【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 伍后毒性成分的指紋圖譜及量毒關(guān)系；研究“諸參辛芍叛藜蘆”配伍致毒/增毒的化學(xué)實(shí)質(zhì)；明確藥物配伍在體外發(fā)生的化學(xué)成分變化，發(fā)現(xiàn)藥物進(jìn)入體內(nèi)后藥物發(fā)生的代謝物變化。進(jìn)一步利用毒性快速篩查技術(shù)、潛在毒性發(fā)現(xiàn)技術(shù)等進(jìn)行毒性確認(rèn)，最終明確相反配伍致毒/增毒的物質(zhì)基礎(chǔ)。3.、“諸參辛芍”與藜蘆配伍的前后的量毒時(shí)效關(guān)系研究以藥物體內(nèi)ADME各環(huán)節(jié)為研究重點(diǎn)，以人參藜蘆配伍組合作為研究范例，進(jìn)行體內(nèi)過(guò)程研究，對(duì)人參藜蘆配伍多成分的體內(nèi)過(guò)程進(jìn)行同步定量分析，構(gòu)建體內(nèi)外物質(zhì)的關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)，系統(tǒng)研究人參藜蘆配伍前后化學(xué)成分吸收特點(diǎn)，分布規(guī)律、代謝轉(zhuǎn)化、毒效物質(zhì)排泄及蓄積致毒等，探討人參藜蘆配伍前后體內(nèi)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的差異，闡明其體內(nèi)作用物質(zhì)與毒性的關(guān)系。4. 、“諸參辛芍”與藜蘆配伍的致毒/增毒物質(zhì)生物學(xué)機(jī)制研究 采用分子生物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、現(xiàn)代色譜分析和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，對(duì)藜蘆中典型毒性成分的代謝特征進(jìn)行動(dòng)態(tài)性觀察，找到受調(diào)控的P450酶及對(duì)藜蘆有毒中藥成分代謝影響及其與毒性效應(yīng)的機(jī)制；利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)尋找并確定“諸參辛芍叛藜蘆”中反藥組合相互作用后與藥物毒性成分發(fā)揮作用相關(guān)的肝臟代謝、信號(hào)通路及轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中蛋白質(zhì)組的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程，尋找配伍藥物毒效成分的體內(nèi)作用靶點(diǎn)及診斷標(biāo)志物，從分子水平揭示藜蘆配伍致毒規(guī)律，進(jìn)而系統(tǒng)揭示“諸參辛芍叛藜蘆”配伍藥物相互作用可能機(jī)制。為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。預(yù)期目標(biāo)通過(guò)安全性評(píng)價(jià)體系的建立與毒性評(píng)價(jià)，構(gòu)建基于PXR～CYP3A通路的細(xì)胞篩選模型，從動(dòng)物和細(xì)胞兩個(gè)層面建立“諸參辛芍叛藜蘆”各單藥及與藜蘆配伍后毒性成分的毒效關(guān)系，明確回答“諸參辛芍叛藜蘆”配伍反與不反；揭示“諸參辛芍叛藜蘆”配伍組合致毒/增毒物質(zhì)基礎(chǔ)。通過(guò)現(xiàn)代色譜技術(shù)研究十八反中“諸參辛芍叛藜蘆”的物質(zhì)基礎(chǔ)，并建立相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)；闡明“諸參辛芍”與藜蘆配伍前后的量毒時(shí)效關(guān)系，確定不同配比不同劑量下LD50、MTD參數(shù)的變化，確定有毒藥物的安全劑量范圍，提出各反藥配伍組合的毒性動(dòng)態(tài)變化范圍；選擇代表性配伍組合作為研究范例，進(jìn)行體內(nèi)過(guò)程研究，闡明其配伍前后體內(nèi)動(dòng)力學(xué)參數(shù)差異，明確其體內(nèi)過(guò)程，闡明其體內(nèi)作用物質(zhì)與毒性的關(guān)系。闡明“諸參辛芍叛藜蘆”配伍組合的相互作用和分子機(jī)制。通過(guò)在酶活性水平建立毒性評(píng)價(jià)技術(shù)平臺(tái)和蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，從分子和蛋白水平上揭示“十八反”配伍藥物相互作用的可能機(jī)制；在國(guó)內(nèi)外學(xué)術(shù)核心期刊發(fā)表論文15–20篇，其中SCI收錄5篇以上；培養(yǎng)博士后4名，博士研究生5名，碩士研究生10名。 通過(guò)安全性評(píng)價(jià)體系的建立與毒性評(píng)價(jià)，構(gòu)建基于PXR～CYP3A通路的細(xì)胞篩選模型，從動(dòng)物和細(xì)胞兩個(gè)層面建立“諸參辛芍叛藜蘆”各單藥及與藜蘆配伍后毒性成分的毒效關(guān)系，明確回答“諸參辛芍叛藜蘆”配伍反與不反。揭示“諸參辛芍叛藜蘆”配伍組合致毒/增毒物質(zhì)基礎(chǔ)。通過(guò)UPLCQTOF技術(shù)研究十八反中“諸參辛芍叛藜蘆”的物質(zhì)基礎(chǔ)研究并建立相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)。闡明“諸參辛芍”與與藜蘆配伍的前后的量毒效關(guān)系，確定不同配比不同劑量下LD50、MTD參數(shù)的變化，確定有毒藥物的安全劑量范圍，提出各藥對(duì)的毒性動(dòng)態(tài)變化范圍。以人參藜蘆藥對(duì)作為研究范例，進(jìn)行體內(nèi)過(guò)程研究，闡明人參藜蘆配伍前后體內(nèi)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的差異，明確其體內(nèi)過(guò)程，闡明其體內(nèi)作用物質(zhì)與毒性的關(guān)系。闡明“諸參辛芍叛藜蘆”配伍組合的相互作用和分子機(jī)制。通過(guò)在酶活性水平、mRNA水平和蛋白水平建立基于P450酶的中藥毒性評(píng)價(jià)技術(shù)平臺(tái)和蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù) 尋找“諸參辛芍叛藜蘆”單獨(dú)或配對(duì)使用對(duì)P450酶及其他肝臟蛋白質(zhì)豐度、翻譯后修飾狀態(tài)的改變，并確定其詳細(xì)的修飾位點(diǎn)。從分子和蛋白水平上進(jìn)一步探討“十八反”配伍藥物相互作用的可能機(jī)制。研究成果將以論文形式在國(guó)際、國(guó)內(nèi)重要學(xué)術(shù)刊物上發(fā)表有價(jià)值的學(xué)術(shù)論文1520篇，其中SCI論文5篇以上，并總結(jié)申報(bào)軍隊(duì)國(guó)家級(jí)科技獎(jiǎng)勵(lì)。培養(yǎng)4名博士后，博士研究生5名，碩士研究生10名。承擔(dān)單位：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所 北京蛋白質(zhì)組研究中心負(fù) 責(zé) 人：王宇光 副研究員科研骨干：馬增春 副研究員 梁乾德 副研究員 郝運(yùn)偉 副研究員 孫愛(ài)華 副研究員經(jīng)費(fèi)比例：16%課題五 基于妨害治療的中藥“十八反”配伍基礎(chǔ)研究主要研究?jī)?nèi)容圍繞項(xiàng)目總體目標(biāo)，以中醫(yī)藥配伍理論為指導(dǎo)、歷代臨床用藥經(jīng)驗(yàn)為參考、前期研究為基礎(chǔ)為依托，從妨害治療的角度研究中藥“十八反”配伍禁忌。通過(guò)文獻(xiàn)挖掘和知識(shí)發(fā)現(xiàn)尋找中藥“十八反”配伍應(yīng)用時(shí)影響相反組對(duì)（或方劑）內(nèi)藥物療效的數(shù)據(jù)信息及潛在規(guī)律；在病理生理?xiàng)l件下評(píng)估“十八反”代表性反藥藥對(duì)配伍組合及其含相反藥對(duì)方劑是否存在干擾、改變、降低或消除藥效的作用，探索影響因素；考察相關(guān)藥對(duì)反藥配伍前后化學(xué)成分的變化規(guī)律及體內(nèi)相互作用過(guò)程，研究相反配伍妨害療效的作用機(jī)理和生物學(xué)基礎(chǔ)。以此闡述“中藥藥對(duì)兩藥配伍使用時(shí)即使既使不發(fā)生毒牲性增強(qiáng)現(xiàn)象也不等于安全有效，妨害治療的藥物也不適宜相互配合使用”的學(xué)術(shù)觀點(diǎn)，為十八反配伍禁忌的新涵義的認(rèn)識(shí)提供科學(xué)依據(jù)，最終從妨害治療角度揭示中藥“十八反”反與不反、如何反以及為什么反的科學(xué)內(nèi)涵?！笆朔础迸湮榉梁χ委熥饔玫奈墨I(xiàn)挖掘中藥十八反是傳統(tǒng)的中藥配伍禁忌，“相反配伍將致毒性增強(qiáng)或產(chǎn)生劇烈毒性”相沿成為十八反的主要涵義。然而，古人對(duì)于相反涵義還存在著另外一種認(rèn)識(shí)，《本草衍義補(bǔ)遺》稱：“(人參)與藜蘆相反，若服一兩參，入藜蘆一錢，其一兩參虛費(fèi)矣！戒之！”，其他醫(yī)家也有類似這種“相反藥物配伍藥效抵消”的見(jiàn)解。我們前期的實(shí)驗(yàn)研究證明：有的相反組對(duì)（或在方劑中）可能干擾或妨害組對(duì)內(nèi)藥物的某些藥效。為了提供相關(guān)妨害治療研究的理論基礎(chǔ)，本課題擬較全面收集梳理十八反中藥配伍禁忌的古今文獻(xiàn)，基于梳理并提取歷代醫(yī)家、對(duì)“十八反”中藥的臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)代名家醫(yī)案、臨床報(bào)道、醫(yī)院處方和實(shí)驗(yàn)研究中有關(guān)“十八反”中藥物質(zhì)基礎(chǔ)、療效及藥理效應(yīng)、毒性等妨害治療的相關(guān)信息，通過(guò)數(shù)據(jù)挖掘和知識(shí)發(fā)現(xiàn)尋找其潛在規(guī)律。同時(shí)，分析藥物性味歸經(jīng)、升降沉浮等屬性與劑量比例、功效特點(diǎn)、毒性反應(yīng)的配伍關(guān)系，探索“十八反”中藥區(qū)別于其他中藥和藥對(duì)的特殊屬性?！笆朔础迸湮榉梁χ委熥饔玫乃幮W(xué)評(píng)價(jià)研究利用能較準(zhǔn)確、客觀反映臨床實(shí)際的動(dòng)物模型及藥效指標(biāo)，觀察“十八反”代表性藥對(duì)配伍組合及其含相反藥對(duì)對(duì)模型動(dòng)物藥效的干預(yù)影響，評(píng)估相反組對(duì)（或和復(fù)方劑）在病理生理?xiàng)l件下是否存在干擾或妨害組對(duì)內(nèi)藥物的某些藥效作用，探索其可能的影響因素。“十八反”配伍妨害治療作用的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)研究采用化學(xué)組學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)、藥物代謝組學(xué)研究方法，考察“十八反”配伍前后體外化學(xué)成分的變化規(guī)律及配伍對(duì)入體成分的吸收、分布、代謝、排泄的影響，明確“十八反”代表性組對(duì)配伍妨害藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)?！笆朔础迸湮榉梁χ委熥饔玫纳飳W(xué)基礎(chǔ)研究根據(jù)上述研究結(jié)果或結(jié)論選擇相應(yīng)的動(dòng)物模型和細(xì)胞模型，結(jié)合形態(tài)和功能，從整體、器官、細(xì)胞、分子和基因等不同層次考察配伍藥物或相關(guān)成分產(chǎn)生妨害治療作用的主要藥理機(jī)理和部分生物學(xué)機(jī)制。預(yù)期目標(biāo)完成研究代表性“十八反”配伍組合的妨害效應(yīng)研究，探索妨害治療的存在條件，從妨害治療角度闡明闡述“十八反”的配伍減效機(jī)制；揭示“十八反”配伍妨害效應(yīng)的化學(xué)實(shí)質(zhì)及其相互作用規(guī)律，并闡明妨害效應(yīng)的生物學(xué)基礎(chǔ)；闡明代表性“十八反”配伍組合及其方劑妨害治療的理論基礎(chǔ)。在國(guó)內(nèi)外學(xué)術(shù)核心期刊發(fā)表論文15–20篇，其中SCI收錄5篇以上；培養(yǎng)博士后12名，博士研究生35名，碩士研究生810名。國(guó)內(nèi)外學(xué)術(shù)期刊發(fā)表研究論文20~25篇，其中被SCI收錄5~10篇。培養(yǎng)博士后1~2名，博士研究生3~5名，碩士研究生8~10名。承擔(dān)單位：中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 中科院長(zhǎng)春應(yīng)化所負(fù) 責(zé) 人：林 娜 研究員科研骨干：劉志強(qiáng) 研究員 彭春龍 研究員 宋鳳瑞 教授 隋峰 副研究員經(jīng)費(fèi)比例：16%課題六 基于臨床應(yīng)用的中藥”“十八反””宜忌條件及配伍關(guān)系研究主要研究?jī)?nèi)容從文獻(xiàn)研究方面分析評(píng)價(jià)中藥“十八反”配伍臨床應(yīng)用的療效和安全性（1）“十八反”配伍及其方劑的臨床應(yīng)用范圍及文獻(xiàn)特征分析。從現(xiàn)代臨床研究文獻(xiàn)的角度，鑒定探討是否存在“十八反”反藥藥對(duì)配伍組合的臨床使用情況，再進(jìn)一步分析“十八反”藥對(duì)配伍組合、劑量及其方劑的臨床應(yīng)用范圍（病證及分布趨勢(shì)）、特定適用對(duì)象及使用條件。從現(xiàn)代臨床研究的角度反映“十八反”藥對(duì)配伍組合及其方劑的臨床治療應(yīng)用的情況現(xiàn)狀。探索“十八反”藥對(duì)及其方劑治療腫瘤臨床研究文獻(xiàn)中使用現(xiàn)狀、配對(duì)規(guī)律、使用劑量、適用病癥的關(guān)聯(lián)性。（2）從文獻(xiàn)角度進(jìn)行“十八反”配伍及其方劑的治療性臨床研究的療效和安全性的評(píng)價(jià)。本著循證醫(yī)學(xué)系統(tǒng)評(píng)價(jià)的思想，根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的臨床研究文獻(xiàn)，系統(tǒng)地評(píng)價(jià)“十八反”藥對(duì)配伍組合及其方劑在臨床治療領(lǐng)域的療效和安全性，為“十八反”藥物使用宜忌的基礎(chǔ)研究及進(jìn)一步的臨床應(yīng)用研究提供證據(jù)。從實(shí)驗(yàn)研究方面，以相關(guān)疾病模型為載體，方藥結(jié)合研究中藥“十八反”配伍應(yīng)用的宜忌條件（1）以古方海藻玉壺湯為切入點(diǎn)，基于臨床用藥特點(diǎn)，設(shè)計(jì)特定的病理模型，從方藥結(jié)合的角度，探討不同給藥劑量、配伍比例等因素對(duì)方中“十八反”藥對(duì)配伍組合（海藻與甘草）生物效應(yīng)的影響，探索其用藥特點(diǎn)及規(guī)律。2010年版《中國(guó)藥典一部》中記載的海藻功能主治是“消痰軟堅(jiān)散結(jié)，利水消腫。用于癭瘤，瘰疬，睪丸腫痛，痰飲水腫”，因此，選擇反映藥物功效，又有臨床基礎(chǔ)海藻玉壺湯為切入點(diǎn)，研究海藻和甘草配伍應(yīng)用的宜忌條件。本課題選擇甲狀腺腫大動(dòng)物模型，通過(guò)研究海藻玉壺湯中，海藻和甘草在不同給藥劑量、不同劑量配比、不同炮制品種等條件下，對(duì)模型動(dòng)物的一般生理、血液生化指標(biāo)以及組織器官的影響，探討基于臨床應(yīng)用的海藻與甘草配伍對(duì)動(dòng)物機(jī)體生物效應(yīng)影響的宜忌條件，選擇具有顯著效果的配伍條件組合，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步從甲狀腺合成、儲(chǔ)存、釋放、調(diào)控等方面進(jìn)行藥效機(jī)制的研究，并從整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和離體實(shí)驗(yàn)兩個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行毒性機(jī)制的探討，以期闡明海藻玉壺湯臨床應(yīng)用的宜忌條件和作用規(guī)律。（2）以古方甘遂半夏湯為切入點(diǎn)，基于臨床用藥特點(diǎn)，設(shè)計(jì)特定的病理模型，從方藥結(jié)合的角度，探討不同給藥劑量、炮制品種、給藥次數(shù)、配伍比例、給藥劑型等因素對(duì)方中“十八反”藥對(duì)配伍組合（甘遂與甘草）生物效應(yīng)的影響，探索其用藥特點(diǎn)及規(guī)律。2010年版藥典中記載甘遂的功能主治是“瀉水逐飲，消腫散結(jié)。用于水腫脹滿，胸腹積水，痰飲積聚，氣逆咳喘，二便不利，風(fēng)痰癲癇，癰腫瘡毒”。因此，選擇反映甘遂的主要功效瀉水逐飲，又有臨床基礎(chǔ)的名方甘遂半夏湯作為切入點(diǎn)，研究甘遂和甘草的配伍宜忌條件。本課題選擇腹水模型反映其臨床應(yīng)用“攻逐水飲”的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)相關(guān)試驗(yàn)