【文章內容簡介】 環(huán)素進入菌體，導致對四環(huán)素耐藥，在四環(huán)素存在下可以選擇出對四環(huán)素及其他多種抗生素高度耐藥的菌株。其耐藥是因存在著多重耐藥系統(tǒng)（MAR），包含marRAB操縱子，可減少OmpF外膜蛋白數(shù)量，這一操縱子也可被四環(huán)素抑制，同時mar操縱子的激活也可導致四環(huán)素的活性泵出，使耐藥性增加，在腸桿菌科多種菌屬如沙門菌屬、志賀菌屬、克雷伯菌屬、枸櫞酸菌屬、腸桿菌屬中都已檢出mar系統(tǒng)。　　藥物泵出：菌體編碼產(chǎn)生藥物泵出系統(tǒng)是導致對四環(huán)素耐藥的重要機制，這一過程由膜蛋白Tet通過攝入質子、排出四環(huán)素－陽離子復合物完成。通過DNA－DNA雜交，從臨床菌株中可分離出8種編碼泵出系統(tǒng)的基因：tet（A）—（E）基因在革蘭陰性菌中廣泛檢測出；ter（P）基因存在于梭菌屬細菌中，由編碼功能基因tetA（P）和tetB （P）的復合基因組成，tetA（P）編碼與泵出有關的膜轉運蛋白，tetB（P）編碼類似tetM的核蛋白體保護蛋白；tet（K）和tet（L）基因僅發(fā)現(xiàn)于革蘭陽性菌。銅綠假單胞菌對包括四環(huán)素在內的許多抗生素固有耐藥，其機制極可能是存在藥物泵出系統(tǒng)?！　『说鞍左w保護作用：通過降低30S核蛋白體亞基A位點和P位點對氨基酰tRNA的親和力，四環(huán)素發(fā)揮其抗菌作用。對四環(huán)素耐藥通?？梢虍a(chǎn)生一種蛋白質，這種蛋白質和核蛋白體相互作用，使蛋白質合成不受抗生素影響，稱核蛋白體保護作用。核蛋白體保護作用可受到tRNA修飾的阻礙，具體機制尚未闡明?，F(xiàn)已分離出5種核蛋白體保護作用基因：tetM、tetO、tetP、tetQ、tetS。TetM分布極為廣泛，可在奈瑟菌屬、金氏菌屬、埃肯菌屬和杜克嗜血桿菌中檢出，在支原體及脲原體中也有發(fā)現(xiàn)，它更多作為Tn916相關的結合性轉座子的一部份見于染色體上，這些轉座子有自我轉移性，宿主范圍廣，在四環(huán)素存在時轉移頻率增加，四環(huán)素可以調節(jié)增強其表達；tetO可在彎曲菌屬、鏈球菌屬和腸球菌屬中檢出；tetP在產(chǎn)氣莢膜梭菌中檢出；tetQ在類桿菌中檢出；tetS在產(chǎn)單核細胞李斯物菌和糞腸球菌中發(fā)現(xiàn)?！　。┗前泛图籽踵奏つ退帲骸　」逃心退帲和饽B透性降低使銅綠假單胞菌對甲氧嘧啶和磺胺耐藥；奈瑟菌屬、梭菌屬、布魯菌屬、類桿菌屬、莫拉菌屬、諾卡菌屬以甲氧嘧啶固有耐藥，是由于抗生素和細菌DHFR親合力低；腸球菌屬、乳桿菌屬某些細菌屬營養(yǎng)缺陷型細菌能利用外源性葉酸，表現(xiàn)出對磺胺和甲氧嘧啶低度敏感，腸球菌也可利用外源性胸腺嘧啶，不受葉酸合成途徑拮抗劑的抑制?！　籽踵奏か@得性耐藥：（1）染色體突變：在臨床上常可見到DHFR結構基因突變引起對甲氧嘧啶耐藥的菌株，如大腸埃希菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等，在肺炎克雷伯菌、產(chǎn)氣腸桿菌、陰溝腸桿菌中發(fā)現(xiàn)染色體突變導致的外膜滲透性下降，及對萘啶酸、甲氧嘧啶、氯霉素交叉耐藥。這些菌株多重耐藥與外膜蛋白數(shù)量減少有關。染色體突變滅活胸苷酸合成酶，導致對磺胺甲氧嘧啶合成并高度耐藥，這些突變株需要外源性胸苷或胸腺嘧啶合成DNA，對葉酸合成途徑拮抗劑不敏感。（2）質粒介導耐藥：導致腸桿菌科一些細菌對甲氧嘧啶高度耐藥最常見原因是獲得外源性DNA產(chǎn)生過量DHFR；產(chǎn)生的DHFR被甲氧嘧啶抑制的敏感性低于染色體介導的酶。在革蘭陰性菌，尤其是大腸埃希菌中，通過動力學、一級結構分析、DNA－DNA雜交可至少分出6種不同的DHFR；相比之下，革蘭陽性菌兩型（S1和S2型）。　　DHFR中分布最廣泛的是DHFR I型，導致對甲氧嘧啶高度耐藥，其相應基因dhfr I位于轉座子Tn7，而且dhfr I基因是轉動基因，能在Tn7轉座子外檢出，dhfr II 型對甲氧嘧啶敏感性最低；dhfrⅢ型在傷寒沙門菌和志賀菌屬某些種檢出，引起對甲氧嘧啶耐藥；dhfr Ⅳ型能被甲氧嘧啶誘導?！　≡诟锾m陽性菌中，DHFR S1型普遍存在，在金黃色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、表皮葡萄球菌、人型葡萄球菌中都已檢出由dhfr A基因編碼的DHFR S1型酶。近年在產(chǎn)單核細胞李斯特菌、溶血葡萄球菌中還發(fā)現(xiàn)了DHFR S2型酶，存在于葡萄球菌和李斯特菌中的S1型酶可能會表現(xiàn)出可移動性和突變性的特征，和染色體介導的表皮葡萄球菌的酶一樣，因為二者氨基酸序列極為相似?！　前帆@得性耐藥：（1）染色體突變：在奈瑟菌屬細菌和金黃色葡萄球菌中，染色體突變可導致PABA增多，產(chǎn)生對磺胺耐藥。大腸埃希菌、肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌的耐藥與dhps基因突變有關，突變的dhps基因編碼產(chǎn)生對磺胺低親合力的DHPS。（2）質粒介導：獲昨了編碼產(chǎn)生耐藥性DHPS的質?？蓪е聦前帆@得性耐藥。在革蘭陰性菌中已分離出分別由sul I 和sul II基因編碼的耐藥性DHPS I型和II型。幾乎所有的sul I基因和其他耐藥基因相聯(lián)，位于由大結合質粒攜帶的整合子保留片段上；sul II基因常和鏈霉素耐藥基因相聯(lián)，存在于宿主范圍廣的質粒和小的非結合性質粒上，在臨床分離的耐藥株中，sul I 和sul II基因檢出率大致相同?！　。ㄆ撸┼Z酮類耐藥：　　DNA螺旋酶和拓樸異構酶Ⅳ的改變：在細菌生長和分裂中，DNA螺旋和拓樸異構酶Ⅳ有著非常重要的作用，喹諾酮作用于其上則起到抗菌作用。然而編碼螺旋酶和拓樸異構酶亞基的基因發(fā)生突變可導致對喹諾酮耐藥。　　臨床試驗也已證明gyrA基因的突變引起對喹諾酮高度耐藥，幾乎所有gyrA耐藥突變都位于喹諾酮耐藥決定區(qū)的130bp序列中，在革蘭陰性和陽性菌中都有發(fā)生；gyrB基因的突變也引起對喹諾酮的耐藥，但程度不高。臨床耐藥株大多數(shù)由gyrA突變引起，另一因子parC的突變也會使耐藥水平增強，但其突變發(fā)生于gyrA之后?！　≡诟锾m陽性菌如金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、糞腸球菌中，對氟喹諾酮的耐藥也由gyrA和parC基因突變引起。相比革蘭陰性菌而言，氟喹諾酮首先作用于革蘭陽性菌拓樸異構酶Ⅳ，因而在對環(huán)丙沙星耐藥的金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌中，parC的突變先于gyrA。這也提示革蘭陰、陽性細菌parC突變有根本不同?！　⊥饽B透性降低及藥物泵出：由外膜變化引起抗生素進入菌體中減少可導致對喹諾酮耐藥，對喹諾酮耐藥是多重耐藥表型的一個特征，這一多重耐藥和mar位點突變有關。在對銅綠假單胞菌的研究中已鑒定出多種位點，這些位點突變要改變外膜蛋白，從而降低滲透性導致耐藥。在銅綠假單胞菌中還分離出因藥物泵出表達耐藥的菌株，對多種抗生素耐藥。在金黃色葡萄球菌中也發(fā)現(xiàn)了活性泵出系統(tǒng)，由norA基因編碼產(chǎn)生，該基因過量表達導致耐藥。　?。ò耍┞让顾啬退帲骸　∶笢缁钭饔茫郝让顾赜?個羥基，可被氯霉素轉乙?；敢阴；?，在這反應中乙酰輔酶A為乙酰基供體。乙酰化作用先發(fā)生在C3羥基，形成3－乙酰氯霉素，在不需酶催化下3－乙酰氯霉素轉位形成1－乙酰氯霉素，再乙酰化為1，3二乙酰氯霉素，一乙酰氯霉素和二乙酰氯霉素都不能結合到50S核蛋白體亞基上。通過對腸道細菌突變株的研究，發(fā)現(xiàn)不同突變株其氯霉素轉乙?；附M成都是由相同亞基組成的三級結構。（1）革蘭陽性菌中的氯霉素轉乙?；福涸诮瘘S色葡萄球菌中通過電泳技術現(xiàn)已分離出5種不同的氯霉素轉乙?；福篈、B、C、D及由質粒PC194編碼的氯霉素轉乙酰基酶。編碼酶的結構基因常位于小多拷貝質粒上，基表達可由氯霉素誘導；對氯霉素耐藥的糞腸球菌和肺炎鏈球菌產(chǎn)生一種可誘導的氯霉素轉乙?；福a(chǎn)氣莢膜梭菌有2個基本表達決定因子：catP和catQ。（2）：革蘭陰性菌中氯霉素轉乙?；福涸诟锾m陰性菌中，對氯霉素耐藥的菌株常由質?；蜣D座子的基因誘導，這些基因常被完整表達，在腸道細菌中現(xiàn)已鑒定出了3個型別的酶（I、Ⅱ、Ⅲ型），I型酶普遍存在，能特異性緊密結合類固醇類抗生素，編碼氯霉素轉乙?；?型的基因常位于Tn9轉座子上。近來檢出一群基因，能編碼催化乙酰輔酶A到氯霉素，但其結構和典型的氯霉素轉乙?；覆煌?，稱為外來乙酰基轉移酶，包括銅綠假單胞菌和腫脹土壤桿菌中染色體編碼的酶。在大腸埃希菌多重耐藥轉座子Tn2424上發(fā)現(xiàn)一氯霉素耐藥決定因子，編碼產(chǎn)生XATTn2424和Tn21接近，其核苷酸序列區(qū)位于xat基因一側，提示此耐藥基因是整合子的一部分，與耐藥基因的表達和播散有關?！　B透性降低：染色體突變導致外膜滲透性降低也會引起某些革蘭陰性菌對氯霉素耐藥，如在流感嗜血桿菌和傷寒沙門菌中，對氯霉素的高度耐藥株主要與外膜蛋白數(shù)量下降及特異性外膜蛋白缺失有關；銅綠假單胞菌中cmlA基因可使外膜蛋白ompA和ompC表達減少，使進行菌體的氯霉素減少?！　。ň牛┨请念惸退帲阂韵轮饕榻B腸球菌耐糖肽類抗生素的耐藥機制，其中又以獲得性耐藥為主，獲得性耐藥的主要表型是VanA和VanB?！　anA型菌株主要由屎腸球菌和糞腸球菌分離得到，對萬古霉素和肽可霉素高水平耐藥，耐藥性可通過接合轉移給敏感菌株。VanA型耐藥基因由11kb轉座子Tn1546攜帶，Tn1546編碼9個多肽，這9個多肽同作用賦予細菌對萬古霉素的高水平耐藥，UDP－胞壁酸五肽的D－丙氨酸－D－丙氨酸上的NH基被D－丙氨酸－D－乳酸的氧所取代，從而取消了肽聚糖前體與抗生素之間原有的一個氫鍵并使得原來的空間構象發(fā)生改變，結果是D－丙氨酸－D－乳酸取代了D－丙氨酸－D－丙氨酸。D－丙氨酸－D－乳酸的產(chǎn)生主要依靠三種酶的作用，VanA連接酶、VanH脫氫酶和VanX二肽酶。VanH脫氫酶催化丙酮酸水解成乳酸，VanX二肽酶破壞D－丙氨酸－D－丙氨酸的連接鍵，VanA連接酶催化D－丙氨酸－D－乳酸形成。另外VanR基因和VanS基因的產(chǎn)物VanR基因和VanS基因的產(chǎn)物VanR、VanS蛋白與VanA耐藥調控有關，在萬古霉素的誘導下可激活VanA、VanH和VanX共轉錄所需的起動子，VanY基因和VanZ基因編碼生成輔助蛋白VanY和VanZ。VanY是一種D，D－縮肽酶，可解離肽聚糖前體的D－丙氨酸，但需由VanX共同參與。VanZ可能與肽可霉素低度耐藥有關，具體機制不清。　　在屎腸球菌、糞腸球菌、鳥腸球菌、耐久腸球菌和堅忍腸球菌等也已檢出高水平耐糖肽類菌株。實驗中發(fā)現(xiàn)，這些高耐藥菌株可通過接合從糞腸球菌向金黃色葡萄球菌轉移。例如發(fā)現(xiàn)一株耐萬古霉素的鳥鏈球菌攜帶與VanB連接酶相關的基因。　　獲得性耐藥中的另一表型為VanB型，其耐藥菌株主要包括屎腸球菌和糞腸球菌，腸球菌對萬古霉素呈不同水平的耐藥性，而對肽可霉素敏感。VanB型耐藥可以轉移，耐藥基因存在于質?；蛉旧w上，轉移可能與轉座子有關。％氨基酸同源性，編碼轉座子是Tn1547，包含VanB基因；其耐藥機制的生化基礎及編碼的基因與VanA型相同，細胞壁前體的D－丙氨酸－D－丙氨酸同樣被D－丙氨酸－D－乳酸取代，存在VanHB脫氫酶、VanB連接酶和VanXB二肽酶。VanB菌株含輔助基因VanW，其具體作用機制不清，但不包括VanZ基因。此外，有些腸球菌對糖肽類抗生素呈天然耐藥，主要表型為VanC型腸球菌，包括鶉雞腸球菌、鉛黃腸球菌和微黃腸球菌，其對萬古霉素呈低水平耐藥，耐藥基因可能存在于染色體上，細胞壁前體由VanC連接酶催化合成D－丙氨酸－D－絲氨酸，使其與萬古霉素的親合力下降。VanC基因又分為VanCVanC2和VanC3。臨床已有報道金黃色葡萄球菌對