基因芯片在食源性致病微生物檢測中的應(yīng)用(編輯修改稿)
2025-05-01 23:18 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 敏感性高，對革蘭氏陰性和陽性菌同時(shí)適用，已用于水果、蔬菜、奶制品、魚類等多種動(dòng)植物性食品的衛(wèi)生檢測。3 基因芯片用于食品微生物檢測的具體實(shí)例利用北京博奧公司開發(fā)的食源性致病微生物檢測試劑盒對鮮豬肉進(jìn)行致病微生物檢測，該試劑盒可同時(shí)對沙門氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌、致瀉性大腸桿菌O157:H空腸彎曲桿菌和金黃色葡萄球菌進(jìn)行檢測，檢測靈敏度達(dá)，檢測的假陽性率為假陰性率為0%。Ⅰ、樣品的前增菌取25g鮮豬肉放入含有225mL營養(yǎng)肉湯（NB）的均質(zhì)杯中進(jìn)行均質(zhì)，然后轉(zhuǎn)入三角瓶中37℃培養(yǎng)10h，同時(shí)將另一份樣品經(jīng)同樣處理后于37℃微氧環(huán)境（5%O10%CO85%N2）增菌48h，該樣品用于空腸彎曲桿菌的檢測。Ⅱ、細(xì)菌基因組DNA提取利用博奧公司生產(chǎn)的通用型細(xì)菌DNA快速提取試劑盒對待檢測樣品進(jìn)行基因組DNA提取，具體步驟參見：%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測。Ⅲ、對多重不對稱PCR擴(kuò)增PCR擴(kuò)增參照試劑盒說明書進(jìn)行，50 181。l PCR 體系中，10PCR Buffer 終濃度為dNTP mmolL標(biāo)記濃度1181。molLLDNA 模板2 181。l，Taq 酶2U；退火溫度為52℃；循環(huán)程序?yàn)椋?4℃變性5 min 后進(jìn)入PCR 循環(huán)，94℃ 30 s、52℃ 30 s、72℃ 1min 40sec，擴(kuò)增40 個(gè)循環(huán)后72℃延伸7 min。PCR %的瓊脂糖凝膠電泳檢測。Ⅳ、雜交及結(jié)果判讀對具有擴(kuò)增的樣品進(jìn)行雜交檢測，在12 ul雜交體系中含有，20SSC終濃度為%SDS、25%甲酰胺、5Denhardt`s、42℃恒溫水浴雜交2小時(shí)后用2%SDS，42℃震蕩清洗4min,SSC 42℃震蕩清洗4min4 基因芯片在食品微生物檢測中的應(yīng)用 基因芯片技術(shù)檢測食品常見致病菌基因芯片可以同時(shí)固定大量的探針分子，理論上可以在一次實(shí)驗(yàn)中檢出所有潛在的致病原，也可以用同一張芯片檢測某一致病原的各種遺傳學(xué)指標(biāo)，這為平行檢測多個(gè)菌種或同菌種內(nèi)多個(gè)菌株提供了一條便捷的途徑；同時(shí)檢測的靈敏度、特異性和快速便捷性也很高，因而在致病原分析檢測中有很好的發(fā)展前景。表2列出了近年來應(yīng)用寡核苷酸芯片對進(jìn)行微生物檢測與鑒定的一些進(jìn)展。從表2 中可以看出,目前用于細(xì)菌檢測和鑒定的芯片所用探針大多來自于16SrRNA ,部分來自于一些功能基因。標(biāo)記的方法仍然是以PCR 過程中進(jìn)行標(biāo)記為主。表2 應(yīng)用寡核苷酸芯片進(jìn)行病原體檢測及種類鑒定的部分研究進(jìn)展檢測對象探針標(biāo)記參考文獻(xiàn)大小(mer)來源20 種人腸道細(xì)菌4016S rDNAPCR 擴(kuò)增樣品16S rDNA 全長時(shí)Taq 酶聚合摻入熒光物或地高辛[10]5 種較近親緣關(guān)系的桿菌≈2016S rRNA化學(xué)方法標(biāo)記樣品16S rRNA 的PCR 擴(kuò)增[11]玫瑰桿菌等6 種水表面細(xì)菌 15～2016S rRNA使用indocarbocyanine 和生物素標(biāo)記的引物PCR 擴(kuò)增樣品16S rRNA[12]雞糞便中的彎曲菌彎曲菌 27～3516S rRNA 與23SrRNA間區(qū)域及特有基因熒光引物PCR 擴(kuò)增標(biāo)記[13]30 種菌血癥血液中細(xì)菌 21～3123S rDNA地高辛引物PCR 擴(kuò)增標(biāo)記[14]大腸桿菌、志賀氏菌和沙門氏菌等14 種細(xì)菌 13～17gyrBPCR 擴(kuò)增時(shí)Taq 酶聚合摻入熒光物[15]14 種分枝桿菌
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