【文章內(nèi)容簡介】 為了查找方便在細胞學標本編號前冠以“C”字母（Cytology）；活檢組織標本和細胞學標本按年份編排，如C20120001。編號后按登記本所列項目進行登記，將標本按順序放在規(guī)定的地方，以備檢查，不得遺失。病理申請單凡有下列情況之一者，應及時責其更正或退回，并記錄在案，按要求呈報醫(yī)務(wù)科。1.標本是否放入容器內(nèi)。有否存在主要病灶被事先挖取或一個標本被分送兩個單位（不允許本院標本無故送往外院或隨便丟棄）。2. 容器中是否有雜物。容器上是否貼有標簽。3. 固定液量是否充足。有否標本嚴重自溶、干涸、腐敗或被錯誤地使用非固定液浸泡。4. 固定液用10%中性福爾馬林溶液，（10%中性福爾馬林溶液由病理科配制，各臨床科領(lǐng)用即可）。5. 申請單是否清潔。填寫是否完整，有否重要項目空缺或填寫的病史及臨床檢查過于簡單。6. 申請單填寫內(nèi)容是否與標本相符，字跡是否工整。7. 核實無誤后，進行編號、微機錄入基本信息。8. 大標本，可在不影響主要病灶的情況下測量、描述并剖開固定，并適當添加固定液，繼續(xù)固定。二、組織取材程序及質(zhì)量控制各種臟器有其獨特的大體結(jié)構(gòu)，各種疾病又有其各自的特點。即使同一種疾病，在不同的病例亦可有不同的發(fā)病部位、肉眼形態(tài)及發(fā)展階段。因此，在肉眼檢查各種臟器的各種病變時，既要有規(guī)范的常規(guī)檢查方法，又要有按照不同情況決定檢查方法的靈活性?？偟脑瓌t如下：標本的大體檢查及取材應按編號順序進行，檢查前應閱讀申請單上各項主要內(nèi)容，注意臨床醫(yī)生有無特殊要求。然后取出全部標本進行核對，發(fā)現(xiàn)問題及時解決，必要時請臨床醫(yī)師前來辨認標本，確認無誤后再進行檢查、取材（有色標本瓶應仔細查看，防止小塊標本遺留在瓶內(nèi)）。肉眼檢查的一般原則可概括為看、觸、切、取。詳細描寫標本大小、形狀，表面和切面的顏色、硬度、病變部位、大小、形狀、特點和周圍組織的關(guān)系等。先描寫主要病變、后描寫次要病變。必要時繪圖說明。剖檢標本時，應注意暴露標本的最大面積，以便全面檢查，并應保留其特點，以備作為教學和科研之用。具體要求如下：1. 大體標本取材，應有2人參加。記錄者（一般為技術(shù)人員）應詳細記錄取材者的口頭描述，負責宣讀申請單。尤其要告訴取材者標本的件數(shù)、臨床的特殊要求，并對取材者放置的小號碼進行監(jiān)督。取材者應在聽宣讀時，對標本容器上的編號、姓名及標本數(shù)量作第二次核實，如發(fā)現(xiàn)問題，待與臨床醫(yī)師聯(lián)系、認定后再取材。2. 小件標本應每塊均取材制做切片，可能時每塊保存一部分，以備重復檢查之用；若標本太小，如窺鏡咬檢標本，應全部取材，點染伊紅并用軟紙包裹，以防遺失。3. 腫瘤尤其是惡性腫瘤標本，除了在腫瘤部位取組織塊之外，還要在被手術(shù)切除的斷端及病變邊緣（腫瘤與周圍組織交界處）等部位取組織塊進行檢查。局部淋巴結(jié)必須逐個進行切片檢查，以便明確腫瘤侵犯范圍和轉(zhuǎn)移率的情況。4. 組織塊取材厚度 以不超過3mm為宜，且要平整，并須注明其形狀、數(shù)目、切取部位（如左、右、上、下等），如有特殊情況，應向技術(shù)人員交代清楚，或共同處理。5. 在標本取材時，每一例標本取好之后，剩余的標本，應放回原送檢容器中妥善保存，直到發(fā)出病理報告之后2周無問題再行處理。6. 每一例標本取好之后都應附上標本來源號，不同號碼的標本，必須分別放于不同的脫水盒中，記錄塊數(shù)，特點及制片時注意事項，要認真與申請單核對，防止張冠李戴，然后放入脫水機中脫水。用特殊固定液固定的標本，制片時需特別處理時應向技術(shù)人員交代清楚。骨組織和需鈣化的組織應進行脫鈣處理。7. 有下列情況之一者，應編寫小序號號碼并與相應的組織塊放在一起，切勿放錯：①一位病員被送一件以上的標本。②申請單中注明有特殊標記的標本。③一個大標本多處取材。④根治術(shù)標本的基部及切緣，找出或送檢的淋巴結(jié)。⑤補充取材。8. 每件標本取材后，應用流水沖洗，紗布擦試取材臺及用具，必須清理干凈后再取下一例標本，防止標本間的組織碎屑污染，造成誤診。取材結(jié)束后，病理醫(yī)師應向技術(shù)人員當面交付組織塊；技術(shù)人員點清塊數(shù)，取材者和記錄者應分別在記錄單的適當位置簽名。技術(shù)人員檢查病理醫(yī)師為技術(shù)室所提供的材料是否合格：組織塊數(shù)的確認、標本大小、厚度、脫鈣情況、特殊固定等，清點后接收——交接班。9. 所用的器械用戊二醛消毒溶液浸泡消毒，工作臺面和取材板，～%過氧乙酸溶液擦拭消毒，此外可用紫外線對取材室進行空氣和物體表面消毒。室內(nèi)用紫外線消毒時應清潔、干燥，溫度不低于20℃，相對濕度不超過50%，一般照射20～30分鐘。三、組織處理、包埋程序及質(zhì)量控制 組織固定、脫水、透明、浸蠟直至包埋，是制作優(yōu)質(zhì)切片的關(guān)鍵過程。該過程也稱為組織處理。一旦組織處理有欠缺，往往導致無法挽回的后果。固定后的組織通常經(jīng)過一系列的梯度乙醇脫水，也可使用乙醇和福爾馬林混合液，或使用其它脫水劑。大多數(shù)脫水劑不能與石蠟直接相溶，所以脫水后必須再經(jīng)過透明劑作用，才能對組織進行浸蠟。最后用石蠟包埋組織塊。透明劑作用于組織的過程，稱為組織透明。最常用的透明劑是二甲苯。組織經(jīng)過二甲苯透明后，浸泡在熔化的石蠟中，組織浸蠟一般要通過2～3個蠟缸，最終以石蠟替換出組織中的透明劑。石蠟的熔點一般為56～58℃，浸蠟的溫度通常比蠟的熔點高2℃左右。上述組織處理過程一般由脫水機自動處理。組織在脫水機中按照預先設(shè)置的時間和溫度程序自動完成。組織處理的質(zhì)量控制：1. 組織的處理時間，視組織的性質(zhì)和組織塊的大小而有所不同。致密的組織、富含脂肪或纖維組織，處理所需的時間要比結(jié)構(gòu)細膩、細胞成分多的組織長。最好能根據(jù)組織的性質(zhì)和大小分類，分批進行處理，以便于掌握時間，保證質(zhì)量。2. 較細小的組織，例如內(nèi)窺鏡鉗取標本，穿刺標本，應與較大的組織塊分別進行處理。小組織濾紙包裹或者裝入專用的網(wǎng)狀脫水盒內(nèi)，以免遺失。3. 組織處理所用的各種試劑，可根據(jù)工作量的大小，試劑消耗情況定時更換新液。一般情況下一月更換一次。在實際工作應用中其效果以保證常規(guī)切片的質(zhì)量為原則?？剖矣邢鄬潭ǖ拿撍敖灣绦颍缬泄ぷ魅藛T需要對固定的脫水、浸蠟時間程序改動，先提交申請，申明改動的理由及改進原理，經(jīng)科主任批準后，可以開始批量試驗。在新程序不成熟以前，不準日常工作應用！待批量結(jié)果實驗以后，經(jīng)全科工作人員對此進行評估，決定應用與否。如違背此規(guī)定，擅自改動者，為第一責任人，出現(xiàn)差錯者應受相應的處分。工作中自動脫水機使用時的注意事項：1. 按脫水、透明、浸蠟順序設(shè)置程序及時間。2. 保持各試劑缸內(nèi)的試劑液面有足夠的高度，以使組織全部侵入液體內(nèi)。3. 按設(shè)計好的組織處理時間表，調(diào)定時間控制裝置。4. 調(diào)定浸蠟缸溫度，一般要高出所用石蠟熔點溫度2℃左右。5. 當完成最后一道程序后，應及時取出標本進行包埋（必要時隨手關(guān)機）。組織包埋程序1. 包埋劑及其使用范圍：用于組織包埋的材料有石蠟、碳蠟、火棉膠和各種塑料等。石蠟是最常用的組織包埋劑。石蠟包埋是一種常規(guī)包埋法，組織從脫水機中取出后仍在脫水盒內(nèi)，必須人工將組織從脫水盒中取出來，然后放進包埋框里排列整齊，調(diào)整好方位，再灌滿熔化的石蠟。2. 包埋步驟：（1）包埋時的用蠟需預先熔化，充分沉淀后使用。（2）將熔蠟注入蠟模內(nèi)，將鑷子在酒精燈上加溫，夾持浸好蠟的組織塊，選擇好包埋面，將其朝下埋入熔蠟內(nèi)，用鑷子輕輕按壓，使組織在蠟中并緊貼蠟模底部。隨即將組織塊號碼簽嵌入熔蠟的一側(cè)。（3）待熔蠟表面凝固后，可投入流水中、放進冰箱冷凍室或包埋機冷臺上促凝。（4）待蠟完全凝固后脫模，并把蠟塊四周適當修切。組織周圍應留有1~2mm的蠟邊。提倡使用石蠟包埋機，質(zhì)量更好！3. 包埋面的選擇：（1）一般情況下以組織最大面為包埋面。（2）管狀結(jié)構(gòu)的組織以橫切面為包埋面。（3）皮膚組織或有表層上皮的組織，包埋面應垂直于上皮表面。（4）帶有病變特點的組織，或者對包埋面有特別要求的組織應按預先標記的包埋。組織處理、包埋程序的質(zhì)量控制：1. 取材后對固定不充分的組織，應補充固定（固定時間：大標本固定時間不得少于18小時；小標本不得少于6小時。固定液必須定時更換（標本固定時間過長者，應流水沖洗）；應將大、小標本分開固定、脫水。2. 固定、脫水溫度不得高于37℃。3. 試劑必須定時更換。4. 包埋用石蠟必須定期過濾，蠟溫應控制在62℃左右。5. 包埋時應嚴格分塊包埋，并同時包入相應的小號，切勿包錯。不得將來歷不明的碎組織塊任意包入，以防污染。6. 組織包埋完成后必須進行清點蠟塊數(shù)量，以防組織塊在脫水、包埋過程中遺失。四、 組織切片程序及質(zhì)量控制石蠟切片程序：組織包埋后必須切成薄片，再貼到載玻片上。需使用的設(shè)備：切片機、切片刀、水浴鍋或撈烤片機等。切片機多輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機。切片刀為一次性的刀片。組織切片是一門精細的技術(shù)，需要花費一定的時間練習，才能熟練掌握這門技術(shù)。石蠟切片質(zhì)量控制：1. 切片前首先裝好切片刀，把刀牢牢固定，否則，切片中就會發(fā)生許多人為現(xiàn)象。（最常見的人為現(xiàn)象是波紋，厚薄不均等）。2. 蠟塊裝到切片機的蠟塊夾上，夾持要平穩(wěn)牢固。調(diào)整好蠟塊的方位，不能偏斜，刀刃與蠟塊的上、下緣平行。切片刀與蠟塊的平面之間應保持一定的角度，以免刀刃面將組織刮壞。3. 修蠟塊時要循序漸進，力爭修出最大面，又要防止小組織被修壞、修光。4. 切片時連續(xù)轉(zhuǎn)動手輪，用力要平穩(wěn)、均勻。常規(guī)切片厚3～5μm。5. 切下的蠟片相連成帶狀。待蠟帶切至一定長度時，右手用鑷子夾住蠟片末端，左手持毛筆輕輕將蠟帶的另一端與切片刀撥離。6. 將蠟片較光滑的一面朝下置于溫水中（通常撈片水溫在42℃左右），并用鑷子幫助展開，去除皺紋后，選擇完整、無劃痕、厚薄均勻的蠟片，附貼到載玻片上。7. 附貼時，務(wù)使蠟片與玻片之間無氣泡。玻片一端應留有1/3的位置貼號碼標簽用。將蠟片附貼在另外2/3的中心位置。8. 切片放入62℃烤箱中約30～60分鐘烤片，以免發(fā)生脫片。免疫組化染色需使用打膠片（APES膠片和多聚賴氨酸膠片等）。冷凍切片程序:在手術(shù)過程中，外科大夫為了明確手術(shù)切除標本的性質(zhì)及病變。通常送新鮮組織做冷凍切片病理檢查，由病理醫(yī)師在短時間內(nèi)（一般30分鐘左右）做出病理診斷。外科醫(yī)生根據(jù)病理診斷，決定手術(shù)切除范圍。冷凍切片需要一臺具有冷凍功能的切片機。冷凍切片質(zhì)量控制：1. 選取適當?shù)男迈r組織塊，放在冷凍托上，放入冷凍切片機中凍透。2. 修塊、切片。冷凍切片通常厚6～8μm并把切片貼于載玻片上。3. 切片放入固定液中2分鐘。4. 然后快速HE染色。5. 封片、貼標簽后，送診斷室（20分鐘之內(nèi)完成）。HE染色程序及注意事項：1. 組織經(jīng)過石蠟包埋切片后，因含蠟的切片無法進行染色，必須反向脫去切片上組織中的蠟，讓水溶性染料滲入切片中。所以在染色前必須用二甲苯或替換劑進行徹底脫蠟，然后用乙醇洗，最后再用水洗。2. 染色注意事項：a) 配制染液和其他溶液時，要根據(jù)需要和染液的保存期限決定配制數(shù)量。b) 需要保存再用的染液和試劑，必須貼上標簽，注明名稱、濃度、配制日期和用處等，妥善存放。經(jīng)常使用的染液和試劑要經(jīng)常過濾或更換新液。c) 染色器皿須洗滌干凈。必要時用酸洗液處理。將玻璃器皿浸泡于酸洗液中半天至1天，自來水沖洗數(shù)小時，再用洗滌劑刷洗，自來水沖洗數(shù)小時，蒸餾水沖洗后備用。染色是利用染料的不同作用，使組織與染料以不同方式進行結(jié)合。常規(guī)染色是蘇木精和伊紅染色（簡稱HE染色）。特殊染色是根據(jù)診斷的需要對組織中的某些成分進行非常規(guī)的染色。冷凍切片也用HE染色。少量或單個冷凍切片時手工操作比較方便。冷凍切片染染色要求在短時間（10～15分鐘）內(nèi)完成，在保證質(zhì)量的前提下越快越好。切片質(zhì)量控制：1. 診斷人員在接到當日切片并驗收后，檢查、核實所制作的組織學切片的數(shù)量及質(zhì)量，在技術(shù)室送片記錄本或工作流程單上簽字。如發(fā)現(xiàn)切片數(shù)與取材數(shù)不符，應及時與技術(shù)人員聯(lián)系，進行核查。對當天質(zhì)量不好的切片做記錄，指明技術(shù)上存在的缺陷，并于當天交技術(shù)室。2. 技術(shù)室收到切片質(zhì)量記錄，要求在24小時內(nèi)答復，并立即糾正原不足之處。另外，科內(nèi)質(zhì)量管理小組按分工，每月按時間順序復查切片一次，查出問題要采取適當措施于以糾正，并注意落實情況。3. 切片是技術(shù)含量很高的步驟，同一蠟塊，用同一臺切片機，同一把刀，不同的操作者會切出不同質(zhì)量的片子。所以要求：切片刀必須鋒利；切片厚度3～5μm，切片完整，無污染，無皺褶，無刀痕。組織片應貼附在標簽外，剩余玻片的中間。4. 胃鏡、纖維支氣管鏡、穿刺等小活檢組織切片須作連續(xù)性切片，數(shù)量不得少于6張（6～20張）。5. 切片、撈片時應嚴格分塊完成，切忌在水面上殘留上一塊的碎片，以杜絕污染。6. 貼（裱）片時，必須注意蠟塊編號與載玻片上的編號完全一致，杜絕錯誤。7. 切好的白片要進行烤片化蠟?？酒瑴囟葢?0～62℃左右，時間不能少于20分鐘。8. 染色必須按程序操作，染色試劑必須及時過慮或更換。HE染色適中，核、漿分化對比清晰，避免過紅或過藍（注意防止蘇木素渣子和伊紅碎片出現(xiàn)）。9. 切片封固前必須經(jīng)酒精充分脫水，二甲苯透明，濕封。不得用溫箱烤干或電吹風吹得過分干燥，再封片。 10. 蓋玻片使用前必須清洗。（真空包裝除外）。封片時不得有氣泡，不得有樹膠外溢。11. 標簽貼于玻片一側(cè)，編號字跡必須清楚、整齊，且不易褪色，有條件者盡量采用打?。床桓赡z標簽）。12. 染好切片后貼標簽時，編號要與玻片編號一致，杜絕錯誤。13. 制片工作一般應在12～24小時內(nèi)完成。切片完成后交付醫(yī)師時，必須按照記錄當面清點（實行交接班簽字手續(xù) ）。鏡下觀察切片質(zhì)量控制：1. 切片內(nèi)有明顯污染組織，應與技術(shù)人員聯(lián)系，并共同檢查、處理。2. 切片內(nèi)容與送檢組織不符，應分別與技術(shù)人員和取材者聯(lián)系，必要時要與送檢科室聯(lián)系。3. 切片或染色質(zhì)量差，應與技術(shù)人員聯(lián)系，提醒改進工作，必要時重新制片。4. 為充分觀察病變需做深切、連續(xù)切、特染、免疫組化等，應在申請單備注欄或工作流程單上寫出意見、項目并簽名，交付技術(shù)室有關(guān)人員。5. 實行初、中、高三級醫(yī)師閱片把關(guān)責任制，逐級復查，避免差錯及誤、漏診。五、 病理細胞學檢查質(zhì)量控制1. 細胞學檢查是病理診斷最簡便的方法。采取人體體表、體腔及深部臟器組織的脫落物、分泌物、表面附著物或穿刺物進行涂片、染色，觀察其中的細胞形態(tài)，查找癌細胞并做出病理診斷，統(tǒng)稱細胞學檢查。2. 痰查癌細胞：須采用深部新鮮痰。病人晨