄均勻、潔凈及透光性好 人民衛(wèi)生出版社 （二）制片 1．組織切片 組織材料可制備成冰凍切片或石蠟切片。 2．印片 組織材料也可制成印片。 3．涂片 細(xì)胞或細(xì)菌要制成涂片，涂片應(yīng)薄且均勻。 人民衛(wèi)生出版社 （三）標(biāo)本的固定 主要目的是： 。除活細(xì)胞
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