cell-培養(yǎng)用液(編輯修改稿)
2024-08-31 13:25 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 細胞懸液加基礎培養(yǎng)基至 20ml，即 100個細胞 /20毫升 =5個細胞 /毫升 =1個 /200ul 倒置顯微鏡觀察，標記含單個細胞的板孔 稀 釋 （ 3）吹打 混勻細胞懸液 加入 96孔板 倒置顯微鏡觀察 標記出單個細胞的板孔 繼續(xù)培養(yǎng) 每周觀察一次 三周后長出集落，每天觀察一次 計算出克隆形成百分率。 實驗歷時一個月！ 注意：選擇容易形成克隆的細胞進行實驗 （原代細胞不行）！ 1） 使用前的處理：熱滅活，條件： 56℃ ， 30min 目的：除去血清中補體成分，避免補體毒害細胞 注意： 血清很珍貴，每次滅活一小瓶 。 同時使用三個溫度計，不要使用溫差大的溫度計 。 熱滅活針對補體、支原體及病毒等對熱敏感的微生物，但不保證所有的微生物滅活后都死掉。 2） 儲存條件 : 20℃ ，避免反復凍融，分裝使用溶解時先放 4 ℃ ，完全溶解搖勻后再使用。 3）使用濃度（回憶生長液，維持液？） ◎ 疫苗的滅活 : 一種被殺死的病毒 ,將其輸入人體內(nèi)后既不會使人染病 ,又可以促使人產(chǎn)生抗體抵御病毒的入侵 . ◎微生物的滅活 : 使微生物喪失活性 . ◎血清的滅活 : 除去血清中的補體成分 ,避免對細胞產(chǎn)生毒害作用 鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基，它具有促進體外培養(yǎng)細胞（特別是上皮細胞）貼壁的作用，同時它也是一種天然的黏附劑。培養(yǎng)不好養(yǎng)的細胞時用。 制備鼠尾膠原： 取大鼠尾巴洗凈， 75%酒精浸泡 5分鐘； 手持尾巴，用止血鉗夾住鼠尾的尖端，折斷尾骨后拉出尾腱； 將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡； 重復步驟 3，直至尾腱量夠用； 吸去生理鹽水，將尾腱稱重（ ）； 將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中； 按每克尾腱 50ml的比例，加入 %醋酸溶液； 搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中， 4℃ 放置一星期； 離心， 4000轉(zhuǎn) /分， 1015分鐘； 吸取上清，分裝成小瓶， 4℃ 保存。 含有鼠尾膠原的培養(yǎng)基 在鼠尾膠原中生長的 PC12 細胞 （三）合成培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基又稱為基本培養(yǎng)基； 加入血清后叫做完全培養(yǎng)基。 液體培養(yǎng)基 干粉培養(yǎng)基 基本培養(yǎng)基的組分 最初的 199培養(yǎng)基 共有 60種物質(zhì) 。 低限量基礎培養(yǎng)基 （ minimum essential media, MEM) 含有 20多種物質(zhì) (分四大類 ): 無機鹽 ,氨基酸 ,維生素 ,碳水化合物 . 酚紅 ,一種 PH指示劑 . 常用培養(yǎng)基 RPMI1640,EMEM等都是 30多種成分 ,添加了非必需氨基酸和維生素 . 配制干粉培養(yǎng)基的注意事項： （ 1）認真閱讀說明書 ,看清未添加的成分 。 （ 2）谷氨酰胺 ,NaHCO3在培養(yǎng)基完全溶解后才能添加 。 （ 3）若干粉培養(yǎng)基中含有谷氨酰
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