【文章內容簡介】 伍后毒性成分的指紋圖譜及量毒關系；研究“諸參辛芍叛藜蘆”配伍致毒/增毒的化學實質；明確藥物配伍在體外發(fā)生的化學成分變化，發(fā)現(xiàn)藥物進入體內后藥物發(fā)生的代謝物變化。進一步利用毒性快速篩查技術、潛在毒性發(fā)現(xiàn)技術等進行毒性確認，最終明確相反配伍致毒/增毒的物質基礎。3.、“諸參辛芍”與藜蘆配伍的前后的量毒時效關系研究以藥物體內ADME各環(huán)節(jié)為研究重點，以人參藜蘆配伍組合作為研究范例，進行體內過程研究，對人參藜蘆配伍多成分的體內過程進行同步定量分析，構建體內外物質的關聯(lián)網絡，系統(tǒng)研究人參藜蘆配伍前后化學成分吸收特點，分布規(guī)律、代謝轉化、毒效物質排泄及蓄積致毒等，探討人參藜蘆配伍前后體內動力學參數的差異，闡明其體內作用物質與毒性的關系。4. 、“諸參辛芍”與藜蘆配伍的致毒/增毒物質生物學機制研究 采用分子生物學、蛋白質組學、現(xiàn)代色譜分析和液質聯(lián)用技術，對藜蘆中典型毒性成分的代謝特征進行動態(tài)性觀察，找到受調控的P450酶及對藜蘆有毒中藥成分代謝影響及其與毒性效應的機制；利用蛋白質組學技術尋找并確定“諸參辛芍叛藜蘆”中反藥組合相互作用后與藥物毒性成分發(fā)揮作用相關的肝臟代謝、信號通路及轉錄調控網絡中蛋白質組的動態(tài)變化過程，尋找配伍藥物毒效成分的體內作用靶點及診斷標志物，從分子水平揭示藜蘆配伍致毒規(guī)律，進而系統(tǒng)揭示“諸參辛芍叛藜蘆”配伍藥物相互作用可能機制。為臨床合理用藥提供理論依據。預期目標通過安全性評價體系的建立與毒性評價，構建基于PXR～CYP3A通路的細胞篩選模型，從動物和細胞兩個層面建立“諸參辛芍叛藜蘆”各單藥及與藜蘆配伍后毒性成分的毒效關系，明確回答“諸參辛芍叛藜蘆”配伍反與不反；揭示“諸參辛芍叛藜蘆”配伍組合致毒/增毒物質基礎。通過現(xiàn)代色譜技術研究十八反中“諸參辛芍叛藜蘆”的物質基礎，并建立相應的數據庫；闡明“諸參辛芍”與藜蘆配伍前后的量毒時效關系，確定不同配比不同劑量下LD50、MTD參數的變化，確定有毒藥物的安全劑量范圍，提出各反藥配伍組合的毒性動態(tài)變化范圍；選擇代表性配伍組合作為研究范例，進行體內過程研究，闡明其配伍前后體內動力學參數差異，明確其體內過程，闡明其體內作用物質與毒性的關系。闡明“諸參辛芍叛藜蘆”配伍組合的相互作用和分子機制。通過在酶活性水平建立毒性評價技術平臺和蛋白質組學技術，從分子和蛋白水平上揭示“十八反”配伍藥物相互作用的可能機制；在國內外學術核心期刊發(fā)表論文15–20篇，其中SCI收錄5篇以上；培養(yǎng)博士后4名，博士研究生5名，碩士研究生10名。 通過安全性評價體系的建立與毒性評價，構建基于PXR～CYP3A通路的細胞篩選模型，從動物和細胞兩個層面建立“諸參辛芍叛藜蘆”各單藥及與藜蘆配伍后毒性成分的毒效關系，明確回答“諸參辛芍叛藜蘆”配伍反與不反。揭示“諸參辛芍叛藜蘆”配伍組合致毒/增毒物質基礎。通過UPLCQTOF技術研究十八反中“諸參辛芍叛藜蘆”的物質基礎研究并建立相應的數據庫。闡明“諸參辛芍”與與藜蘆配伍的前后的量毒效關系，確定不同配比不同劑量下LD50、MTD參數的變化，確定有毒藥物的安全劑量范圍，提出各藥對的毒性動態(tài)變化范圍。以人參藜蘆藥對作為研究范例，進行體內過程研究，闡明人參藜蘆配伍前后體內動力學參數的差異，明確其體內過程，闡明其體內作用物質與毒性的關系。闡明“諸參辛芍叛藜蘆”配伍組合的相互作用和分子機制。通過在酶活性水平、mRNA水平和蛋白水平建立基于P450酶的中藥毒性評價技術平臺和蛋白質組學技術 尋找“諸參辛芍叛藜蘆”單獨或配對使用對P450酶及其他肝臟蛋白質豐度、翻譯后修飾狀態(tài)的改變，并確定其詳細的修飾位點。從分子和蛋白水平上進一步探討“十八反”配伍藥物相互作用的可能機制。研究成果將以論文形式在國際、國內重要學術刊物上發(fā)表有價值的學術論文1520篇，其中SCI論文5篇以上，并總結申報軍隊國家級科技獎勵。培養(yǎng)4名博士后，博士研究生5名，碩士研究生10名。承擔單位：軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所 北京蛋白質組研究中心負 責 人：王宇光 副研究員科研骨干：馬增春 副研究員 梁乾德 副研究員 郝運偉 副研究員 孫愛華 副研究員經費比例：16%課題五 基于妨害治療的中藥“十八反”配伍基礎研究主要研究內容圍繞項目總體目標，以中醫(yī)藥配伍理論為指導、歷代臨床用藥經驗為參考、前期研究為基礎為依托，從妨害治療的角度研究中藥“十八反”配伍禁忌。通過文獻挖掘和知識發(fā)現(xiàn)尋找中藥“十八反”配伍應用時影響相反組對（或方劑）內藥物療效的數據信息及潛在規(guī)律；在病理生理條件下評估“十八反”代表性反藥藥對配伍組合及其含相反藥對方劑是否存在干擾、改變、降低或消除藥效的作用，探索影響因素；考察相關藥對反藥配伍前后化學成分的變化規(guī)律及體內相互作用過程，研究相反配伍妨害療效的作用機理和生物學基礎。以此闡述“中藥藥對兩藥配伍使用時即使既使不發(fā)生毒牲性增強現(xiàn)象也不等于安全有效，妨害治療的藥物也不適宜相互配合使用”的學術觀點，為十八反配伍禁忌的新涵義的認識提供科學依據，最終從妨害治療角度揭示中藥“十八反”反與不反、如何反以及為什么反的科學內涵。“十八反”配伍妨害治療作用的文獻挖掘中藥十八反是傳統(tǒng)的中藥配伍禁忌，“相反配伍將致毒性增強或產生劇烈毒性”相沿成為十八反的主要涵義。然而，古人對于相反涵義還存在著另外一種認識，《本草衍義補遺》稱：“(人參)與藜蘆相反，若服一兩參，入藜蘆一錢，其一兩參虛費矣！戒之！”，其他醫(yī)家也有類似這種“相反藥物配伍藥效抵消”的見解。我們前期的實驗研究證明：有的相反組對（或在方劑中）可能干擾或妨害組對內藥物的某些藥效。為了提供相關妨害治療研究的理論基礎，本課題擬較全面收集梳理十八反中藥配伍禁忌的古今文獻，基于梳理并提取歷代醫(yī)家、對“十八反”中藥的臨床實踐經驗，現(xiàn)代名家醫(yī)案、臨床報道、醫(yī)院處方和實驗研究中有關“十八反”中藥物質基礎、療效及藥理效應、毒性等妨害治療的相關信息，通過數據挖掘和知識發(fā)現(xiàn)尋找其潛在規(guī)律。同時，分析藥物性味歸經、升降沉浮等屬性與劑量比例、功效特點、毒性反應的配伍關系，探索“十八反”中藥區(qū)別于其他中藥和藥對的特殊屬性?！笆朔础迸湮榉梁χ委熥饔玫乃幮W評價研究利用能較準確、客觀反映臨床實際的動物模型及藥效指標，觀察“十八反”代表性藥對配伍組合及其含相反藥對對模型動物藥效的干預影響，評估相反組對（或和復方劑）在病理生理條件下是否存在干擾或妨害組對內藥物的某些藥效作用，探索其可能的影響因素?！笆朔础迸湮榉梁χ委熥饔玫幕瘜W物質基礎研究采用化學組學、藥代動力學、藥物代謝組學研究方法，考察“十八反”配伍前后體外化學成分的變化規(guī)律及配伍對入體成分的吸收、分布、代謝、排泄的影響，明確“十八反”代表性組對配伍妨害藥效的物質基礎。“十八反”配伍妨害治療作用的生物學基礎研究根據上述研究結果或結論選擇相應的動物模型和細胞模型，結合形態(tài)和功能，從整體、器官、細胞、分子和基因等不同層次考察配伍藥物或相關成分產生妨害治療作用的主要藥理機理和部分生物學機制。預期目標完成研究代表性“十八反”配伍組合的妨害效應研究，探索妨害治療的存在條件，從妨害治療角度闡明闡述“十八反”的配伍減效機制；揭示“十八反”配伍妨害效應的化學實質及其相互作用規(guī)律，并闡明妨害效應的生物學基礎；闡明代表性“十八反”配伍組合及其方劑妨害治療的理論基礎。在國內外學術核心期刊發(fā)表論文15–20篇，其中SCI收錄5篇以上；培養(yǎng)博士后12名，博士研究生35名，碩士研究生810名。國內外學術期刊發(fā)表研究論文20~25篇，其中被SCI收錄5~10篇。培養(yǎng)博士后1~2名，博士研究生3~5名，碩士研究生8~10名。承擔單位：中國中醫(yī)科學院 中科院長春應化所負 責 人：林 娜 研究員科研骨干：劉志強 研究員 彭春龍 研究員 宋鳳瑞 教授 隋峰 副研究員經費比例：16%課題六 基于臨床應用的中藥”“十八反””宜忌條件及配伍關系研究主要研究內容從文獻研究方面分析評價中藥“十八反”配伍臨床應用的療效和安全性（1）“十八反”配伍及其方劑的臨床應用范圍及文獻特征分析。從現(xiàn)代臨床研究文獻的角度，鑒定探討是否存在“十八反”反藥藥對配伍組合的臨床使用情況，再進一步分析“十八反”藥對配伍組合、劑量及其方劑的臨床應用范圍（病證及分布趨勢）、特定適用對象及使用條件。從現(xiàn)代臨床研究的角度反映“十八反”藥對配伍組合及其方劑的臨床治療應用的情況現(xiàn)狀。探索“十八反”藥對及其方劑治療腫瘤臨床研究文獻中使用現(xiàn)狀、配對規(guī)律、使用劑量、適用病癥的關聯(lián)性。（2）從文獻角度進行“十八反”配伍及其方劑的治療性臨床研究的療效和安全性的評價。本著循證醫(yī)學系統(tǒng)評價的思想，根據已經發(fā)表的臨床研究文獻，系統(tǒng)地評價“十八反”藥對配伍組合及其方劑在臨床治療領域的療效和安全性，為“十八反”藥物使用宜忌的基礎研究及進一步的臨床應用研究提供證據。從實驗研究方面，以相關疾病模型為載體，方藥結合研究中藥“十八反”配伍應用的宜忌條件（1）以古方海藻玉壺湯為切入點，基于臨床用藥特點，設計特定的病理模型，從方藥結合的角度，探討不同給藥劑量、配伍比例等因素對方中“十八反”藥對配伍組合（海藻與甘草）生物效應的影響，探索其用藥特點及規(guī)律。2010年版《中國藥典一部》中記載的海藻功能主治是“消痰軟堅散結，利水消腫。用于癭瘤，瘰疬，睪丸腫痛，痰飲水腫”，因此，選擇反映藥物功效，又有臨床基礎海藻玉壺湯為切入點，研究海藻和甘草配伍應用的宜忌條件。本課題選擇甲狀腺腫大動物模型，通過研究海藻玉壺湯中，海藻和甘草在不同給藥劑量、不同劑量配比、不同炮制品種等條件下，對模型動物的一般生理、血液生化指標以及組織器官的影響，探討基于臨床應用的海藻與甘草配伍對動物機體生物效應影響的宜忌條件，選擇具有顯著效果的配伍條件組合，根據實驗結果進一步從甲狀腺合成、儲存、釋放、調控等方面進行藥效機制的研究，并從整體動物實驗和離體實驗兩個環(huán)節(jié)進行毒性機制的探討，以期闡明海藻玉壺湯臨床應用的宜忌條件和作用規(guī)律。（2）以古方甘遂半夏湯為切入點，基于臨床用藥特點，設計特定的病理模型，從方藥結合的角度，探討不同給藥劑量、炮制品種、給藥次數、配伍比例、給藥劑型等因素對方中“十八反”藥對配伍組合（甘遂與甘草）生物效應的影響，探索其用藥特點及規(guī)律。2010年版藥典中記載甘遂的功能主治是“瀉水逐飲，消腫散結。用于水腫脹滿，胸腹積水，痰飲積聚，氣逆咳喘，二便不利，風痰癲癇，癰腫瘡毒”。因此，選擇反映甘遂的主要功效瀉水逐飲，又有臨床基礎的名方甘遂半夏湯作為切入點，研究甘遂和甘草的配伍宜忌條件。本課題選擇腹水模型反映其臨床應用“攻逐水飲”的特點，設計相關試驗