【文章內容簡介】 液中，只有FSH 能影響卵母細胞的成熟，而LH 沒有作用；Bevers 等認為小于8mm 的牛卵泡中，顆粒細胞上只有FSH 受體mRNA，而沒有LH 受體mRNA。但彭禮繁等卻認為LH 對豬卵母細胞體外成熟的促進效果要強于FSH。在早期的研究中，促性腺激素多數存在于整個體外培養(yǎng)過程，但1994 年，Funashi 等的研究表明，在豬卵母細胞IVM 時，培養(yǎng)前20 h 加入PMSG、hCG、E2，而在培養(yǎng)后20 h 去除，可增加卵母細胞的成熟率，同時可以促進卵母細胞減數分裂和胞質的成熟，而且有利于卵母細胞的發(fā)育和受精。蔡令波等在培養(yǎng)后期去除促性腺激素也得出了相似結果。自20 世紀80 年代血清應用于卵母細胞的體外成熟培養(yǎng)以來，血清在卵母細胞體外成熟培養(yǎng)的作用逐漸被發(fā)現并利用，血清中含有許多成分包括能量物質、氨基酸、維生素、激素、生長因子和細胞因子等等能夠促進原始卵泡卵母細胞生長啟動，并提供生長所需的一種或幾種因子，因而，培養(yǎng)液中添加動物血清可促進卵母細胞成熟。在豬卵母細胞體外培養(yǎng)中，用得最廣泛的是在成熟培養(yǎng)液中添加10%的胎牛血清（Fetal bovine serum，FBS）。蔡令波等曾研究表明發(fā)情牛血清（Estrus cows serum，ECS）較新生犢牛血清（Newborn Calf Serum，NCS）更有利于豬卵母細胞體外成熟。近年來，許多研究者又在豬的卵母細胞成熟培養(yǎng)液中添加一定比例的豬血清，其中包括:新生仔豬血清，母豬發(fā)情的血清等。雖然血清對于豬卵母細胞的體外培養(yǎng)有較好的促進作用，但是血清也有其本身固有的不利因素，如血清中所含有的激素、維生素、細胞因子、生長因子，以及許多未知物質，并且容易被支原體感染。此外血清的來源不同、批次不同均會導致血清中所含組分及組分間比例不同，從而導致了卵母細胞體外成熟、體外受精和體外培養(yǎng)的不穩(wěn)定。因此，尋找比較適宜的血清替代品成為當前的一大研究熱點，目前用來代替血清的替代品有牛血清白蛋白(Bovine SerumAlbumin ， BSA) 、聚乙烯醇(Polyvinyl Alcohol ， PVA) 、聚乙烯毗咯烷酮(polyvinylpyrrolidone，PVP)等大分子有機物質。豬卵泡液(pig follicular fluid，pFF)是豬卵母細胞發(fā)育的微環(huán)境，對卵母細胞的成熟有著重要的調節(jié)作用，主要表現在提高豬卵母細胞成熟的質量并增加胚胎的發(fā)育能力。Naito 等[xlv]的研究認為：在體外成熟培養(yǎng)中，PFF 可以促進豬卵母細胞胞質的成熟，并顯著提高豬卵母細胞受精后的原核形成率。Yashida 等報道在成熟培養(yǎng)基中添加豬卵泡液可顯著提高豬卵母細胞的核成熟率、正常受精率及卵裂率。Vatzias 等研究發(fā)現冷凍卵泡液在促進卵母細胞的成熟、降低多精受精方面優(yōu)于新鮮卵泡液，孟慶剛等認為在激素存在的條件下，pFF 具有促進豬小腔卵泡卵母細胞體外成熟的作用。與卵母細胞體外成熟相關的細胞生長因子主要包括表皮生長因子(Epidermal growth factor，EGF)，胰島素樣生長因子(insulinlike growth factors，IGF)、成纖維細胞生長因子(Fibroblast Growth Factor，FGF)、轉化生長因子(transforming growth factor，TGF )及神經生長因子(nerve growth factor，NGF)等，這些細胞生長因子之間相互作用，對卵母細胞的成熟、受精與卵裂起著重要作用。目前已經證實，EGF 可以促進豬卵母細胞的核成熟。Abeydeera的研究表明，EGF 能提高卵母細胞成熟過程中蛋白質的合成，從而提高卵母細胞胞質的質量，IGF 對細胞具有促分裂、分化及促代謝等生物學功能，是一個具有多種生理功能的生長因子，因此，同樣能促進豬卵母細胞的成熟，并能提高所得胚胎的發(fā)育能力。TGFα，在結構上和功能上與EGF 相似，因而也可以與EGF受體結合，誘導豬卵丘細胞的擴散，促進卵母細胞核成熟。NGF 也是豬卵母細胞體外成熟過程中重要的調節(jié)物質之一，能影響豬卵母細胞成熟的動力學，加快進入M11 期。卵母細胞的體外成熟可以為細胞核移植、轉基因等胚胎工程的研究提供大量卵母細胞。在排卵前，由于促性腺激素的作用，卵母細胞完成減數分裂的同時，卵丘卵母細胞復合物（4C4D）的卵丘發(fā)生擴展，4C4D在體外成熟培養(yǎng)過程中也發(fā)生類似的變化。卵丘細胞與卵母細胞、卵丘擴展與卵母細胞成熟之間的關系很復雜。本文主要對卵丘細胞在卵母細胞體外成熟培養(yǎng)過程中的作用加以闡述，進而對卵母細胞的體外成熟培養(yǎng)加以改進。 卵丘細胞與卵母細胞在卵母細胞成熟過程中的結構與功能聯系卵母細胞的發(fā)育成熟與其周圍的卵泡細胞的作用是分不開的。原始卵泡由位于中心的卵母細胞和其周圍的一層扁平卵泡細胞組成。此時卵母細胞處于第一次減數分裂前期，以后隨著卵母細胞開始生長，卵泡細胞迅速增殖，由單層變?yōu)槎鄬?。在這些卵泡細胞內，線粒體和粗面內質網豐富。卵泡細胞和卵母細胞伸出突起穿過透明帶互相聯系。到有腔卵泡時，卵泡細胞分為兩部分：一部分為壁層顆粒細胞，與基膜相連：另一部分為包圍卵母細胞的卵丘細胞。壁層顆粒細胞與卵丘細胞之間，卵丘細胞與卵丘細胞之間以及卵丘細胞與卵母細胞之間，存在著廣泛的縫隙連接。卵泡中的縫隙連接使壁層顆粒細胞、卵丘細胞和卵母細胞共同形成一個結構和功能上的合胞體[1]。處于成熟階段的卵母細胞，卵丘細胞通過大量充滿肌纖維蛋白的帶狀結構緊密包裹著透明帶，保持卵母細胞和卵丘細胞之間縫隙聯系，進行離子交換和一些小的代謝物質的交換。卵母細胞所需的營養(yǎng)物質依賴卵丘細胞提供，兩者間通過縫隙連接進行信號傳導，進而調節(jié)卵母細胞的生長和成熟。裸卵僅能夠利用周圍介質中的丙酮酸和三羧循環(huán)的中間產物，不能直接利用葡萄糖卵丘細胞可將葡萄糖轉化為丙酮酸，為卵母細胞的生長和發(fā)育提供能量。如果兩者間縫隙連接過早破壞，卵母細胞可能停止發(fā)育［2］。卵丘細胞合成的一些蛋白質啟動和抑制卵母細胞生長和成熟。體外成熟過程中卵丘細胞的構成蛋白和新生蛋白都有明顯改變，如果在培養(yǎng)過程中去除卵丘細胞將明顯降低牛卵母細胞成熟、受精和胚胎發(fā)育能力［3］?？傊?，在卵母細胞成熟過程中，卵丘細胞對卵母細胞的發(fā)育是必需的。卵丘細胞與卵母細胞間的作用機制先前認為是一些生長因子如表皮生長因子（EFG）、胰島素樣生長因（IGF1）通過卵丘細胞對卵母細胞行使促成熟影響，但目前證明生長因子對牛和鼠的裸卵也有促成熟作用，卵母細胞也存在IGF1受體mRNA。因而卵丘細胞對卵母細胞成熟的啟動似乎并不起主導作用，應該只能認為是起加強或減弱的輔助作用。這可能是由于牛卵母細胞在體外大部分可自發(fā)恢復減數分裂并發(fā)育至成熟。盡管如此，據報道卵母細胞成熟過程中卵丘細胞對卵母細胞受精后至囊胚的發(fā)育是必不可少的。，添加卵丘細胞(106個／mL)可以促進牛有完整放射冠的卵母細胞的發(fā)育，但在培養(yǎng)液中，添加與COCs中卵丘細胞濃度相同的卵丘細胞數（106個／mL）對于裸卵的發(fā)育無作用，～106個卵丘細胞／mL對于帶有完整縫隙連接的卵母細胞的體外成熟效果最好?？梢娐亚鸺毎怯绊懧涯讣毎w外成熟的重要因素之一。 卵丘擴展對卵母細胞體外成熟的影響在卵母細胞成熟過程中，卵丘細胞也隨之成熟而充分擴展，