【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 抗劑的治療作用是對(duì)M1受體介導(dǎo)的促進(jìn)紋狀體Gpe神經(jīng)元點(diǎn)燃的抑制以及M4受體介導(dǎo)的紋狀體Gpi/黑質(zhì)神經(jīng)元點(diǎn)燃的抑制。雖然這些受體類型可以出現(xiàn)在兩種傳出神經(jīng)元上，但是煙堿型激動(dòng)劑對(duì)cfos表達(dá)的影響作用的研究結(jié)果提示M1受體主要位于紋狀體Gpe神經(jīng)元，而M4受體主要位于紋狀體Gpi/黑質(zhì)神經(jīng)元上[16]。A2A受體刺激紋狀體突觸體釋放Ach是以蛋白激酶A和C介導(dǎo)的方式。在活體內(nèi)[9]和紋狀體腦切片上[21]（那里主要是D2受體介導(dǎo)的抑制Ach釋放）也觀察到了相似的作用，這種作用能完全被CGS21680所阻滯。Ach受體拮抗劑在PD中僅有輕微的治療作用，主要因?yàn)锳2A受體能刺激Ach的釋放，因此A2A受體拮抗劑通過減少Ach的影響能對(duì)這種疾病起輔助的治療。在A2A受體介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)行為下，控制膽堿能遞質(zhì)的完整作用可以通過膽堿能拮抗A2A受體激動(dòng)劑在某些行為學(xué)測(cè)試中的作用得到驗(yàn)證，在單側(cè)黑質(zhì)紋狀體受損害的鼠中，A2A受體激動(dòng)劑能對(duì)抗DA激動(dòng)劑阿樸嗎啡誘發(fā)的旋轉(zhuǎn)行為，這種作用能被阿托品所消除。至少有兩種神經(jīng)遞質(zhì)（GABA和Ach）控制著紋狀體中型棘型傳出神經(jīng)元，這些神經(jīng)遞質(zhì)的釋放是受A2A受體的調(diào)節(jié)。這種活化的受體從紋狀體釋放，抑制GABA的釋放[23]，降低GABA介導(dǎo)的對(duì)這些神經(jīng)元的抑制，有利于平衡D2受體的抑制性影響和谷氨酸和Ach的興奮性影響。因此，通過增加（GABA介導(dǎo)）抑制性傳入（從返回側(cè)枝）使得A2A受體具有降低中型棘型傳出神經(jīng)元活性的作用。這可以部分地代償這些神經(jīng)元D2受體介導(dǎo)的抑制作用的缺失和D1受體介導(dǎo)的GABA釋放的缺失。由此可見，A2A受體拮抗劑的作用是通過增加控制紋狀體Gpe神經(jīng)元的內(nèi)源性負(fù)反饋，從而代償DA介導(dǎo)對(duì)這些細(xì)胞的調(diào)節(jié)的缺乏。其結(jié)果是全面地減少傳出神經(jīng)元的活動(dòng)，這也在前腦啡肽mRNA表達(dá)的下降和膽堿能中間神經(jīng)元GABA介導(dǎo)的抑制性增高上得到了反映。另外，在紋狀體Gpe神經(jīng)元點(diǎn)燃時(shí)可能也有一些作用，而神經(jīng)元失活時(shí)其作用則相當(dāng)小。多巴胺對(duì)直接和間接通路都具有調(diào)節(jié)作用，主要是通過紋狀體Gpi/黑質(zhì)神經(jīng)元上的D1受體和紋狀體Gpe神經(jīng)元上的D2受體來實(shí)現(xiàn)，但是這些神經(jīng)元并不絕對(duì)特異性地表達(dá)這些多巴胺能受體[23]。在沒有多巴胺的情況下，從皮質(zhì)紋狀體神經(jīng)末梢上的D2和D1受體介導(dǎo)谷氨酸釋放的功能就失去了作用，這就會(huì)導(dǎo)致谷氨酸刺激紋狀體神經(jīng)元活動(dòng)的增強(qiáng)[16]。這可能是多巴胺神經(jīng)支配后紋狀體Gpe通路活動(dòng)增強(qiáng)的原因[11]。這一通路活動(dòng)增強(qiáng)還伴隨有這些神經(jīng)元編碼前腦非肽的基因表達(dá)增強(qiáng)[2]。相反，當(dāng)多巴胺神經(jīng)支配和多巴胺受體阻滯時(shí)，在紋狀體Gpi/黑質(zhì)神經(jīng)元編碼前加速素的基因表達(dá)下降[11]，這也反映了紋狀體Gpi/黑質(zhì)通路的活動(dòng)下降和神經(jīng)性多巴胺傳出到這些神經(jīng)元的缺失。因此，多巴胺神經(jīng)支配總的作用是引起兩個(gè)傳出通路活動(dòng)的失平衡，這也在編碼神經(jīng)肽的基因表達(dá)中得到了反映。這種失平衡被認(rèn)為是與PD中運(yùn)動(dòng)功能失調(diào)的基礎(chǔ)。除了上述A2A受體的作用外，這種受體還能降低多巴胺D2受體的親和力以及對(duì)抗D1和D2受體行為學(xué)、基因表達(dá)和第二信使系統(tǒng)[21]的影響作用。總之，缺乏DA情況下，阻滯A2A受體可以糾正紋狀體基因表達(dá)的改變，并通過增加紋狀體Gpe神經(jīng)元的內(nèi)源性抑制作用，從而部分代償由于D2受體介導(dǎo)對(duì)這些神經(jīng)元控制的缺乏。因此，DA缺乏的最終結(jié)果可能由于A2A受體的阻滯而有所緩解。 人類A2A受體對(duì)抗已經(jīng)被做為一個(gè)出發(fā)點(diǎn)來治療干預(yù)減輕帕金森病的相關(guān)措施。這認(rèn)為是可以會(huì)發(fā)生的,至少在部分,可以增加多巴胺神經(jīng)元的敏感性和紋狀體多巴胺的耗竭水平。在此我們提出一種新穎的一系列功能化的triazolo[4,5d]嘧啶衍生物，顯示出對(duì)抗A2A受體的功能。優(yōu)化這些化合物，改進(jìn)其效力，選擇性、和動(dòng)力學(xué)特性而得到一些關(guān)鍵衍生物。通過這些努力我們已經(jīng)一發(fā)現(xiàn)60(V2006 / BIIB014)，顯示出較強(qiáng)的帕金森氏癥的常用模型疾病。此外，該衍生工具的藥效及臨床表現(xiàn)成功完成了第一階段的臨床研究。這種化合物目前在接受進(jìn)一步的臨床評(píng)價(jià)。對(duì)癥治療帕金森疾病需圍繞更換枯竭的大腦中多巴胺，因此一般通過管理多巴胺前體左旋多巴。左旋多巴在大腦中解放出多巴胺與一個(gè)非大腦滲透芳香酶抑制劑，以減少了周圍的副作用發(fā)生率，由于主動(dòng)脈的多巴胺的缺失。這種待遇不盡理想，藥物遭受飄忽不定的藥物動(dòng)力學(xué)、導(dǎo)致出現(xiàn)一些相關(guān)的問題，通過對(duì)藥物進(jìn)行預(yù)測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)如果太少藥物被吸收進(jìn)入大腦，不夠一定級(jí)別的多巴胺達(dá)成，這導(dǎo)致過早的重現(xiàn)帕金森癥狀，被稱為一個(gè)“關(guān)閉事件”。另外，如果太高了，可造成可憐的大腦滲透。稀堿液處理能誘發(fā)不由自主的肌肉運(yùn)動(dòng)，有時(shí)，在極端的情況下會(huì)出現(xiàn)張力，這是令人非常痛苦的，有些則是身體不同的部位發(fā)生肌肉痙攣，使其處于更虛弱的潛在疾病狀態(tài)。既發(fā)生在68%的帕金森癥患者身上，相當(dāng)大的影響生活的質(zhì)量。再者，因?yàn)榉答佉种?，管理水平的增加外源性左旋多巴的結(jié)果會(huì)降低內(nèi)部形成的化合物(內(nèi)源性多巴胺)。因此管理治療最終會(huì)成為適得其反，這要求穩(wěn)步增加劑量來留住的功效。紋狀體多巴胺能不斷變小，最近的證據(jù)表明，腺苷的拮抗劑也許不能純粹為患者減輕帕金森病癥狀(這種方式類似于發(fā)射機(jī)替代療法,如左旋多巴)，但也可以帶來神經(jīng)保護(hù)，減緩疾病的進(jìn)展。引人注目的實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明封鎖A2A受體的小鼠能對(duì)帕金森病表現(xiàn)病變起保護(hù)作用。通過這些發(fā)現(xiàn),拮抗劑已經(jīng)表現(xiàn)出良好的耐受性，口服拮抗劑受體。這些研究最先進(jìn)的是KW 60021[24]，導(dǎo)出一個(gè)黃嘌呤19拮抗劑，最近完成的臨床試驗(yàn)，能緩解帕金森病相關(guān)癥狀，然而，這種化合物無法滿足更大的要求，有報(bào)道進(jìn)一步凸現(xiàn)出一些問題，這樣臨床效用的化合物，包括代謝問題及光化學(xué)穩(wěn)定性以及在固體形態(tài)中的表現(xiàn)形式[20]。KW 60021最近，抗瘧化合物mefloquine 2是一種潛在的和合理的選擇性拮抗，這個(gè)A2A受體如下，我們努力優(yōu)化這種化合物，并找到相關(guān)系列的化合物作為臨床藥物，如下：雖然我們可以準(zhǔn)備衍生物，我們迄今所發(fā)現(xiàn)的這些平行特性的優(yōu)化是一個(gè)相當(dāng)大的挑戰(zhàn)。在此，我們通過在這個(gè)領(lǐng)域的努力，最終，我們發(fā)現(xiàn)一些小分子與一個(gè)側(cè)面最適合臨床的研究[21]。一種拮抗劑的合成路線X=Y=CHX=N，Y=CHX=Y=N通過這條路線，我們用這種藥物中間體來形成新型的A2A受體阻滯劑，研發(fā)出治療帕金森病的新藥物。第2章 實(shí)驗(yàn)部分 main experimental reagent 主要原料 純度 生產(chǎn)廠家 石油醚 分析純 上海萊盈化工有限公司 乙酸乙酯 分析純 上海萊盈化工有限公司 二氯甲烷 分析純 上海萊盈化工有限公司 四氫呋喃 分析純 藥明康德新藥開發(fā)有限公司 甲基叔丁基酯 分析純 上海萊盈化工有限公司 二碳酸二叔丁酯 分析純 上海試劑有限公司 對(duì)苯二甲基酰胺 分析純 藥明康德新藥開發(fā)有限公司 甲醇 分析純 上海萊盈化工有限公司 1,3二溴基丙烷 分析純 北京偶合科技有限公司 三乙胺 分析純 江蘇永華精細(xì)化工有限公司 檸檬酸 分析純 江蘇市江天化工技術(shù)有限公司 乙腈 分析純 上海試劑有限公司 碳酸鉀 分析純 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 硫酸二甲酯 分析純 北京偶合科技有限公司 二氯二氰基苯醌 分析純 北京偶合科技有限公司 硼氫化鈉 分析純 藥明康德新藥開發(fā)有限公司 二氧六環(huán) 分析純 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 氯化鈉 分析純 江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)有限公司 柱層析硅膠 分析純 上海上邦實(shí)業(yè)有限公司 無水硫酸銨 分析純 上海上邦實(shí)業(yè)有限公司 氯仿 分析純 藥明康德新藥開發(fā)有限公司 碳酸鈉 分析純 江蘇永華精細(xì)化工有限公司 鄰碘苯甲酸 分析純 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司Table main experimental apparatus 儀器或設(shè)備 型號(hào) 生產(chǎn)廠家電熱恒溫水浴鍋 DK98II 天津市泰斯特儀器有限公司電子天平 CP214 奧豪斯儀器（上海）有限公司旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 RE201D 上海貝凱生物化工有限公司核磁共振儀 SPRXI/400MZ 珀金埃爾默儀器(上海)有限公司液相色譜質(zhì)譜儀 1100 LC/MSD Trap 美國(guó) Agilent 油浴鍋 HH201 南京予凱儀器設(shè)備有限公司 1 2（無水四氫呋喃）溶劑溶解，然后加入Boc酸酐144ml（二碳酸二叔丁酯），最后加入三乙胺150ml，用油浴鍋保持溫度50度反應(yīng)16個(gè)小時(shí)，在時(shí)間到達(dá)后，點(diǎn)板測(cè)試反應(yīng)已完全，對(duì)反應(yīng)進(jìn)行后處理，開始用旋蒸儀旋去THF，因?yàn)槔锩婧幸徊糠秩野?，最后用油泵拉干，樣品成粘稠狀，拉干后用EA（乙酸乙酯）和水將其溶解，選取三升的分液漏斗用乙酸乙酯和水萃取三次，然后有機(jī)相再用飽和鹽水萃取用于除去水分，萃取完成后用無水硫酸鈉干燥，然后再旋干，旋干后稱取質(zhì)量，用二氯甲烷進(jìn)行拌樣，（硅膠為100200目），旋干，樣品呈淡黃色固體，留樣，然后選取中型柱子，進(jìn)行裝柱，加入硅膠1千克，用石油醚溶解裝入柱子，再加入石油醚打開柱子旋塞讓其流動(dòng)，使硅膠裝實(shí)，待