基因芯片技術(shù)(編輯修改稿)
2025-08-14 18:50 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 q u e n om( 德國(guó)，美國(guó) )20 25 m e r 探針合成后打印成陣列250 點(diǎn)，激光解吸 質(zhì)譜分析質(zhì)譜 新基因鑒定診斷及作圖S y n t e n i（美國(guó)）500 5000 nt c D N A 用滴頭打印于 4 c m 2 的玻璃片10000 個(gè) c D N A 點(diǎn)與 2 00標(biāo)記 c D N A熒光 新基因鑒定表達(dá)譜檢測(cè)德國(guó)癌癥研究所 （德國(guó)）約 1 0 00 個(gè) P N A 合成于 8 10 c m 2 的芯片熒光 / 質(zhì)譜表達(dá)譜檢測(cè)及診斷八、基因芯片的主要類型 基因芯片以其片基 (substrate)的不同可以分為無(wú)機(jī)片基和有機(jī)合成物片基 。 前者主要包括半導(dǎo)體硅片和玻璃片 ， 其上的探針主要以原位聚合的方法合成 ， 后者主要有特定孔徑的硝酸纖維膜和尼龍膜 ， 其上的探針主要是預(yù)先合成后通過(guò)特殊的微量點(diǎn)樣裝置或儀器滴加到片基上去 （ 如下表所示 ） 。 片基 探針固定方式 探針密度 顯色及檢測(cè)方式鋼性片基如玻片、半導(dǎo)體硅片等原位合成 （ i n s it us y n t h e s is ）高熒光，激光共聚焦掃描、定量分析；生物傳感器等薄膜片基如 NC 、N y l o n 膜等預(yù)先合成后點(diǎn)樣( o f f c h ips y n t h e s is )低 熒光基因芯片的主要類型及其簡(jiǎn)要特點(diǎn) 不過(guò)，也有人 (Robert S. Matson)等以聚丙烯膜為支持物用傳統(tǒng)的亞磷酰胺固相法原位合成高密度探針序列 。 九、基因芯片檢測(cè)原理及簡(jiǎn)要過(guò)程 P C RT7 p r o m o t e rT7 p r o m o t e r體內(nèi)轉(zhuǎn)錄片段化 1. 5 小時(shí)雜交、沖洗ACGT掃描分析1 小時(shí)熒光素圖 2 樣品處理與檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)圖基本過(guò)程 – 用生物素標(biāo)記并經(jīng)擴(kuò)增 （ 也可使用其它放大技術(shù) ） 的靶序列或樣品然后再與芯片上的大量探針進(jìn)行雜交 – 用鏈霉親和素 (streptavidin)偶聯(lián)的熒光素 （ 常用的熒光素還有 lassamine 和 phycoerythrin） 進(jìn)行顯色 – 圖 象 的 采 集 用 落 射 熒 光 顯 微 鏡 (epifluorescence microscope)、 激光共聚焦顯微鏡或其它熒光顯微裝置對(duì)片基掃描 – 由計(jì)算機(jī)收集熒光信號(hào) ， 并對(duì)每個(gè)點(diǎn)的熒光強(qiáng)度數(shù)字化后進(jìn)行分析 。 由于完全正常的 WatsonCrick配對(duì)雙鏈要比具有錯(cuò)配 (mismatch)堿基的雙鏈分子具有較高的熱力學(xué)穩(wěn)定性 ， 所以 ， 前者的熒光強(qiáng)度要比后者強(qiáng)出 535%。 從這一點(diǎn)來(lái)說(shuō) ， 該檢測(cè)方法是具有一定特異性的 ， 而且熒光信號(hào)的強(qiáng)度還與樣品中靶分子含量呈一定的線性關(guān)系 。 以下圖為例 。 十、探針的合成與固定 光引導(dǎo)原位合成 (Light directed in situ synthesis） 光 引 導(dǎo) 聚 合 技 術(shù) 是 照 相 平 板 印 刷 技 術(shù)(photolithography)與固相合成技術(shù) 、 計(jì)算機(jī)技術(shù)以及分子生物學(xué)等多學(xué)科相互滲透結(jié)果 。照相平板印刷技
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