【正文】 與卵丘卵母細胞復合體成熟過程中線粒體變化規(guī)律相符。對于卵丘細胞與卵母細胞聯(lián)系的內(nèi)在機制仍需進一步研究。結果還表明，卵泡直徑與卵丘細胞多少具有相關性，卵泡越大，多卵丘細胞卵所占的比率越高［11］。李榮鳳等實驗，以皮層顆粒（CG）單層分布于質(zhì)膜下做為卵母細胞質(zhì)成熟的指標，分別于成熟培養(yǎng)前后觀察各類卵子的CG分布情況。目前的研究中，回收的大部分卵母細胞都有完整的卵丘細胞包圍（致密或分散）。卵丘擴展對卵母細胞核成熟沒有明顯影響。孫興參等實驗中卵丘擴展良好或不好對卵母細胞核成熟沒有明顯的影響，得出豬卵丘細胞擴展不依賴于卵母細胞［4］。m）；,級成熟卵為“卵丘細胞中等擴展”，卵丘細胞向外擴展約,倍于裸卵直徑（200181。 卵丘擴展對卵母細胞體外成熟的影響在卵母細胞成熟過程中，卵丘細胞也隨之成熟而充分擴展，從而中斷了卵丘細胞之間以及卵丘細胞與卵母細胞之間的緊密連接狀態(tài)，進而疏通了這些細胞之間營養(yǎng)物質(zhì)交換的通道。這可能是由于牛卵母細胞在體外大部分可自發(fā)恢復減數(shù)分裂并發(fā)育至成熟。體外成熟過程中卵丘細胞的構成蛋白和新生蛋白都有明顯改變，如果在培養(yǎng)過程中去除卵丘細胞將明顯降低牛卵母細胞成熟、受精和胚胎發(fā)育能力［3］。卵母細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)依賴卵丘細胞提供，兩者間通過縫隙連接進行信號傳導，進而調(diào)節(jié)卵母細胞的生長和成熟。到有腔卵泡時，卵泡細胞分為兩部分：一部分為壁層顆粒細胞，與基膜相連：另一部分為包圍卵母細胞的卵丘細胞。原始卵泡由位于中心的卵母細胞和其周圍的一層扁平卵泡細胞組成。在排卵前，由于促性腺激素的作用，卵母細胞完成減數(shù)分裂的同時，卵丘卵母細胞復合物（4C4D）的卵丘發(fā)生擴展，4C4D在體外成熟培養(yǎng)過程中也發(fā)生類似的變化。Abeydeera的研究表明，EGF 能提高卵母細胞成熟過程中蛋白質(zhì)的合成，從而提高卵母細胞胞質(zhì)的質(zhì)量，IGF 對細胞具有促分裂、分化及促代謝等生物學功能，是一個具有多種生理功能的生長因子，因此，同樣能促進豬卵母細胞的成熟，并能提高所得胚胎的發(fā)育能力。Yashida 等報道在成熟培養(yǎng)基中添加豬卵泡液可顯著提高豬卵母細胞的核成熟率、正常受精率及卵裂率。此外血清的來源不同、批次不同均會導致血清中所含組分及組分間比例不同，從而導致了卵母細胞體外成熟、體外受精和體外培養(yǎng)的不穩(wěn)定。在豬卵母細胞體外培養(yǎng)中，用得最廣泛的是在成熟培養(yǎng)液中添加10%的胎牛血清（Fetal bovine serum，F(xiàn)BS）。但彭禮繁等卻認為LH 對豬卵母細胞體外成熟的促進效果要強于FSH。但葉華虎等研究發(fā)現(xiàn)，受精后胚胎發(fā)育能力NCSU23占明顯優(yōu)勢。成熟培養(yǎng)的基礎培養(yǎng)液不同卵母細胞成熟后GSH 的含量存在顯著差異，IVF后雄原核形成率也不同。成熟基礎液的構成,直接影響到卵母細胞的成熟率及以后的受精和胚胎發(fā)育。Sosnowki 等研究發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)40~48 h 與30~36 h 對豬卵母細胞體外成熟率差異顯著，但是分析染色體核型發(fā)現(xiàn)，隨著體外培養(yǎng)時間的延長，染色體異常率會隨之增加。在這兩種氣相中，CO2 的含量很關鍵。濕度 在IVM 時一般采用的是飽和濕度，目的是減少培養(yǎng)基內(nèi)的水分蒸發(fā)，從而維持培養(yǎng)基中卵母細胞所需要的各種物質(zhì)的濃度及保持滲透壓。C 級：裸卵或卵丘細胞雖為1~2 層或多層，但是不完整，部分裸露。排卵之前，卵丘細胞擴展，合成大量胞外基質(zhì)，并富含透明質(zhì)酸（Hyaluronic：HA），有利于排卵后進入輸卵管，同時保證了卵母細胞正常的受精和胚胎發(fā)育潛力，所以，卵丘細胞的擴張對卵母細胞成熟，特別是卵母細胞胞質(zhì)成熟起著重要作用。Yoon等研究發(fā)現(xiàn)來自3~8mm直徑卵泡的卵母細胞成熟率顯著高于小于3mm的卵泡卵母細胞(91%vs 58%)。 一般而言，卵巢離體的時間要求在2~4h 內(nèi)，時間越短，所獲得的卵母細胞的質(zhì)量越好，體外成熟培養(yǎng)的效果也越好。無黃體期卵巢上的卵母細胞比黃體期卵巢上卵母細胞成熟效果要好。不同的國家和地區(qū)之間，豬的品種必定存在著遺傳因素、飼養(yǎng)環(huán)境和氣候條件等等的因素而帶來品質(zhì)上的差異，從而影響豬卵母細胞的質(zhì)量進而對體外成熟培養(yǎng)也產(chǎn)生一定的影響。透明帶是一層糖蛋白膜，受精時可以結合并誘導精子發(fā)生頂體反應，并阻止多精受精。隨著卵母細胞的成熟，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少，而滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增多，到成熟晚期，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變得很少。細胞核成熟即卵母細胞恢復減數(shù)分裂，發(fā)生生發(fā)泡破裂(genninal vesiclebreakdown，GVBD)并發(fā)育到第一次減數(shù)分裂中期；與此同時，卵母細胞進一步跨越第一次減數(shù)分裂中期，排出第一極體(第一極體含有極微量的細胞質(zhì)，不久就退化)并停止于第二次減數(shù)分裂的中期，直到受精(或激活)后才完成第二次減數(shù)分裂并排出第二極體。核成熟是核膜破裂，同源染色體分離和排出第一極體；胞漿成熟是胞漿內(nèi)各種蛋白組成達到一定水平及線粒體的有效重排。第一部分設計擬定探索出卵丘細胞的存在能夠提高卵母細胞體外培養(yǎng)成熟；第二部分設計是在第一部分的基礎上分析卵丘細胞層數(shù)對母細胞成熟的影響。燕山大學課 程 設 計 說 明 書卵丘細胞對豬卵母細胞體外成熟影響的設計學院（系）： 年級 專業(yè)： 0 學 號： 學生 姓名： 指導 教師： 教師 職稱： 燕山大學課程設計（論文）任務書院（系）： 基層教學單位： 學 號學生姓名專業(yè)（班級）設計題目卵丘細胞對豬卵母細胞體外成熟的影響設計主要內(nèi)容設計要求，,設計合理的操作方式工作量工作計劃 查閱資料 整理文獻 設計方案 撰寫說明書 檢查內(nèi)容準備答辯參考資料[1] 陳大元. 受精生物學[M]. 北京科學出版社, 2000, 51: 147148.[2] 王海, 曾申明, 朱士恩. 培養(yǎng)介質(zhì)、卵丘細胞和卵泡直徑對豬卵母細胞體外成熟的影響[J]. 中國畜牧雜志, 2002, 38: 1516.[3] 錢云, 丁家桐, 劉紅林. 卵母細胞成熟的形態(tài)學特征及其調(diào)控[J]. 國外畜牧科技, 2001, 26: 2630.指導教師簽字基層教學單位主任簽字說明：學生、指導教師、基層教學單位各一份。設計內(nèi)容主要分為兩部分：卵丘細胞存在對豬卵母細胞體外成熟影響的設計；卵丘細胞層數(shù)對豬卵母細胞體外成熟影響的設計。 關鍵詞：卵丘細胞；豬卵母細胞；體外成熟燕 山 大 學 課 程 設 計 說 明 書目 錄第一部分 文獻綜述 1 1 1 12. 影響豬卵母細胞體外成熟的因素 2 2 卵巢來源豬的年齡、品種及健康狀況 2 2 3 3 3 體外成熟培養(yǎng)條件 4 4 4 4 4 5 5 6 6 7 7 8 9 10第二部分 課程設計部分 11 11 卵巢 11 實驗用的儀器