第15章核酸的研究方法(編輯修改稿)
2024-08-16 07:56 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 列測定 英國 Sanger 1955 確定牛胰島素結構， 1958 獲諾貝爾化學獎 1975 設計出 DNA測序法， 1980 獲諾貝爾化學獎 合成一段與待測 DNA序列互補的 DNA片段群 。 末端終止法 —— Sanger 2’， 3’雙脫氧核苷三磷酸（ ddNTP）是 DNA合成鏈延伸的 抑制劑 。 MOV : \Dideoxy sequencing of DNA DNA序列分析儀： 四色熒光基團標記的dNTP （二） DNA的化學法測序： 由 Maxam和 Gilbert所發(fā)明。 其基本原理是用特異的 化學試劑 作用于 DNA分子中的不同堿基，然后用 哌啶 切斷反應堿基的多核苷酸鏈。用 4組不同的特異反應，可使末端標記的 DNA分子切成不同長度的片斷，其末端都是該特異的堿基。經(jīng)變性膠電泳和放射自顯影得到測序圖譜 4組特異的反應如下： （ 1） G反應： 用硫酸二甲酯 DMS使鳥嘌呤上的 N7原子甲基化，加熱引起鳥嘌呤脫落，多核苷酸鏈可在此處斷裂 （ 2） G+A反應： 用甲酸使 A和 G嘌呤環(huán)上的 N原子質子化，從而使其糖苷鍵變得不穩(wěn)定，再用哌啶使鍵斷裂 （ 3） T+C反應： 用肼使 T和 C的嘧啶環(huán)斷裂，再用哌啶除去堿基 （ 4） C反應： 當有鹽存在時，只有 C與肼反應，并被哌啶除去。嘧啶使修飾堿基脫落，并使去掉堿基的磷酸二酯鍵斷裂 32PGCTACGTA： 在 A處： 32
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