細胞培養(yǎng)技術(shù)入門(編輯修改稿)
2024-12-17 05:45 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 菌。 。青霉素是 80 萬單位 /瓶，用注射器加 4ml 滅菌雙蒸水。鏈霉素是 100 萬單位 /瓶，加 5ml 滅菌雙蒸水，即每毫升各為 20萬單位。 ，使青鏈霉素的濃度最終為 100 單位 /ml。 1 單位＝ 1 微克？ 五 .RPMI1640 的制備與消毒： 、調(diào) PH 值、定容：先將培養(yǎng)基粉劑加入培養(yǎng)液體積 2/3 的雙蒸水中 ,并用雙蒸水沖洗包裝袋 23 次 (沖洗液一并加入培養(yǎng)基中 ),充分攪拌至粉劑全部溶解 ,并按照包裝說明添加一定的藥品 .然后用注射器向培養(yǎng)基中加入配制好的青鏈霉素液各 , 使青鏈霉素的濃度最終各為 100 單位 /ml。然后用一個當量的鹽酸和 NaOH 調(diào) PH到 左右。最后定容至 1000ml，搖勻。 ：安裝時先裝好支架，按規(guī)定放好濾膜，用螺絲將不銹鋼濾器和支架連接好。然后卸下支架腿分別用布包好待消毒。 ：配制好的培養(yǎng)液通常用濾器過濾除菌。通常用蔡式濾器在超凈工作臺內(nèi)過濾。 ：將過濾好的培養(yǎng)液分裝入小瓶內(nèi)置于 4℃ 冰箱內(nèi)待用。 100ml培養(yǎng)液中加入 1ml 谷氨酰胺溶液（ 4℃ 時兩周 有效）。 六．血清的滅火： 細胞培養(yǎng)常用的是小牛血清，新買來的血清要在 56℃ 水浴中滅火 30 分鐘后，再經(jīng)過抽濾方可加入培養(yǎng)基中使用。 七 .HEPES 溶液： HEPES 的化學全稱位羥乙基呱嗪乙硫磺酸（ N’ ahydroxythylpiperazineN’ ethanesulfanic acid ）。對細胞無毒性作用。它是一種氫離子緩沖劑，能較長時間控制恒定的 pH 范圍。使用終濃度為 1050mmol/L，一般培養(yǎng)液內(nèi)含 20mmol/LHEPES 即可達到緩沖能力。 1mol/L HEPE 緩沖液配制方法如下： 準確稱取 HEPTS ，加入新鮮三蒸水定容至 1L。過濾除菌，分裝后 4℃ 保存。 注意：因為現(xiàn)在市售 HEPES 為約 10g 包裝的小瓶，所以可根據(jù)實際情況靈活配制，但是要保證培養(yǎng)液內(nèi) HEPES的終濃度仍然為 20m mol/L 。如：稱取 克 HEPES 溶于 20ml 三蒸水中，過濾除菌后可完全（ 20ml）加入 1L 培養(yǎng)液中，或者每 100ml 培養(yǎng)液中加入 2ml 即可。 八 .谷氨酰胺： 合成培養(yǎng)基中都含有較大量的谷氨酰胺，其作用非常重要，細胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白質(zhì)，谷氨酰胺缺乏要導致細胞生長不良甚至死亡。在配制各種培養(yǎng)液中都應該補加一定量的谷氨酰胺。由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定， 4℃ 下放置 1 周可分解 50％，故應單獨配制，置于 20℃ 冰箱中保存，用前加入培養(yǎng)液。加有谷氨酰胺的培養(yǎng)液在 4℃ 冰箱中儲存 2 周以上時，應重新加入原來的谷氨酰胺。一般培養(yǎng)液中谷氨酰胺的含量為 1～ 4mmol/L?？梢耘渲?200mmol/L 谷氨酰胺液貯存，用時加入培養(yǎng)液。配制方法為，谷氨酰胺 溶于三蒸水加至 100ml 即配成 200mmol/L 的溶液，充分攪拌溶解后，過濾除菌，分裝小瓶， 20℃保存，使用時可向 100ml 培養(yǎng)液中加入 1ml 谷氨酰胺溶液。 九 .肝素溶液的配制： 含有肝素的培養(yǎng)液可以使內(nèi)皮細胞純度提高，肝素加入全培養(yǎng)液中最終濃度為 50ug/ml。因為現(xiàn)在市售的多為肝素鈉，包裝為約為 克 /瓶，配制時，可將其溶于 100ml 三蒸水中，定容，過夜，然后過濾除菌，分裝小瓶，保存溫度為 ℃ 。使用時，向 100ml 培養(yǎng)液中加入 1ml（精確可加入 ）即可。 十 . Ⅰ 型膠原酶： ％ Ⅰ 型膠原酶溶液同胰蛋白 酶一樣配制和消毒滅菌。注意：因為 Ⅰ 型膠原酶分子顆粒比胰酶大，不容易過濾，因此可以用蔡式濾器過濾除菌。分裝入 10ml 小瓶 20℃ 保存。 十一 .明膠溶液： 因為明膠難于過濾，所以配制 ％明膠溶液必須用無菌的 PBS 配制。所以制備過程中必須要注意無菌操作。首
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