【文章內(nèi)容簡介】 臟激素調(diào)節(jié)蛋白的表達變化，發(fā)現(xiàn)主要尿蛋白系列、碳酸酐酶Ⅲ、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶P2三個受雄激素調(diào)控的蛋白質(zhì)在高膽固醇小鼠肝臟的表達都下調(diào)。進一步給小鼠肌肉注射人絨毛膜促性腺激素，發(fā)現(xiàn)高膽固醇血癥小鼠血清、睪丸和肝臟里這三個蛋白表達量均降低，提示飲食引起的高膽固醇血癥可能導致雄激素缺陷，而雄激素缺陷也可能參與動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展(J Nanosci Nanotechnol 2005,5:1273–1276)。在小規(guī)模的臨床流行病學觀察中也發(fā)現(xiàn)男性動脈粥樣硬化發(fā)病與低血清雄激素水平相關(guān)。(2)脂蛋白脂酶（LPL）為早期動脈粥樣硬化病變的起始因素之一建立家兔血管內(nèi)皮的球囊損傷模型，在模型動物動脈壁上高表達活性型和非活性型LPL，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩種LPL均具有明顯促進脂質(zhì)沉積的作用，為早期動脈粥樣硬化病變的起始因素之一。該工作論文被Atherosclerosis雜志接受待發(fā)表。(3)血流動力學因素在動脈粥樣硬化發(fā)生過程中可能起著更重要的作用利用成功建立的、兔動脈靜脈互換移植合并高脂飲食的速發(fā)型動脈粥樣硬化模型，觀察了各種因素對動脈粥樣硬化易感性的影響：結(jié)果發(fā)現(xiàn)，自體靜脈移植后，可以模擬冠脈搭橋后血管壁的重構(gòu)；血管移植合并高脂飲食后對高脂誘導動脈硬化的易感性高于對照血管，易發(fā)生不穩(wěn)定斑塊；移植動脈與對照動脈均發(fā)生了適應性重塑，細胞的凋亡和MMPs參與了血管的重塑；動脈移植于靜脈后，其結(jié)構(gòu)逐漸發(fā)生靜脈化，對動脈硬化的易感性明顯低于對照動脈。結(jié)果表明血流動力學與高脂血癥兩個因素中，前者在動脈粥樣硬化發(fā)生的過程中可能起著更重要的作用（Atherosclerosis 2004,117: 3741）。（4）LOX1在內(nèi)皮和新生內(nèi)膜的表達可能是動脈粥樣硬化形成的早期事件，低劑量的洛沙坦可以抑制動脈粥樣硬化的發(fā)生將兔左側(cè)頸外靜脈移植到頸總動脈，結(jié)合高脂飼料喂養(yǎng)可成功建立兔自體靜脈移植物粥樣硬化模型，利用模型發(fā)現(xiàn)：1）在兔自體靜脈移植物的內(nèi)皮和新生內(nèi)膜表面也有氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)受體1（LOX1）的表達，LOX1的表達和內(nèi)膜厚度顯著正相關(guān)；（2）高膽固醇血癥引起的靜脈移植物動脈粥樣硬化病變部位LOX1的表達更顯著上調(diào)，LOX1的表達和血清總膽固醇水平也顯著正相關(guān)；（3）在靜脈移植物新生內(nèi)膜和動脈粥樣硬化病灶中，管腔內(nèi)皮細胞和泡沫細胞均表達LOX1，其中表達最強的是在內(nèi)皮細胞。高膽固醇血癥可以通過上調(diào)內(nèi)皮細胞和血管平滑肌細胞LOX1的表達，從而促進靜脈移植物動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。推測LOX1在內(nèi)皮和新生內(nèi)膜的表達可能是動脈粥樣硬化形成的早期事件，并且LOX1介導的內(nèi)皮細胞活化或功能失調(diào)可以存在于非動脈粥樣硬化部位，使這些部位成為易于發(fā)生動脈粥樣硬化的區(qū)域。低劑量的洛沙坦（血管緊張素II的AT1受體阻斷劑）治療在不影響血脂水平的情況下，可以減輕靜脈移植物動脈粥樣硬化的病變程度，抑制泡沫細胞的形成，減小動脈粥樣硬化病灶范圍，縮小斑塊中脂核的面積，降低粥樣斑塊的不穩(wěn)定程度，同時下調(diào)LOX1的表達。說明洛沙坦可能通過下調(diào)LOX1的表達，減少內(nèi)皮細胞、巨噬細胞和血管平滑肌細胞對oxLDL的攝取，從而抑制內(nèi)皮細胞活化和泡沫細胞的形成，進而抑制動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，這可能是血管緊張素II受體阻斷劑抗動脈粥樣硬化的新機制(Atherosclerosis 2004,177: 263268)。(5)感染因素促動脈粥樣硬化的臨床流行病學及發(fā)病機制的研究①感染因子與動脈粥樣硬化發(fā)病關(guān)系的研究：感染因素在我國人群中非常普遍，臨床血清流行病學大樣本人群（上海和江蘇）分析了我國常見病原體巨細胞病毒（HCMV）、幽門螺旋菌、肺炎衣原體（Cpn）、EB病毒、B型柯薩奇病毒、A型流感病毒、B型流感病毒、結(jié)核桿菌及乙肝病毒等多種感染與冠狀動脈粥樣硬化之間的相關(guān)性，并檢測動脈粥樣硬化病變部位各種病原體的相關(guān)抗原及基因表達。結(jié)果提示我國人群的人巨細胞病毒、肺炎衣原體慢性感染與冠狀動脈動脈粥樣硬化發(fā)生率正相關(guān)。在動脈粥樣硬化病人血管組織中分別或同時檢測出了HCMV、即刻早期反應基因（IE）及晚期反應基因（L），多見于血管內(nèi)膜下平滑肌細胞的細胞核；并可檢出肺炎衣原體抗原以及肺炎衣原體外膜蛋白基因。提示HCMV可能參與了動脈粥樣硬化發(fā)生， HCMV基因片段的檢出可能與動脈粥樣硬化的轉(zhuǎn)歸有關(guān)；體外實驗觀察到 HCMV可能通過調(diào)節(jié)內(nèi)皮細胞趨化因子的表達參與動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。人群肺炎衣原體慢性感染及血清C反應蛋白（CRP）水平均與冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生率顯著相關(guān)，其中血清C反應蛋白水平與冠狀動脈粥樣硬化病變程度呈正相關(guān)，而血清肺炎衣原體抗體水平與粥樣硬化的病變程度無相關(guān)。這些結(jié)果提示炎癥反應貫穿于動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的全過程，而感染似乎在動脈粥樣硬化發(fā)病中不起主要的作用，尤其是對動脈粥樣硬化斑塊進展不起重要影響。我們未發(fā)現(xiàn)所觀察的其他病原體（包括國人高感染的乙肝病毒和流感病毒）與我國人群動脈粥樣硬化發(fā)病的相關(guān)性。我們還觀察感染負荷與冠狀動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性及支架內(nèi)再狹窄發(fā)病的關(guān)系，檢測了患者血清巨細胞病毒、幽門螺旋菌、肺炎衣原體、EB病毒、B型柯薩奇病毒、A型流感病毒、B型流感病毒、結(jié)核桿菌抗體IgG/IgA及乙肝病毒表面抗原。結(jié)果顯示冠狀動脈動脈粥樣硬化陽性率隨感染負荷的增加持續(xù)升高，感染負荷與血清炎癥標志物C反應蛋白的水平并不平行，但高C反應蛋白水平組冠狀動脈硬化陽性率隨既往感染微生物數(shù)目的增加而明顯升高，提示高血清C反應蛋白加劇了感染負荷促冠狀動脈動脈粥樣硬化的作用。隨訪感染負荷對放置支架后6個月的再狹窄發(fā)生的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同單個感染原或是感染負荷組患者支架內(nèi)再狹窄率均沒有明顯差別，由此推斷Cpn, CMV, Hp, HSV1, HSV2 和 HBV感染及其負荷對冠狀動脈支架內(nèi)再狹窄發(fā)病沒有明顯影響；而血清C反應蛋白水平與支架內(nèi)內(nèi)膜增厚程度顯著相關(guān)；提示炎癥可能是支架內(nèi)再狹窄的主要原因之一，但感染不是支架內(nèi)再狹窄發(fā)生的重要危險因素，對再狹窄的發(fā)生無預測價值。這是首次用我國人群大樣本資料對心血管學界目前最具爭議問題之一的回答。②感染因素與免疫機制參與動脈粥樣硬化發(fā)病的機理研究：感染因素： 人巨細胞病毒（HCMV）感染內(nèi)皮細胞ECV304發(fā)現(xiàn)單核細胞趨化蛋白1（MCP1）、膜結(jié)合型趨化因子Fractalkine(ＦＫＮ)和炎癥蛋白10（IP10）、升高，而感染的單核細胞（THP1）中的MCP1和生長相關(guān)基因（GRO）的水平均有明顯升高。同時利用MCMV感染的ApoE基因敲除小鼠模型研究發(fā)現(xiàn)，該小鼠在高脂飲食喂養(yǎng)合并感染后動脈粥樣硬化斑塊程度較非感染者更為嚴重，MCMV感染可使炎癥細胞的浸潤增加，促進動脈粥樣硬化的發(fā)生。MCMV感染對照C57BL/6小鼠模型上觀察到高脂、高蛋氨酸飲食與巨細胞病毒感染三種因素復合，不但可以引起C57BL/6小鼠明顯的高脂和高膽固醇血癥，還可以引起主動脈血管炎癥病變、內(nèi)膜增厚和平滑肌細胞增生、排列紊亂以及泡沫細胞出現(xiàn)等動脈粥樣硬化特有病理形態(tài)特征的變化。我們從樹突狀細胞的參與入手研究了動脈粥樣硬化發(fā)病的免疫機制，觀察了炎癥刺激因子糖基化終產(chǎn)物（AGEs）及氧化修飾的低密度脂蛋白（oxLDL）對樹突狀細胞（DCs）免疫功能狀態(tài)的影響，發(fā)現(xiàn)：AGEs促進DCs成熟，可直接通過促進DC釋放炎癥因子，加速和放大炎癥免疫反應，同時能夠上調(diào)DCs SRA和RAGE的表達；而oxLDL亦促進DCs成熟，DCs激活T淋巴細胞的能力也明顯增強，同時 oxLDL可促進DCs分泌多種細胞因子如TNF、ILIL1和IL2等。該發(fā)現(xiàn)為‘樹突狀細胞的參與是動脈粥樣硬化發(fā)生的重要機制’的假說提供了實驗依據(jù)。上述部分工作已分別發(fā)表于J Cardiovasc Pharmacol 2004,44:381385 和被Arterioscler Thromb Vasc Biol雜志已接受待發(fā)表。心肌重塑心肌重塑是心衰發(fā)生的一個決定性機制，防止和逆轉(zhuǎn)重塑是心衰防治的關(guān)鍵所在。心肌重塑發(fā)生和發(fā)展的機制還不完全清楚，已知心肌重塑包括細胞增生、肥大、凋亡、壞死和細胞外基質(zhì)改變等病理變化，這是由一系列復雜的分子和細胞機制導致的心肌結(jié)構(gòu)和功能改變的過程。我們以細胞表型變化作為闡明心肌重塑的切入點。（1）心肌重塑中細胞表型轉(zhuǎn)化調(diào)控機制及其相關(guān)基因功能的研究除血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）外，（chymase）是人左心室AngII形成的主要酶。但有關(guān)研究均來自體外實驗,并且對chymase在心臟中的詳細生物學功能至今尚不清楚。我們在腹主動脈縮窄誘導的心肌肥厚倉鼠中,證明了倉鼠心臟中存在分別來源于chymase和ACE的AngII形成的雙途徑。在過度表達人心臟糜酶的轉(zhuǎn)基因小鼠中, 從體內(nèi)得到的結(jié)果同樣支持人心臟中存在有一條chymase參與的AngII形成的雙途徑，這為AngⅡ形成可通過糜酶或ACE的雙途徑學說提供了體內(nèi)實驗證據(jù)。同時我們發(fā)現(xiàn)人心chymase通過AngII形成,激活MMP9和調(diào)節(jié)I型膠原表達參與了心臟重塑。部分研究結(jié)果發(fā)表在J Hypertens （2002。 20:20472055） 后，編輯部對此寫了述評文章J Hypertens 2002,20:19431944。此外，我們還建立了心臟細胞的體外牽張模型，以凋亡與增殖為切入點，對機械壓力轉(zhuǎn)化成細胞內(nèi)生物性信號的機制進行了探討；并篩選心肌肥厚相關(guān)基因片段，發(fā)現(xiàn)了CREG, ARF1基因在凋亡與增殖中的新功能，發(fā)現(xiàn)了心肌重塑中細胞表型轉(zhuǎn)化調(diào)控的新機制（J Hyperten,2004,22：15791587）。（2）腎上腺素受體介導的心肌肥大的鈣信號轉(zhuǎn)導機制持續(xù)的心肌肥厚可以導致心衰及各種心律失常，大鼠乳鼠培養(yǎng)的心肌細胞a1腎上腺素受體持續(xù)激動可引起明顯的心肌細胞肥大。激光共聚焦技術(shù)顯示苯腎上腺素引起細胞自發(fā)性鈣震蕩頻率加快，局部的鈣釋放（如鈣火化和鈣波）增加，細胞核區(qū)域鈣濃度在自發(fā)性鈣震蕩過程中亦明顯增加。免疫熒光和Western blot結(jié)果顯示大鼠乳鼠心肌細胞有內(nèi)源性的type－2和type－3磷脂酰肌醇受體（IP3－受體），而該受體抑制劑2APB和Xe C可顯著抑制苯腎上腺素引起的局部鈣釋放和鈣振蕩頻率增加作用，并且該2種抑制劑還顯著抑制苯腎上腺素引起的心肌肥大。該結(jié)果表明a1腎上腺素受體可參與疾病時心肌細胞的鈣調(diào)節(jié),尤其是細胞核區(qū)的鈣信號調(diào)控以及整體細胞鈣振蕩的調(diào)節(jié)，其機制與磷脂酰肌醇的生成并刺激內(nèi)源性鈣庫IP3受體有關(guān)。該研究結(jié)果闡明在乳鼠心肌細胞除b1腎上腺素受體介導細胞興奮－收縮耦聯(lián)外，a1腎上腺素受體亦發(fā)揮重要作用。并對心肌肥大病理過程產(chǎn)生誘導作用，從而為指導臨床應用腎上腺素受體拮抗防治心肌肥大和心衰提供了新的途徑和思路。研究論文已為Circ （3）腎上腺素受體激活心臟STAT3的信號轉(zhuǎn)導通路心臟肥大和心衰等發(fā)病的細胞信號轉(zhuǎn)導通路是多途徑的。心臟肥大刺激因素激活JAK/STAT3通路后，STAT3形成二聚體進入細胞核，調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄，具有促進心肌細胞肥大、抑制細胞凋亡、產(chǎn)生細胞保護作用。我們的研究結(jié)果還表明小鼠心肌成纖維細胞上的b2腎上腺素受體通過與Gs偶聯(lián)，激活PKA非依賴的信號轉(zhuǎn)導途徑介導心肌成纖維細胞IL6的轉(zhuǎn)錄、合成和分泌；而通過偶聯(lián)Gi蛋白激活PI3K－Akt通路，負性調(diào)節(jié)IL－6的合成和分泌。心肌成纖維細胞分泌的IL6進而使心肌細胞的STAT3酪氨酸磷酸化。小鼠心臟α1腎上腺素受體不能介導IL－6分泌和激活STAT3；但是，大鼠心臟α1腎上腺素受體則可以激活心肌細胞STAT3的酪氨酸和絲/蘇氨酸的磷酸化，且其時程和信號途徑可不同。STAT3酪氨酸磷酸化較絲氨酸磷酸化滯后60 min。α1腎上腺素受體激動通過PLCβ/ERK1/2通路介導STAT3絲氨酸磷酸化，通過PLCβ/Ca2+/cSrc/EGFR/JAK2信號通路引起STAT3酪氨酸磷酸化。研究結(jié)果揭示了交感神經(jīng)系統(tǒng)通過腎上腺素受體調(diào)節(jié)心臟自分泌免疫因子，進而激活Jak/STAT信號轉(zhuǎn)導途徑引起心肌肥厚的分子機制（JBC 2003,278:2107021075。 CEPP 2004,31:602607； JMCC 2005（in press））。(4)抑制小鼠心臟 Smad4 基因表達導致心肌肥厚和心力衰竭轉(zhuǎn)移生長因子（TGFβ）在心臟發(fā)育和心臟疾病過程中具有重要的作用，而Smad4是TGFβ通路中的重要分子。為了闡明Smad4在心臟發(fā)育過程中的作用，我們進行了條件敲除小鼠心臟Smad4 基因，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠隨著成長，表現(xiàn)出心肌肥厚和心功能下降，繼而ERK1/2 和MEK 1表達增加。提示Smad4在心肌重塑中具有重要作用，心肌細胞對TGFβ的反應降低可能是心肌肥厚的重要機制之一(Cir Res,2005 ,Sep 8 OnLine)。（三）心腦血管疾病發(fā)病的活性多肽機制研究活性多肽功能多樣性和分子內(nèi)調(diào)控心血管活性多肽，尤其是心血管組織局部分泌的、以旁分泌/自分泌方式發(fā)揮作用的活性多肽是心腦血管疾病發(fā)病的重要因素，也是目前心腦血管疾病治療的主要靶點。心血管活性多肽結(jié)構(gòu)簡單但種類繁多，組織分布廣泛、生物效應多樣，這些分子作用的特異性不很強，因而對多種生理活動具有普遍調(diào)節(jié)意義。認識心血管活性多肽功能多樣性的機制，是闡明心腦血管疾病發(fā)病的活性多肽機制和探尋防治新靶點的關(guān)鍵。我們注意到蛋白質(zhì)或多肽的體內(nèi)生物學效應不僅受本身的表達調(diào)控和分子構(gòu)型、構(gòu)象及化學修飾的影響，還受到源于其前體肽原(prepropeptide)的不同肽段彼此間的修飾和調(diào)控，以及同一活性分子不同的酶解片段彼此間的修飾和調(diào)控。這種同一大分子前體來源的眾多小分子活性片段各自具有相對獨立的生物學效應，又彼此相互作用的現(xiàn)象，我們稱之為“分子內(nèi)調(diào)控”現(xiàn)象。這種生物活性物質(zhì)結(jié)構(gòu)的多態(tài)性和功能的多樣性不僅是機體對環(huán)境易感性的基礎(chǔ)、亦是機體對疾病易感性的基礎(chǔ)。目前，這方面的研究資料還很貧乏。我們的研究發(fā)現(xiàn)：① 源于腎上腺髓質(zhì)素原前體（preproadrenomedullin, preproADM）不同肽段在離體孵育的血管環(huán)引起程度不等的舒張或收縮效應，preproADM不同肽段對培養(yǎng)的血管平滑肌細胞（VSMC）亦有不同的促進或抑制