鄉(xiāng)鎮(zhèn)檢驗人員培訓(xùn)免疫(編輯修改稿)
2025-02-07 19:58 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 性 。 39 一 ﹑ 抗原 抗體反應(yīng)的特點 抗原 抗體的結(jié)合是 特異性結(jié)合 抗原抗體結(jié)合是分子表面的非共價鍵結(jié)合 抗原抗體反應(yīng)可分為兩個階段 特異性結(jié)合階段 可見的反應(yīng)階段 抗原和抗體結(jié)合是否呈現(xiàn)可見的反應(yīng)現(xiàn) 象，于兩者的分子 比例 密切相關(guān) 40 抗原抗體比例對反應(yīng)現(xiàn)象的影響 41 42 二 ﹑ 抗原 抗體反應(yīng)受多種因素影響 ? 1 電解質(zhì) ：抗原 抗體反應(yīng)通常應(yīng)用%的氯化鈉作為稀釋液 ，以供給適應(yīng)濃度的電解質(zhì)。 ? 2 溫度 ：一般常使用反應(yīng)在 37度水浴 或孵育箱中進行。 ? ：抗原 抗體反應(yīng)適應(yīng)的酸堿度 為 PH68。 ? 43 第二節(jié) 抗原抗體的檢測方法 ? 凝集反應(yīng) ? 沉淀反應(yīng) ? 補體溶血反應(yīng)和補體結(jié)合反應(yīng) ? 中和反應(yīng) ? 用標(biāo)記抗體或抗原進行的抗原抗體反應(yīng) 44 一 .凝集反應(yīng) (Agglutination) ? 細菌、紅細胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成凝集 現(xiàn)象，稱為 凝聚反應(yīng) 。 ? (1)、直接凝集：將細菌或紅細胞與相應(yīng)的抗體直接反應(yīng)，出現(xiàn)細菌凝集或紅細胞凝集現(xiàn)象。又分為玻片法和試管法。 ? (2)、間接凝集：將可溶性抗原包被在紅細胞或乳膠顆粒表面，與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)顆粒凝集現(xiàn)象 。 45 血 球 凝 集 46 47 二 .沉淀反應(yīng) （ Precipitation) 血清蛋白質(zhì)、細胞裂解液或組織浸液等 可溶性抗原 與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)沉淀物，這一類反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)。沉淀反應(yīng)可在液體中進行，如絮狀沉淀。大多沉淀反應(yīng)是用半固體瓊脂凝膠為介質(zhì)，進行瓊脂擴散故也稱免疫擴散。 48 49 50 51 52 三 .免疫標(biāo)記技術(shù) ? 用熒光素、同位素或酶等示蹤物質(zhì) 標(biāo)記抗體（或抗原）進行抗原 抗體反應(yīng)。標(biāo)記物質(zhì)與抗體（或抗原）的化學(xué)連接未改變抗體（或抗原）的免疫學(xué)特性，同時標(biāo)記物的性質(zhì)依然存在，因而極大的提高了反應(yīng)的靈敏度，可以對微量物質(zhì)進行定量、定性或定位檢測。免疫標(biāo)記技術(shù)主要有 四種基本類型： 免疫熒光技術(shù)、 免疫膠體金標(biāo)記技術(shù) 、免疫酶技術(shù)和同位素標(biāo)記技術(shù)。 53 ? 用 熒光素 （常用的有異硫氰酸熒光素），與抗體連接成熒光抗體，再與待測標(biāo)本的抗原反應(yīng)，置熒光顯微鏡下觀察，抗原抗體復(fù)合物散發(fā)出熒光，借此對標(biāo)本中的抗原作鑒定和定位。 ? 包括直接熒光法、間接熒光法和補體法。 54 間接免疫熒光法示意圖 55 56 ? 用熒光抗體示蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光抗原標(biāo)記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法稱熒光抗原法。因為熒光色素不但能與抗體球蛋白結(jié)合，用于檢測或定位各種抗原，也可以與其他蛋白質(zhì)結(jié)合，用于檢測或定位抗體，但是在實際工作中熒光抗原技術(shù)很少應(yīng)用，所以人們習(xí)慣稱為熒光抗體技術(shù)，或稱為免疫熒光技術(shù)。 57 （ 1）時間分辨熒光免疫技術(shù) ? 原理： TRFIA 是用三價稀土離子及其螯合劑作為示蹤物，如銪（ Eu3+) 來標(biāo)記抗體、抗原，待反應(yīng)體系發(fā)生后，用時間分辨熒光儀測定最后產(chǎn)物中的熒光強度，根據(jù)熒光強度和相對熒光強度比值，判斷反應(yīng)體系中分析物的濃度，達到定量分析的目的。 58 ? 優(yōu)點： 技術(shù)集酶標(biāo)記、同位素標(biāo)記技術(shù)的優(yōu)點于一身，具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好、標(biāo)記物制備簡便、儲存時間長、無放射性污染、檢測重復(fù)性好、操作流程短、標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍寬和應(yīng)用范圍廣泛等優(yōu)點， 59 ? 注意： 所用試劑和器材務(wù)必防塵； ? Eu3+標(biāo)記物的溶解和稀釋必須盡 ? 量準(zhǔn)確，務(wù)必在加樣 1小時內(nèi)配制。 60 （ 2）電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù) ? 原理： 電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)是繼放射免疫分析法、酶免疫分析法、熒光免疫分析法、化學(xué)發(fā)光免疫分析法后的最先進的免疫分析方法。電化學(xué)發(fā)光（ ECL）是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，實際上包括了電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個過程。直接以 [Ru(bpy)3]2+標(biāo)記抗體，反應(yīng)時標(biāo)記物直接發(fā)光。且 [Ru(bpy)3]2+在電極表面的反應(yīng)過程可以周而復(fù)始進行，產(chǎn)生許多光子，使光信號得以增強。 61 ? 優(yōu)點： 非放射性標(biāo)記物避免了放射性核素的污染；磁性微粒（ ）為固相載體表面積大，吸附率高，近似均相免疫反應(yīng)； 鏈霉親和素與生物素是最特異及牢固的結(jié)合；應(yīng)用范圍廣；檢測敏感度高；檢測所需樣本量少。 62 (Enzyme Immunoassay, EIA) ? 是用 酶 （常用的有辣根過氧化物酶 HRP和堿性磷酸酶 AP) 標(biāo)記的抗體進行的抗原抗體反應(yīng)。 EIA將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過酶作用于底物后顯色來判定結(jié)果。常用的方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗和酶免疫組化法，前者測定可溶性抗原或抗體，后者測定組織或細胞表面的抗原 。 63 (1).酶聯(lián)免疫吸附試驗 (ELISA) ? 將已知的抗原或抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯微量反應(yīng)板）表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行。用洗滌法將液相中游離成分洗除。主要有雙抗體夾心法、間接法BASELISA等。 (2) ELISA方法有 : / 抗原 夾心法 測抗原 / 抗體 : 包被在固相載體上的抗體 / 抗原與加入的待測抗原 / 抗體及酶標(biāo)抗體 / 抗原三者在一定條件下進行溫育反應(yīng)，若待測樣本中含有特異性抗原 / 抗體，則在孔內(nèi)形成
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