雜交中稻廣兩優(yōu)476品種與純度的鑒定(編輯修改稿)
2025-08-31 16:23 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 定的標(biāo)記。１ 材料與方法１．１ 材料武育粳３號(hào)、黃華占、ｒ８３８、ⅱ－３２ｂ、揚(yáng)稻６號(hào)、廣占６３ｓ、ｒ４７６、廣兩優(yōu)４７６以及ｉｒｂｂ２１、ｂ５。含抗白葉枯病基因ｘａ２１品系ｉｒｂｂ２１來(lái)自國(guó)際水稻研究所，抗褐飛虱基因ｂｐｈ１４和ｂｐｈ１５品系ｂ５由武漢大學(xué)何光存教授提供，其他材料來(lái)自湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所分子育種課題組。１．２ 方法１．２．１ 水稻ｄｎａ的提取 將種子置于發(fā)芽盒內(nèi)發(fā)芽，芽長(zhǎng)３ ｃｍ左右時(shí)剪取葉片，參照李進(jìn)波等［５］改良的ｃｔａｂ法提?。洌睿?。１．２．２ ｐｃｒ反應(yīng)體系 ｐｃｒ反應(yīng)體系為１５ μｌ，含有１０ ｍｍｏｌ／ｌ ｔｒｉｓ－ｈｃｌ（ｐｈ ８．３），５０ ｍｍｏｌ／ｌ ｋｃｌ，１．５ ｍｍｏｌ／ｌ ｍｇｃｌ２，ｄｎｔｐｓ各０．２ ｍｍｏｌ／ｌ，１０ ｎｇ左右的ｄｎａ模板，引物各０．２ μｍｏｌ／ｌ，ｔａｑ酶１ ｕ。反應(yīng)程序?yàn)椋海梗?℃預(yù)變性５ ｍｉｎ；９４ ℃、３０ ｓ，55 ℃、３０ ｓ，７２ ℃、１ ｍｉｎ，35個(gè)循環(huán)；７２ ℃延伸５ ｍｉｎ，４ ℃保存。反應(yīng)在ａｂｉ公司９７００熱循環(huán)儀中進(jìn)行。所有試劑均購(gòu)自寶生物工程（大連）有限公司。１．２．３ pcr產(chǎn)物的檢測(cè) pcr產(chǎn)物使用６％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)，具體方法為取混合有染料指示劑的擴(kuò)增產(chǎn)物２ μｌ加樣于６％的非變性聚丙烯酰胺凝膠中，以１ｔｂｅ作電泳緩沖液，３００ ｖ恒壓電泳，電泳在雙板夾芯式電泳槽（北京六一儀器廠）上進(jìn)行，根據(jù)染料指示劑的位置終止電泳。電泳后快速銀染，結(jié)果拍照保存。銀染顯色參照ｓａｎｇｕｉｎｅｔｔｉ等［６］的方法略作改進(jìn)，方法如下：凝膠經(jīng)去離子水漂洗２次后在１ g/l ａｇｎｏ３中染色５～１０ ｍｉｎ，去離子水漂洗２次后，在15 g/l ｎａｏｈ＋5 ml/l甲醛中顯色，最后用去離子水漂洗１次。對(duì)于篩選得到的在雙親之間差異較大的pcr產(chǎn)物，改用２％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。２ 結(jié)果與分析２．１ dna指紋圖譜的構(gòu)建對(duì)當(dāng)前育種工作中常用的７個(gè)親本材料使用２４對(duì)引物進(jìn)行ｐｃｒ擴(kuò)增，均可以擴(kuò)增出穩(wěn)定的條帶（表1）。其中標(biāo)記ｒｍ２０８、ｒｍ２７３、ｒｍ３３６和ｒｍ７２的引物在不同親本間擴(kuò)增出的帶型最少，為２種；標(biāo)記ｒｍ２２４的引物擴(kuò)增出的帶型最多，為６種?？梢钥闯鲞@２４對(duì)引物較好地表現(xiàn)出了親本材料的遺傳多樣性。２．２ ｓｓｒ標(biāo)記的篩選結(jié)果使用農(nóng)業(yè)部ｎｙ／ｔ １４３３—２００７推薦的２４對(duì)引物對(duì)ｒ４７６、廣占６３ｓ、廣兩優(yōu)４７６和其他育種常用親本進(jìn)行了ｐｃｒ擴(kuò)增。pcr產(chǎn)物使用６％非變性聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)標(biāo)記ｒｍ２０９和ｒｍ１７的引物在廣兩優(yōu)４７６中擴(kuò)增出的條帶都涵蓋了父本r476和母本廣占63s擴(kuò)增的條帶（圖１、圖２）。２．３ 引物的pcr
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